专利名称：：板蓝根黄芪注射用微球及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及治疗动物疾病的医药领域，特别涉及一种有效板蓝根黄芪注射用微球及其制备方法。
背景技术：
：目前，在治疗禽类病毒性疾病方面通常以抗生素治疗为主，这样不但毒副作用较大，如对禽类的肝肾功能有一定的副作用，易造成禽类体内药物残留；同时还将环境污染，且治疗费用较高。黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。其真要成份为俄类、多糖、氨基酸及微量元素。具有增强机体免疫力、利尿、抗衰老、保肝、降压、强心、扩张冠状血管及全身末梢血管、抗茵等作用，是常用的中药之一。祖国医学认为黄芪既可以单独入药，也可以与其它药材联合使用，以达到临床所需的疗效。板蓝根黄芪是一种中药制剂，主要成份为甘草、黄芘、板蓝根、贯叶连翘。板蓝根清热解毒，凉血，利咽，消肿。甘草为豆科多年生草本，药用根茎，有清热解毒、祛痰止咳、緩急止痛、健脾补虚、补中益气的功能；黄芪可以补气固表，利尿，托毒排浓，敛痴生肌；贯叶连翘性凉p未苦，清心泻火，去上焦各种热症，适用于温病初起、头痛、发热、烦渴，以及热毒郁结引起的痈痴肿痛、丹毒、斑渗等。若采用中药原料制成片剂、散剂等，由于有的中药材水溶性活性成分体内半衰期较短，需频繁给药，因此使用不便；同时吸收效果欠佳，治疗效果不够理想。因此，如何提供一种防治效果显著、工艺简单的板蓝根黄芪注射用微球及其制备方法，是该
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科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容本发明目的在于提供一种全新的緩释、高生物利用度的板蓝根黄芪注射用微球。本发明的另一目的在于提供这种板蓝根黄芪注射用微球的制备方法。本发明是通过以下技术方案来实现的。一种板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于包括5~65%的由中药材的提取物为活性成分和微球重量的35~90%的分子量范围在4，000-9000，OOO之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，其中药材的组成按重量％配比为板蓝根15%~50%,甘草8%~20%，贯叶连翘12%~40%.，黄芪15%~50%。所述活性成分原药材的优选重量百分含量为板蓝根30%,甘草10%,贯叶连翘25%,黄芪35%。所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇S吏、聚邻酯、聚内酯、聚肝、聚鞋基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸.聚乙二醇其中的一种或一种以上混合。所述的药用高分子辅料优选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物其中的一种或一种以上混合。-所述药用高分子辅料为聚丙交酯-乙交酯；所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在9000~13000道尔顿之间；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60~60:40之间。上述药物成分配比为所使用生药的重量％配比，将其制成制剂需要对所述板蓝根、甘草、贯叶连翘、黄芪等进一步的单独或混合提取加工制成提取物与适当辅料制成凝胶片。其中的提取方法通常包括水提取法、水提醇沉法或微波提取法等。为了便于理解，将本
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现有的提取方法举例描述如下板蓝根微波提取法取板蓝根粉碎后，放火烧瓶，并将此烧瓶放人微波反应器中，乙醇回流提取，调整微波功率进行提取，收集提取液，得板蓝根提取物。甘草水提法取甘草药材，20目筛粉碎，加水提取两次，第一次加9~IO倍量的水浸泡，加热提取1.5小时，第二次加5~7倍量水，加热提取l小时，合并提取液，适当浓缩，力口95%乙醇，使含醇量到达50-70%，浓缩回收乙醇，得甘草提取物。贯叶连翘的乙醇提取法取贯叶连翘药材，20目筛粉碎，力口7-9倍量50%浓度的乙醇提取三次，加热回流8小时，合并提取液，浓缩回收乙醇，得贯叶连翘提取物。黄芪水提取醇沉淀法取黄芪，20目筛粉碎，加水提取，滤过，适当浓缩后采用乙醇进行沉淀，上清液适当浓缩后再醇沉，上清液回收乙醇，浓缩得黄芪提取物。除上述药材单独提取外，所述板蓝根、甘草、贯叶连翘还可以混合提取，主要为取经粉碎的板蓝根、甘草、贯叶连翘药材，沸氷煮提，滤过，合并滤液，并将滤液适当浓缩；在浓缩液中加入乙醇进行醇沉，l争置，上清液回收乙醇，浓缩成浸膏，得药材提取物。本发明所述板蓝根黄芙注射用微球直径为l~250jam,由微球总重量35~90%的分子量范围在4,000-9000,OOO之间的可生物降解的药用高分子辅冲牛组成。法制成，实施步骤包括用二氯曱烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氲呋喃、水醋酸以及由它们所组成的混合酸:l巴药利^是耳又物和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1~30%,有机相采用的乳化剂为HLB-4.56.0的非离子型乳化剂，用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮，用量为有机相的O.Ol~12%;另外聚曱基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧曱基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为O.Ol~10.0,水相中的乳化剂为HLB:14.0~15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01~12%，有机相与水相的体积比为1:4~100;将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，充分乳化后，过筛分离所形成的微球，干燥即3曰付。本发明所述的板蓝根黄芪微球是将制好的微球无菌粉末先在无菌的0.9%的生理盐水溶剂中混悬均匀后肌注给药进行治疗的。大多数传统剂型的释药过程均按一级动力学进行，其药物的血药浓度有可能低子最低有效血药浓度和在治疗浓度内维持时间短的缺点。为达到治疗目的和降低副作用常采取多次服药方式，这样使得患者服药的依从性下降。缓释制剂正是克服了传统制剂的不足，提供了平稳、持久的血药浓度。本发明的有益效果是将板蓝根、甘草、贯叶连翘、黄芪药材提:取后与适当辅料制成微球，可以达到緩慢地非恒速释放，减少服用次数，提高患者顺应性的目的。运用先进的提取工艺分离药材中有效单体，提取后与适当辅料制成微球。使中草药中的有效成分緩慢释放。组方中提取的有效成分能直接阻断病毒核酸的形成，抑制病毒的复制和增殖，并可增强机体的体液免疫和细胞免疫，同时该发明药物具有诱导机体产生干扰素，促进抗体形成,增强巨噬细胞对病原体的吞噬作用，从而有效杀灭病毒。本发明药物体外对传染性支气管炎病毒有直接的杀灭作用；对人工感染传染性支气管炎病毒的模型亦有显著的保护和治疗作用。临床研究证实本发明药物对传染性支气管炎病毒有良好的治疗效果，尤其能迅速解除病毒感染引起的发热、改善症状、促进病禽恢复采食、促进产蛋率和蛋品质恢复，一般用药后第二天临床症状迅速緩解，3~5天疾愈，疗效非常显著。该药物能有效提高机体免疫力，抗病毒能力强，临床主要用于治疗禽传染性法氏嚢病、非典型新城疫、传染性支气管炎等病毒性疾病。组方合理，清热途径多样化，充分考虑了禽类体温调节的特点，散热、祛瘟，减轻机体的不适感，从而在很大程度上緩解疾病的症状，增加病禽食欲，促进病禽康复。归纟内^口下(1)为临床开发出一种防治禽类病毒性疾病、提高.机体抗病力的新制剂。(2)组方合理，吸收利用率高，緩释药效持久，抗病毒能力强，所选药物均为高效药物。(3)工艺先进，制备方法简单，制剂稳定，药效持久，贮存期长。(4)药物来源广泛、成本低，安全、无毒副作用，不易产生耐药性，符合国际卫生检验标准。特别用于治疗禽类传染性法氏嚢病、非典型新城疫、传染性支气管炎等效果显著。具体实施例方式以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下实施例l取板蓝根300g，甘草100g,贯叶连翘250g,黄芪350g,将经粉碎的甘草、贯叶连翘，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至卯Oml,加入95%乙醇，使醇浓度达到70%,静置1224小时，滤过，回收乙醇；继续浓缩成甘草贯叶连翘提取物；将经賴、碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小时、l小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，力。95%乙醇使醇浓度为60%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，力。95%乙醇使醇浓度为80%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，并继续浓缩成黄芪提取物；按量取板蓝根加5倍量水，回流提取5小时，收集挥发油。包括5~65%的由中药材的提取物为活性成分和微球重量的35~90%的分子量范围在4，000~9000,OOO道尔顿之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚_3_羟基丁酸酯、聚乳酸—聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸.聚乙二醇其中的一种或一种以上混合。微球的制备方法将上述100mg药材提取物、200mg聚丙交S旨-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，选择聚丙交酉旨-乙交酯其分子量在900013000道尔顿之间；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60~60:40之间；用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有3001111内含3.50}1化=14乳化剂的10。/。PVA的三颈瓶中，充分乳化l小时后，在30。C0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30。C真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在3(TC灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装，采用乳化分散法制成微球；测得粒径l50jum,平均粒径13.26nm，灭菌，分装。实施例2取板蓝根149g,甘草122g,贯叶连翘314g，黄芪415g，将经粉碎的甘草、贯叶连翘，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至900ml，加入95%乙醇，使醇浓度达到70%,静置1224小时，滤过，回收乙醇；继续浓缩成甘草贯叶连翘提取物；将经并分碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，4衣次提耳又2小时、l小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，加95%乙醇使醇浓度为60%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，力卩95%乙醇使醇浓度为80%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，并继续浓缩成黄芪提取物；按量取板蓝根加5倍量水，回流提取5小时，收集挥发油。微球的制备方法将上述100mg药材提取物、200mg聚丙交S旨-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，选择聚丙交酯-乙交酯其分子量在9000~13000道尔顿之间；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60-60:40之间；用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有300ml内含3.5Ghlb:14乳化剂的10%PVA的三颈瓶中，充分乳化l小时后，在30。C0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30。C真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在30。C灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装，采用乳化分散法制成微球；测得粒径l50jum,平均粒径13.26jum,灭菌，分装。其它同实施例l。实施例3取板蓝根331g,甘草165g,贯叶连翘312g，黄芪192g，将经粉碎的甘草、贯叶连翘，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小时，^^.并煎煮液，滤过，滤液浓缩至900ml，加入95%乙醇，使醇浓度达到70%,静置1224小时，滤过，回收乙醇；继续浓缩成甘草贯叶连翘提取物；将经粉碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小时、l小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，加95%乙醇使醇浓度为60%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，力p95%乙醇使醇浓度为80%,静置12~24小时，滤过，滤液回收乙醇，并继续浓缩成黄芙提取物；按量取板蓝根加5倍量水，回流提取5小时，收集挥发油。微球的制备方法将上述100mg药材提取物、200mg聚丙交酯-乙交酯溶于3ml二氯曱烷中，用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有300ml内含3.5GM^14乳化剂的10。/。PVA的三颈瓶中，充分乳化l小时后，在3(TC0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30。C真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在30。C灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装，采用乳化分散法制成微球；测得粒径l50nm,平均粒径13.26iim，灭菌，分装。其它同实施例l。应用实例150只15日龄雏鸡(经过健康检查无菌)分为A、B、C、D、E共5组，B、C、D、E组经过人工感染0.3ml传染性支气管炎病毒强毒攻毒后作实验。A组为健康组，不感染病毒，不给药；B组阴性对照组，感染病毒，不给药；C组为本发明药物组合物低剂量组，按0.1g/鸡/天注射；D组为药物组合物高剂量组，按0.2g/鸡/天注射；E组为黄芪多糖注射液组(大连三仪有限公司)，按0.2g/鸡/天拌料饲喂。结果表明，采用本发明板蓝根黄芪注射用微球治疗传染性支气管炎病毒病有着明显的疗效。本发明药物注射用微球对比现有药物实验结果如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本次试验结果表明，本发明药物组合物低、高剂量治疗组与对照组差异非常显著(P〈0.01),说明本发明药物组合物对病毒引起的传染性支气管炎病毒病具有显著的治疗作用；特别是高剂量应用明显优于"黄芙多糖注射液"治疗组疗效(P<0.01)。上述参照实施例对板蓝根黄芪注射用微球及其制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。权利要求1、一种板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于包括5～65％的由中药材的提取物为活性成分和微球重量的35～90％的分子量范围在4,000～9000,000之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，其中药材的组成按重量％配比为板蓝根15％～50％，甘草8％～20％，贯叶连翘12％～40％，黄芪15％～50％。2、根据权利要求l所述的板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于所述活性成分原药材的优选重量百分含量为板蓝根30%，甘草10%,贯叶连翘25%，黄芪35%。3、根据权利要求l所述的板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸.聚乙二醇其中的一种或一种以上混合。4、根据权利要求l所述的板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于所述的药用高分子辅料优选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物其中的一种或一种以上混合。5、根据权利要求l所述的板蓝根黄芪注射用微球，其特征在于所述药用高分子辅料为聚丙交酯-乙交酯；所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在900013000道尔顿之间；聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40:60~60:40之间。6、一种根据权利要求l所述的板蓝根黄芪注射用微'球的制备方法，即采用乳化分散法制成，其特征在于实施步骤包括用二氯曱烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氬呋喃、水醋酸以及由它们所组成的混合酸把药材提取物和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有^/L溶剂中的重量体积百分数为l~30%,有机相采用的乳化剂为HLB=4.5~6.0的非离子型乳化剂，用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮，用量为有机相的O.Ol~12%;另外聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧曱基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为O.Ol~10.0,水相中的乳化剂为HLB;14.0~15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01~12%，有机相与水相的体积比为1:4~100;将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，乳化，然后过筛，干燥即得。全文摘要本发明涉及一种板蓝根黄芪注射用微球及其制备方法，包括重量比为5～65％的由中药材的提取物为活性成分和微球重量的35～90％的分子量范围在4,000～9000,000之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，其中药材组成按重量％配比为板蓝根15％～50％，甘草8％～20％，贯叶连翘12％～40％，黄芪15％～50％；并采用乳化分散法制成微球。有益效果是(1)为临床开发出一种防治禽类病毒性疾病、提高机体抗病力的新制剂。(2)组方合理，抗病毒能力强。(3)工艺先进，制剂稳定，贮存期长。(4)药物来源广泛，无毒副作用，不易产生耐药性，符合国际卫生检验标准。特别用于治疗禽类传染性法氏囊病、非典型新城疫、传染性支气管炎等效果显著。文档编号A61K47/34GK101352486SQ20081005414公开日2009年1月28日申请日期2008年8月15日优先权日2008年8月15日发明者王连民,田杏芳申请人:天津生机集团股份有限公司