一种商品化定量检测试剂盒评价方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，特别是设及一种基于标准物质和不确定度计算的商品 化定量检测试剂盒评价方法。
【背景技术】
[0002] 试剂盒是指能完成一个特定实验的必需的试剂/器材的集合。试剂盒具有简单、 快速、方便，适于现场操作等特点，对基体分析操作技能要求降低，更易实现流水化、标准化 管理，有效排除了实验人员主观因素的影响，降低实验过程中的偶然误差，被广泛应用于检 测领域。
[0003] 近年，试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势，2005年全球市场销售 额超过200亿美元，且W 15%左右的速度逐年增长。一方面是试剂盒的迅猛发展，而另一方 面试剂盒市场良莽不齐的现象愈加明显，试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善，没 有相应的标准或质量评价政策。且其灵敏度、稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需 要，采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑。
[0004] 为解决试剂盒性能评价问题，许多厂家和科研机构进行了尝试，包括采用标准溶 液、标准品进行准确度验证、加标回收率验证、重复性验证等；也有单位提出采用多家实验 室比对的方法对试剂盒性能进行验证。然而，目前提出的评价方法中由于未采用国家有证 标准物质，因此其标准品、标准溶液本身的标准值的准确度无法保证，也无法判断该标准品 或标准溶液与试剂盒的互通性、无法判断该标准品是否与样本之间是否具有基质效应，测 定结果无法向上溯源，容易造成不同实验室对相同试剂盒评价结果的不一致；同时，在数据 处理方法上目前多数统计方法在计算时仅反映出数据的离散性，实验环节中许多器具及实 验条件的系统误差未进行计算，造成评价结果可能不准确。
[0005] 因此，迫切需要建立一种准确可靠、可被广大生产商和科研工作者接受的试剂盒 检测结果准确度、重复性、灵敏度、交叉反应性等性能指标及其与特定标准物质互通性的评 价方法。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是建立一种准确可靠、可被广大生产企业及科研工作者 接受的商品化定量检测试剂盒评价方法。
[0007] 一种商品化定量检测试剂盒评价方法，为采用国家有证标准物质对试剂盒性能指 标，包括准确度、精密度、检出限、定量限、线性、特异性、基质效应与互通性，进行评价计算； 在计算过程中对准确度、检出限、定量限、特异性、基质效应的评价结果进行不确定度评定； 根据不确定度的大小对指标测定结果与声称结果的符合性进行判定；
[000引所述准确度评价方法包括如下步骤：
[0009] (1)与标准物质或参考方法比对
[0010] 与标准物质比对：
[OCm] 采用试剂盒对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISCVIEC Guide 98-3:2008》 国际标准的要求对试剂盒测定结果的扩展不确定度进行评定，该扩展不确定度应为95%置 信水平下的扩展不确定度U ;当商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度能够满足 检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式（1)计算的E。值不大于1时，视为准确 度細足要求；
[0012]
【主权项】
1. 一种商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述方法为采用国家有证标准 物质对试剂盒性能指标，包括准确度、精密度、检出限、定量限、线性、特异性、基质效应与互 通性，进行评价计算；在计算过程中对准确度、检出限、定量限、特异性、基质效应的评价结 果进行不确定度评定；根据不确定度的大小对指标测定结果与声称结果的符合性进行判 定； 所述准确度评价方法包括如下步骤： (1) 与标准物质或参考方法比对 与标准物质比对： 采用试剂盒对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际 标准的要求对试剂盒测定结果的扩展不确定度进行评定，该扩展不确定度应为95%置信水 平下的扩展不确定度U;当商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度能够满足检测 方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式（1)计算的￡"值不大于1时，视为准确度满 足要求；
其中： i:商品化定量检测试剂盒检测结果的算术平均值； ^:标准物质标准值，由使用的标准物质证书提供； U:商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度，该不确定度应为95%置 信水平下的扩展不确定度； %:标准物质定值结果的扩展不确定度，由使用的标准物质证书提供； 与参考方法比对： 采用试剂盒与参考方法分别对同一份样本进行至少6次测试，按照《ISO/IEC Guide98-3:2008》国际标准的要求对试剂盒测定结果及参考方法测定结果的扩展不确定度 U和％进行评定，该扩展不确定度应为95%置信水平下的扩展不确定度，参考方法应当为 国际标准、国家标准、行业标准或其它经过验证的方法，参考方法的扩展不确定度应当小于 商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展不确定度，商品化定量检测试剂盒检测结果的扩展 不确定度应当满足检测方法预期的准确度和精密度要求，且按照公式（2)计算得到的检测 方法结果与参考方法结果之间的EJ：!不大于1时，视为准确度满足要求；
其中： x:商品化定量检测试剂盒检测结果的平均值； X(1:参考方法的检测结果平均值； U:商品化定量检测试剂盒检测结果平均值的扩展不确定度； %:参考方法的检测结果的扩展不确定度； (2) 与厂家声称的最大允许误差对比 在预期检测范围的高、中、低水平分别采用有证标准物质对试剂盒检测结果准确度进 行评价；高水平为预期检测范围3/4处、中水平为预期检测范围1/2处、低水平为预期检测 范围1/4处，每个水平标准物质采用商品化定量检测试剂盒至少分析三次，并计算检测范 围高、中、低三个水平的误差和扩展不确定度； 误差计算公式为： E=M-Ms 其中： E:误差； M:三次分析测定结果的算术平均值； Ms:标准物质的标准值； 按照《ISO/IECGuide98-3:2008》国际标准的要求评定试剂盒测定结果的扩展不确定 度UM，标准物质的扩展不确定度UMs由证书给出，误差的标准合成不确定度通过下式计算：
其中， UC；E 误差的扩展不确定度； UM一一试剂盒测定结果的扩展不确定度； UMs 标准物质的扩展不确定度； 与厂家声称指标或法规、标准要求的符合性判定： 厂家声称的最大允许误差或法规、标准要求的最大允许误差为MPEV; 当试剂盒检测结果的扩展不确定度U< 1/3MPEV时，忽略检测结果本身扩展不确定度 对合格性判定的要求，如果检测结果绝对误差E在其最大允许误差限内时，S卩|E|SMPEV 时，判为满足技术要求，为符合，否则为不符合； 当试剂盒检测结果的扩展不确定度U>1/3MPEV时，考虑测量不确定度因素的影响，如 果检测结果的最大绝对误差E的绝对值小于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对 误差的扩展不确定度U之差时判为符合，即： E|彡MPEV-U95，则为符合； 如果检测结果的最大绝对误差E的绝对值大于或等于其最大允许误差的绝对值MPEV与绝对误差的扩展不确定度U95之和时，判为不符合，即： E|彡MPEV+U95，则为不符合； 当检测结果的最大绝对误差既不符合"符合判定"又不符合"不符合判定"时，为处于 待定区，这时不能下符合或不符合的结论，即为待定区； mpev-u〈|e|〈mpev+u,待定区； 此时，通过改善环境条件与增加测量次数措施，以降低测量不确定度U，使满足与最大 允许误差绝对值MPEV之比小于或等于1 : 3的要求，然后对检测结果的最大绝对误差重新 进行评定。
2.根据权利要求1所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述精密度 评价包括如下步骤： 采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行精密度评价时，标准物质 不经过样品前处理过程， 根据公式（3)计算精密度：
…) 式中： R-相对标准偏差，以百分数表示； Xi-第i次商品化定量检测试剂盒分析样品的结果； j一n次测定结果的平均值。
3. 根据权利要求2所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述重复性 评价包括如下步骤： 采用试剂盒对同一有证标准物质进行至少6次测试，在进行重复性评价时，标准物质 应当经过规定的样品前处理过程，按照公式（3)计算相对比标准偏差作为重复性评价的表 征。
4. 根据权利要求3所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于： 所述检出限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方 法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，将3倍空白响应值代入通过国 家有证标准物质绘制的标准曲线计算出的浓度作为检测限，当试剂盒实际测定的对象与试 剂盒声称的分析物不一致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析 物的浓度单位进行表征； 所述定量限评价包括如下步骤：选择至少3份空白样品，用待评价的试剂盒的检测方 法对空白样品和经梯度稀释的国家有证标准物质进行测定，同时计算3份空白样品测定响 应值的标准偏差，将3份空白样品浓度测定结果的响应平均值加上10倍响应值的标准偏 差，将响应值计算结果代入通过国家有证标准物质绘制的标准曲线中计算出对应的浓度 值，作为试剂盒定量限的评价结果；当试剂盒实际测定的对象与试剂盒声称的分析物不一 致时，应当将实际测定对象的浓度换算为分析物的浓度，并以分析物的浓度单位进行表征。
5. 根据权利要求4所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述线性或 范围的评价方法包括如下步骤： 以多水平的有证标准物质考察线性或范围，当采用单水平标准物质通过稀释获得多水 平标准溶液时，基质效应应当相同；标准溶液包括一定的梯度，至少包括5个浓度水平；将 响应值和溶液标准值进行线性拟合，计算线性相关系数进行线性评价，有必要时，对线性拟 合系数的不确定度进行评定； 在进行范围评价时，在检测范围内标准曲线不存在拐点，具有范围意义的数据点在统 计学上能够与相邻数据点区分。
6. 根据权利要求5所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述特异性 评价方法包括如下步骤：采用试剂盒对样本中可能存在的交叉反应物的有证标准物质进行 测定，交叉反应物的浓度应涵盖实际测定中可能的浓度水平，每个水平至少进行3次测试， 特异性评价结果以交叉反应系数、交叉反应函数或要求的方式给出。
7. 根据权利要求6所述的商品化定量检测试剂盒评价方法，其特征在于：所述互通性 评价方法包括如下步骤： 互换性包括两个方面：试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性；另一个是两个或两 个以上不同试剂盒测定结果的互换性； 试剂盒自带标准品与其它标准品的互换性评价： 方法一：使用试剂盒自带标准品和浓度接近的其它标准品同时绘制标准曲线后，测量 实际带有基质的样本，样本应当能够覆盖整个检测范围，至少10个样品；每个程序每一样 本至少测量