法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是阿达木单 抗（HUMIRAtm) 〇
12. 如权利要求1-8任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF a药物是依那西普 (ENBRELtm)。
13. 如权利要求1-8任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是 ClMZ丨A? (赛妥珠单抗）。
14. 如权利要求1_13任何一项所述的方法，其特征在于，所述标记的-TNF a是焚光标 记的TNFa。
15. 如权利要求1-14任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的抗-TNFa药物是 定量的。
16. 如权利要求1-15任何一项所述的方法，其特征在于，所述第一复合物先被洗脱，然 后是游离的标记TNFa。
17. 如权利要求1-16任何一项所述的方法，其特征在于，所述第二复合物先被洗脱，然 后是游离的标记抗-TNF a药物。
18. 如权利要求1-17任何一项所述的方法，其特征在于，所述分子大小排阻层析是分 子大小排阻高效液相层析（SE-HPLC).
19. 如权利要求1-18任何一项所述的方法，其特征在于，所述自身抗体选自下组：人 抗-小鼠抗体（HAMA)、人抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。
20. 如权利要求1-19任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的自身抗体是定量 的。
21. 如权利要求1-20任何一项所述的方法，其特征在于，所述第一和第二样品均获自 用所述抗-TNF a药物治疗期间的所述对象。
22. -种在接受抗-TNF a药物治疗的对象中最优化所述抗-TNF a药物的治疗和/或 减轻其毒性的方法，所述方法包括： (a) 测定所述对象第一样品中的所述抗-TNF a药物水平； (b) 测定所述对象第二样品中的所述抗-TNF a药物的自身抗体的水平；和 (c) 根据所述抗-TNF a药物和所述自身抗体的水平，确定所述对象的后续疗程，从而 最优化所述抗-TNF a药物的治疗和/或减轻其毒性。
23. 如权利要求22所述的方法，其特征在于，当所述抗-TNF a药物的所述水平高和所 述自身抗体的所述水平低时，所述后续疗程包括共同给予免疫抑制药物和抗-TNFa药物。
24. 如权利要求22所述的方法，其特征在于，当所述抗-TNF a药物的所述水平中等和 所述自身抗体的所述水平低时，所述后续疗程包括提高所述抗-TNF a药物的水平和同时 给予免疫抑制药物。
25. 如权利要求22所述的方法，其特征在于，当所述抗-TNF α药物的所述水平中等和 所述自身抗体的所述水平中等时，所述后续疗程包括给予不同的抗-TNF α药物。
26. 如权利要求22所述的方法，其特征在于，当所述抗-TNF α药物的所述水平低和所 述自身抗体的所述水平高时，所述后续疗程包括给予不同的抗-TNF α药物。
27. 如权利要求25或26所述的方法，其特征在于，给予阿达木单抗 (HUMIRAtm)代替英夫利昔单抗（REMICADE?)。
28. 如权利要求22-27任何一项所述的方法，其特征在于，采用以下试验测量所述 抗-TNF α药物，所述试验包括： (i) 使所述第一样品与一定量的标记TNFa接触，形成含有所述标记TNFa和所述 抗-TNF α药物的第一复合物；和 (ii) 用分子大小排阻层析检测所述第一复合物，从而测量所述抗-TNFa药物的所述 水平。
29. 如权利要求22-28任何一项所述的方法，其特征在于，采用以下试验测量所述自身 抗体，所述试验包括： (i) 使所述第二样品与一定量的标记抗-TNFa药物接触，形成含有所述标记抗-TNFa 药物与所述自身抗体的第二复合物；和 (ii) 用分子大小排阻层析检测所述第二复合物，从而测量所述自身抗体的水平。
30. 如权利要求22-29任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物选自下 组：REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）、C丨MZIA? (赛妥珠单抗）和其组合。
31. 如权利要求22-29任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是英夫利 昔单抗（REMICADE?)。
32. 如权利要求22-29任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是阿达木 单抗（HUMIRAtm) 〇
33. 如权利要求22-29任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是依那西 普（ENBRELtm)。
34. 如权利要求22-29任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是 CIMZIA? (赛妥珠单抗）。
35. 如权利要求22-34任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的抗-TNF α药物是 定量的。
36. 如权利要求22-35任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的自身抗体是定量 的。
37. 如权利要求22-36任何一项所述的方法，其特征在于，所述第一和第二样品均是血 清样品。
38. 如权利要求22-37任何一项所述的方法，其特征在于，所述第一和第二样品均获自 用所述抗-TNF α药物治疗期间的所述对象。
39. 如权利要求22-38任何一项所述的方法，其特征在于，所述自身抗体选自下组：人 抗-小鼠抗体（HAMA)、人抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。
40. 如权利要求23或24所述的方法，其特征在于，所述免疫抑制药物选自下组：氨甲 喋呤、硫唑嘌呤，其代谢产物和其组合。
41. 一种参比内部对照检测含有或怀疑含有抗-TNFa药物的样品中所述抗-TNFa药 物的存在或水平的方法，所述方法包括： (a) 使一定量的标记TNFa和一定量的标记内部对照接触所述样品，形成所述标记 TNFa与所述抗-TNFa药物的复合物； (b) 用分子大小排阻层析检测所述标记TNFa和所述标记内部对照； (c) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度图像计算所述标记TNFa峰 曲线下面积的积分； (d) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度图像计算所述标记内部对照 峰曲线下面积的积分； (e) 用所述标记TNFa的量除以所述标记内部对照的量，测得第一比率； (f) 用步骤（c)测得的积分除以步骤⑷测得的积分，测得第二比率；和 (g) 比较步骤（e)测得的第一比率与步骤（f)测得的第二比率，从而参比内部对照确定 所述抗-TNF a药物的存在或水平。
42. 如权利要求41所述的方法，其特征在于，步骤（e)测得的第一比率为约80-约100。
43. 如权利要求41所述的方法，其特征在于，步骤（e)测得的第一比率为约100.
44. 如权利要求41-43任何一项所述的方法，其特征在于，所述标记内部对照是生物胞 素 -Alexa 488〇
45. 如权利要求41-44任何一项所述的方法，其特征在于，分析样品中所述标记内部对 照为每100 μ L约1-约25ng。
46. -种在接受抗-TNF α药物治疗的对象中最优化所述抗-TNF α药物治疗剂量的方 法，所述方法包括： 根据权利要求41-44任何一项所述方法测得的所述第一比率与第二比率的比较，确定 所述对象的所述抗-TNFa药物的后续剂量，从而最优化抗-TNFa药物的治疗剂量。
47. 如权利要求46所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：当所述第一比率约 100 :1和所述第二比率低于约95 :1时，提高抗-TNFa药物的后续剂量，从而最优化所述 抗-TNF α药物的治疗剂量。
48. 如权利要求41-47任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物选自下 组：REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）、CIMZ丨A? (赛妥珠单抗）和其组合。
49. 如权利要求41-47任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是英夫利 昔单抗（REMICADE?)。
50. 如权利要求41-47任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是阿达木 单抗（HUMIRAtm) 〇
51. 如权利要求41-47任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是依那西 普（ENBRELtm)。
52. 如权利要求41-47任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是 CIMZIA? (赛妥珠单抗）。
53. 如权利要求41-52任何一项所述的方法，其特征在于，所述标记TNF α是荧光标记 的 TNF α。
54. 如权利要求41-53任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的标记抗-TNF α和 标记内部对照是定量的。
55. 如权利要求41-54任何一项所述的方法，其特征在于，所述复合物先被洗脱，然后 是游离的标记TNFa。
56. 如权利要求41-55任何一项所述的方法，其特征在于，所述样品是血清。
57. 如权利要求41-56任何一项所述的方法，其特征在于，所述样品获自接受所述 抗-TNF α药物治疗期间的对象。
58. 如权利要求41-57任何一项所述的方法，其特征在于，所述分子大小排阻层析是分 子大小排阻高效液相层析（SE-HPLC).
59. -种参比内部对照检测含有或怀疑含有自身抗体的样品中所述抗-TNF α药物自 身抗体的存在和水平的方法，所述方法包括： (a) 使一定量的标记抗-TNFa药物和一定量的标记内部对照与所述样品接触，形成所 述标记抗-TNF α药物与所述自身抗体的复合物； (b) 用分子大小排阻层析检测所述标记抗-TNFa药物和所述标记内部对照； (c) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度图像计算所述标记TNFa峰 曲线下面积的积分； (d) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度图像计算所述标记内部对照 峰曲线下面积的积分； (e) 将所述标记抗-TNFa药物的含量除以所述标记内部对照的含量，测得第一比率； (f) 除以步骤（c)和步骤⑷得到的积分，测得第二比率；和 (g) 比较步骤（e)测得的第一比率与步骤（f)测得的第二比率，从而参比内部对照测定 所述自身抗体的存在或水平。
60. 如权利要求59所述的方法，其特征在于，步骤（e)测得的第一比率为约80-约100。
61. 如权利要求59-61任何一项所述的方法，其特征在于，步骤（e)测得的第一比率为 约 100.
62. 如权利要求59-61任何一项所述的方法，其特征在于，所述标记内部对照是生物胞 素 -Alexa 488〇
63. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，分析样品中所述标记内部对 照为每100 μ L约50-约200pg。
64. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物选自： REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）、CIMZIA? (赛妥珠单抗）和其组合。
65. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是英夫利 昔单抗（REMICADE?)。
66. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是阿达木 单抗（HUMIRAtm) 〇
67. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF α药物是依那西 普（ENBRELtm)。
68. 如权利要求59-62任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNFa药物是 CIMZIAi' (赛妥珠单抗）。
69. 如权利要求59-68任何一项所述的方法，其特征在于，所述测量的标记抗-TNF a药 物和标记内部对照是定量的。
70. 如权利要求59-69任何一项所述的方法，其特征在于，所述复合物先被洗脱，然后 是游离的标记抗-TNF a药物。
71. 如权利要求59-70任何一项所述的方法，其特征在于，所述样品是血清。
72. 如权利要求59-71任何一项所述的方法，其特征在于，所述样品获自接受所述 抗-TNF a药物治疗期间的对象。
73. 如权利要求59-72任何一项所述的方法，其特征在于，所述分子大小排阻层析是分 子大小排阻高效液相层析（SE-HPLC).
74. 如权利要求59-73任何一项所述的方法，其特征在于，所述自身抗体选自下组：人 抗-小鼠抗体（HAMA)、人抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。
75. -种检测样品中抗-TNF a药物的存在或水平和抗-TNF a药物自身抗体的存在或 水平的试剂盒，所述试剂盒包括： (a) 含一定量的标记TNF a的第一检测底物； (b) 含一定量的标记抗-TNF a药物的第二检测底物； (c) 任选的第三检测底物，其含一定量的标记TNFa和一定量的标记内部对照； (d) 任选的第四检测底物，其含一定量的标记抗-TNFa药物和一定量的标记内部对 昭. (e) 任选的用于提取对象样品的工具；和 (f) 任选的使用该试剂盒的说明书小册。
76. 如权利要求75所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测所述标记 TNFa、所述标记抗-TNFa药物和/或所述标记内部对照所用的手段。
77. 如权利要求76所述的试剂盒，其特征在于，所述检测手段包括：荧光标记检测、 UV-幅射光检测或放射性碘暴光检测。
78. 如权利要求75-77所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括分子大小排阻高 效液相层析（SE-HPLC)仪器。
79. 如权利要求75-78所述的试剂盒，其特征在于，所述第一、第二、第三和第四检测底 物选自下组：硝化纤维素、硅胶和分子大小排阻层析的介质。
80. 如权利要求75-79所述的试剂盒，其特征在于，所述抗-TNFa药物选自下组： REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）、CIMZIA? (赛妥珠单抗）和其组合。
81. 如权利要求75-80任何一项所述的方法，其特征在于，所述标记TNF a是荧光标记 的 TNF a。
82. 如权利要求75-81任何一项所述的试剂盒，其特征在于，所述样品是血清。
83. 如权利要求75-82所述的试剂盒，其特征在于，所述样品获自接受所述抗-TNFa药 物治疗期间的对象。
84.如权利要求75-83所述的试剂盒，其特征在于，所述自身抗体选自下组：人抗-小 鼠抗体（HAMA)、人抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。
【专利摘要】本发明提供检测和测量样品中抗-TNFα药物治疗和自身抗体的存在或水平的方法。本发明可用于最优化治疗和监测接受抗-TNFα药物治疗患者以检测抗药物的自身抗体(如HACA和/或HAHA)的存在或水平。
【IPC分类】G01N33-50, G01N33-564
【公开号】CN104634955
【申请号】CN201510067719
【发明人】S·辛格, S·L·王, L·奥尔穆德
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2010年10月26日
【公告号】CA2778454A1, CN102695955A, CN102695955B, EP2494352A1, US8574855, US8865417, US20120329172, US20140057367, US20150024404, WO2011056590A1