2509 (2009)，Portelius 等，Acta Neuropathol. 120:185(2010)和 Wang 等，J. Biol. Chem. 271:31894 (1996)中。
[0056] 对于样品中单体Αβ的量的基于免疫亲和的测量来说，在测定法中使用的至少一 种抗体应该辨别单体和寡聚体Αβ。适合的抗体包括结合Αβ的C-端区域（即29-43位氨 基酸残基）中的表位的抗体，优选为C-端的末端特异性抗体。由于可对单体和寡聚体A β 进行区分的构象变化以及与其相关的隐藏的肽-肽相互作用和空间位阻，单体A β上存在 的某些表位不存在于寡聚体A β上或者在其上被掩盖（masked)，并且特异性针对单体A β 的C-端区域中的表位的抗体一般不结合寡聚体Αβ。因此，这样的抗体允许基本上只检测 包含单体和寡聚体Αβ两者的样品中的单体Αβ。C-端末端特异性抗体可以特异性针对 例如A β 37、A β 38、A β 39、A β 40、A β 41或A β 42。优选的C-端末端特异性抗体包括特异 性针对A β 40的C-端的抗体（例如单克隆抗体2G3)和特异性针对A β 42的C-端的抗体 (例如单克隆抗体21F12)。这样的C-端表位特异性抗体可以单独地或与一种或多种其他 C-端表位特异性抗体（例如末端特异性针对40373038、4039、404〇、4041、4042或 A β 43的一种或多种抗体）组合使用，以结合样品中的A β。
[0057] 在夹心测定法中，辨别单体和寡聚体形式的一种或多种抗体可以是捕获或报告抗 体，但优选为一种或多种捕获抗体。在这样的夹心测定法中使用的其他一种或多种抗体结 合单体Αβ上与一种或多种辨别性抗体所结合的表位不同的表位。为了简单起见，一种或 多种辨别性抗体被称为捕获抗体，并且结合不同表位的一种或多种抗体被称为报告抗体 (但是相反的特异性也是可能的）。例如，当C-端表位特异性抗体被用于捕获单体A β时， 中央表位（在12-28位残基内）特异性抗体（例如单克隆抗体266)或N-端表位（即在 1-11位残基内）特异性抗体（例如单克隆抗体3D6或10D5)可以用作报告抗体。结合中 央表位的抗体的使用允许检测A β的N-端截短的形式，一些或所有这些形式可能不能使用 N-端报告抗体检测。
[0058] 对于样品中单体和寡聚体Αβ的合并量的基于免疫亲和的测量来说，可以将样品 用将寡聚体Αβ解聚成单体Αβ的试剂（例如溶剂）处理。然后将解聚的样品稀释以将解 聚试剂的浓度降低到免疫亲和剂（即捕获和/或报告抗体）所耐受的水平。抗体的解聚试 剂耐受性可以凭经验确定。可以使用能够解聚寡聚体Αβ并且在适当稀释后不抑制解聚的 单体Αβ的基于抗体的识别的任何试剂。适合的解聚试剂包括离液剂、非离子型去污剂、增 溶剂或亲脂性增强剂或其任何组合（例如离液剂与去污剂的组合）。出于将寡聚体Αβ转 变成单体的计划目的，解聚试剂可以单个地或以任何有效的组合、以任何有效的比率使用。 适合的离液剂包括例如盐酸胍、异硫氰酸胍、脲、硫脲、高氯酸锂和碘化钾。适合的非离子型 去污剂包括Tween?系列去污剂、Triton?.系列去污剂和Brij?系列去污剂。其他增溶剂 /亲脂性增强剂包括六氟异丙醇和大小在10, 〇〇〇至50, OOODa范围内的聚合物（例如聚乙 二醇、聚乙烯吡咯烷酮、多酚的聚合物）。
[0059] 最高解聚试剂浓度取决于免疫亲和剂（即捕获和/或报告抗体）的耐受性和方法 的灵敏度两者。通常，解聚样品的约1:5至约1:40(例如约1:5至约1:20或约1:10)的稀 释将确保抗体的解聚试剂耐受性，并对方法的灵敏度具有极小或没有影响。因此，如果在免 疫测定法中脲（或盐酸胍）的最高可耐受浓度被确定是0.5M，并且在免疫测定法之前将解 聚的样品1:10稀释，那么在解聚样品中容许的解聚试剂的最高浓度为5M。对于去污剂、增 溶剂/亲脂性增强剂（例如聚合物）和溶剂/解聚试剂的组合，可以进行类似的分析。例 如，对于约10, 〇〇〇至约40, OOODa的聚合物来说，最高浓度可以在约5 %至约10 %的范围 内。
[0060] 将样品用解聚试剂处理，使得样品中所有或基本上所有的Aβ处于单体状态（即 进一步的处理不能可检测地增加在随后的测定法中的信号）。解聚试剂处理过的样品中单 体和寡聚体Αβ的合并量可以通过免疫测定法、优选为夹心测定法来测量。由于在解聚试 剂处理过的样品中不需要区分单体和寡聚体Αβ (即由于在解聚试剂处理过的样品中基本 上不存在寡聚体Αβ )，因此可以使用针对Αβ的结合不重叠表位的任何抗体的组合作为捕 获和报告抗体。然而，为了测定法之间的更直接的可比性，将与用于测量样品（即尚未用解 聚试剂处理的样品）中单体Αβ的量相同的测定法，也优选地用于（最好地实践）测量解 聚试剂处理过的样品中单体和寡聚体Αβ的合并量。因此，例如，如果使用以C-端特异性 捕获抗体和中央或N-端表位特异性报告抗体为特点的夹心测定法来测量单体A β的量，则 优选地使用包括相同的C-端表位特异性捕获抗体和中央或N-端表位特异性报告抗体的相 同的夹心测定法来测量单体和寡聚体Αβ的合并量。如果使用不同的测定法来进行两种测 量，则可以通过参考具有已知浓度的单体Αβ或单体和寡聚体Αβ的对照样品的测量将测 量值适当地归一化，以补偿抗体结合的不同强度。
[0061] 单体和寡聚体Αβ的合并量的测量，也可以通过将单体Αβ (例如如上所述）和寡 聚体Αβ的分开的测量简单相加来实现。对于基于免疫亲和的测量来说，这可以通过使用 识别寡聚体Aβ但不识别单体Aβ的抗体测量从受试者获得的体液样品中寡聚体Aβ的量 来实现。不结合单体Αβ的特异性针对寡聚体Αβ的抗体已描述在例如W004/031400中。
[0062] 取决于测定法的格式，单体A β与合并的单体和寡聚体A β之间的辨别可能不是 绝对的。换句话说，与寡聚体A β相比优选结合单体A β的抗体可能不绝对的辨别，或者用 解聚试剂的处理可能不会将100%的寡聚体Αβ转变成单体Αβ。此外，由于与遮蔽用于辨 别单体和寡聚体Αβ的表位（例如C-端表位）的蛋白质或其他大分子的结合，某些事实上 是单体的A β可能被评定为寡聚体。尽管缺乏完全精确性，但在用解聚试剂处理之前和之 后使用包括与寡聚体Aβ相比优选结合单体Aβ的抗体（例如末端特异性的C端抗体）的 免疫测定法测量体液样品，可以被当作单体Αβ以及合并的单体和寡聚体Αβ的测量的可 接受的代用品，并因此进行随后的数据分析。
[0063] 以不同方式来看，所述方法可以通过在用和不用解聚试剂处理的体液样品中Αβ 的差异检测来进行，而不需将检测到的物质表征为是单体、寡聚体、与蛋白质结合的单体还 是其他物质。在这样的方法中，在来自于受试者的体液样品中检测Αβ的量，其中所述样品 尚未用解聚试剂处理，并在来自于所述受试者的另一个体液样品中检测Αβ的量，其中所 述样品已用解聚试剂处理，并将检测到的Αβ的量进行比较。检测使用末端特异性针对Αβ 的C-端的抗体或与寡聚体Αβ相比优选地结合单体Αβ的另一种抗体来进行。所述比较 确定了使用和不使用解聚步骤处理时测量到的Αβ的量的比率或差值。所述比率或差值 可以以与单体与寡聚体Αβ的比率或差值相似的方式用于阿兹海默氏病的诊断、预后或监 测。因此，寡聚体与单体Αβ的比率、商数或差值以及它们的测量和解释和对差异治疗方案 的应用的所有讨论，在细节上作必要的修改后适用于在存在和不存在解聚试剂的情况下， 使用利用与寡聚体Aβ相比优选地结合单体Aβ的抗体的免疫测定法测量的Aβ的量之间 的比率。例如，不使用解聚试剂的量与使用解聚试剂的量的较小的商数或使用解聚试剂与 不使用解聚试剂的量之间的较大差值，指示了所述受试者的发生疾病的更高的易感性、疾 病存在的更高的可能性或病情的恶化。同样地，在其他方法中，可以将被测试的受试者群体 根据上述商数或差值分层为第一和第二子群体，并使所述子群体经历差异治疗方案。例如， 具有较小商数或较大差值的子群体可以用预防或治疗阿兹海默氏病的药物治疗，具有较大 商数或较小差值的子群体可以不用所述药物治疗（包括不接受治疗）。
[0064] 优选地，单体Αβ的量和单体和寡聚体Αβ的合并量的测量在同一样品，例如同一 样品的不同等份试样上进行。然而，测量可以在不同样品上进行，只要存在合理的基础相信 样品是基本上相同的即可，例如当多个样品在基本上相同的时间从同一受试者的基本上相 同的位置顺序收集时。单体Αβ的量和单体和寡聚体Αβ的合并量的测量，可以同时或顺 序地，优选地使用相同的试剂和仪器来进行。对于从接受用于阿兹海默氏病的被动免疫治 疗（即接受特异性针对Aβ的治疗性抗体例如百平珠单抗）的受试者获得的样品来说，任 选地在进行免疫测定法之前将样品用中和所述治疗性抗体的试剂（例如中和百平珠单抗 的抗独特型抗体，例如JHlL 22G2)进行处理。或者，测定法可以使用针对中央和C-端区域 的抗体作为捕获和报告抗体来进行。百平珠单抗不干扰这样的测定法，因为它与远离中央 或C-端抗体的位点结合。
[0065] IV.特异件针对A β的抗体
[0066] 用于检测Αβ的抗体可以被近似分类为结合Αβ的N-端、中央或C-端表位。N-端 表位是1-11位残基，中央表位是12至28位残基，C-端表位是29位残基至C-端（例如37、 38、39、40、41、42或43位残基）。结合A β的C-端区域中的表位的抗体包括例如抗体2G3、 21F12和369. 2Β。结合Αβ的中央区域中的表位的抗体包括例如抗体266、15C11、2B1、1C2、 4G8和9G8。结合A β的N-端区域中的表位的抗体包括例如抗体12B4、12A11、6C6、3A3、2H3、 10D5 和 3D6。
[0067] 2G3是与位于人类A β中的C-端表位特异性结合的mAb，具体为在A β 40的C-端 处结合（Johnson-Wood 等，PNAS February 18, 1997vol. 94, 1550-1555) 〇
[0068] 21F12是与位于人类Αβ中的C-端表位特异性结合的mAb，具体为在Αβ42的 C-端处结合（Johnson-Wood 等，PNAS February 18, 1997νο1· 94ηο· 41550-1555) 〇
[0069] 369. 2Β是与位于人类A β中的C-端表位特异性结合到的mAb，具体为在A β 42的 C-端处结合。369. 2Β抗体及其变体描述在例如US5, 786, 180中。
[0070] 末端特异性针对一种形式的人类Αβ上的C-端表位的大量其他抗体已描述 在科学文献中和/或是可商购的（参见例如Horikoshi等，13;[00116111.13;[(^1178.1^8· Commun. 319, 733-7 (2004)，其提到了杂交瘤82Ε1、1Α10和1C3,其中第一种末端特异性针对 Αβ40,第二和第三种特异性针对 A042;Iwatsubo 等，Neuron 13,45-53(1994) ;Barelli 等，Mol. Med. 3, 695-707 (1997) ;Levites 等，J. Clin. Invest. 116, 193-201(2006);万维 网 alzforum. org/res/com/an ;Novos, Biologicals，目录号 NB300-225 (末端特异性针对 A β 40)和 Autogen Bioclear 目录号 ABT109 (末端特异性针对 A β 42))。
[0071] 266是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为16-24位残基特异性结合的mAb。266 抗体及其变体描述在例如US 20050249725和W001/62801中。产生266单克隆抗体的细胞 系，于2004年7月20日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，保藏号 为 PTA-6123。
[0072] 15C11是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为19-22位残基特异性结合的mAb 的mAb。15C11抗体及其变体描述在例如美国专利7, 625, 560和WO 2006/066049中。产生 15C11单克隆抗体的细胞系，于2005年12月13日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty) 的条款保藏在ATCC，保藏号为PTA-7270。
[0073] 2B1是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为19-23位残基特异性结合的mAb。2B1 抗体及其变体描述在例如US 20060257396和WO 2006/066171中。产生2B1抗体的细胞系， 于2005年11月1日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，保藏号为 PTA-7202。
[0074] 1C2是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为16-23位残基特异性结合的mAb。1C2 抗体及其变体描述在例如US 20060257396和WO 2006/066171中。产生1C2抗体的细胞系， 于2005年11月1日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，指派的登 记号为PTA-7199。
[0075] 9G8是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为16-21位残基特异性结合的mAk9G8 抗体及其变体描述在例如US 7, 625, 560和WO 2006/066049中。产生9G8抗体的细胞系， 于2005年11月1日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，指派的登 记号为PTA-7201。
[0076] 4G8是与位于人类Αβ中的中央表位，具体为17-24位残基特异性结合的 mAb (Covance SIG-39220)〇
[0077] 12B4是与位于人类Αβ中的N-端表位，具体为3-7位残基特异性结合的mAb。12B4 抗体及其变体描述在US20040082762和W003/077858中。
[0078] 12A11是与位于人类Αβ中的N-端表位，具体为3-7位残基特异性结合的mAb。 12A11 抗体及其变体描述在例如 US20050118651A1、US 20060198851、W004/108895A2 和 WO 2006/066089中。产生12A11单克隆抗体的细胞系，于2005年12月13日根据布达佩斯公 约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，保藏号为PTA-7271。
[0079] 6C6是与位于人类A β中的N-端表位，具体为3-7位残基特异性结合的mAb。6C6 抗体及其变体描述在例如US 20060257396和WO 2006/066171中。产生抗体6C6的细胞系， 于2005年11月1日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏在ATCC，指派的登 记号为PTA-7200。
[0080] 3A3是与位于人类A β中的N-端表位，具体为3-7位残基特异性结合的mAb。2H3 是特异性结合到位于人类Aβ中的N-端表位，具体为2-7位残基的mAb。3A3和2H3抗体 及其变体描述在例如US 20060257396和WO 2006/066171中。产生抗体2H3和3A3的细胞 系分别具有ATCC登记号PTA-7267和PTA-7269,于2005年12月13日根据布达佩斯公约 (Budapest Treaty)的条款被保藏。
[0081 ] 3D6是特异性结合到位于人类A β中的N-端表位，具体为1-5位残基特异性结合 的mAb。产生3D6单克隆抗体的细胞系（RB963D6. 32. 2. 4)，于2003年4月8日根据布达佩斯 公约（Budapest Treaty)的条款保藏在美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection(ATCC)，Manassas, Va. 20108, USA)，保藏号为 PTA-5130。10D5 是特异性结合到 位于人类Αβ中的N-端表位，具体为3-7位残基的mAb。产生10D5单克隆抗体的细胞系 (RB4410D5. 19. 21)，于2003年4月8日根据布达佩斯公约（Budapest Treaty)的条款保藏 在ATCC，保藏号为PTA-5129。3D6和10D5抗体及其人源化和嵌合形式进一步描述在例如US 20030165496 和 20040087777 以及 TO02/088306、TO02/088307、TO02/46237 和 W004/080419 中。其他人源化3D6抗体描述在US 20060198851和TO 2006/066089中。
[0082] 可用于测量体液中单体和/或寡