用于igf-ⅰ化学发光免疫检测的酸性处理剂、样本预处理方法、试剂盒及检测方法_3

文档序号:8379123阅读:来源:国知局
磁性微球的浓度为1. 2mg/ml。
[0072] 3)标记物体系:标记ABEI的抗胰岛素样生长因子I抗体2溶液,其中:抗IGF- I 抗体2的浓度为50 y g/L,ABEI浓度为0? 5mg/L。
[0073] 5)校准品溶液:包括胰岛素样生长因子I浓度为63. 218ng/L的低点校准品溶液 和胰岛素样生长因子I浓度为1124. 680ng/L的高点校准品溶液。
[0074] 4)中和缓冲液:为浓度为0.5mol/L的Tris-HCL缓冲液,该中和缓冲液的pH值为 8. 5;
[0075] 上述各组分均含有牛血清白蛋白(BSA)和防腐剂,BSA浓度为0.05g/ml,防腐剂主 要成分为NaN3,浓度为0. 02g/ml。
[0076] 本实施例的IGF-I化学发光免疫检测试剂盒的制备方法中,除以下试剂外,其余 均按照常规方法制备。
[0077] 上述包被抗IGF- I抗体1的磁性微球通过以下方法制备:使用1-环已基-2-吗 啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC)等作为搭桥物质连接抗体与经处理后已吸附羧基基 团的磁性微球,30-40°C温育1-2小时,再经过3-5次磁球悬浮液的洗涤去除杂质即可使用。
[0078] 上述标记ABEI的抗胰岛素样生长因子I抗体2通过以下方法制备:使用N-羟基 琥珀酰亚胺(NHS)等作为搭桥物质连接ABEI与抗体后,经过G-25凝胶层析过柱得到纯化 物。
[0079] 采用本实施例的检测试剂盒进行IGF-I化学发光免疫检测的方法,包括以下步 骤:
[0080] 1)预处理:将50 y L样本与50 y L酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,在37°C温 育5分钟。
[0081] 2)反应:首先,加入100 yL的中和缓冲液以中和酸性处理剂处理样本后的酸性, 将pH值调至接近中性(7.0)。
[0082] 然后加入100 y L标记ABEI的抗胰岛素样生长因子I抗体2溶液,20 y L包被抗 IGF- I抗体1的磁性微球溶液,混匀。
[0083] 在37°C温育15min,形成包括胰岛素样生长因子I、ABEI、磁性微球、抗胰岛素样 生长因子I抗体1和抗胰岛素样生长因子I抗体2复合的发光免疫复合物;
[0084]3)检测:外加磁场将上述发光免疫复合物沉淀,去除上清液,并以自动灌注系统 缓冲液进行清洗,加入化学发光激发物,检测发出的相对光强度,通过校准品修正后的工作 曲线可计算得出样本的IGF- I浓度。
[0085] 实施例2
[0086] -种采用实施例1的检测试剂盒进行IGF-I化学发光免疫检测的方法,与实施例 1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
[0087] 1)预处理:将10 y L样本与50 y L酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,在37°C温 育5分钟。
[0088] 实施例3
[0089] -种采用实施例1的检测试剂盒进行IGF-I化学发光免疫检测的方法,与实施例 1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
[0090] 1)预处理:将100 yL样本与50 yL酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,在37°C温 育5分钟。
[0091] 实施例4
[0092] 一种采用实施例1的检测试剂盒进行IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例 1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
[0093] 1)预处理:将50 y L样本与50 y L酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,在37°C温 育3分钟。
[0094] 实施例5
[0095] 一种采用实施例1的检测试剂盒进行IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例 1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
[0096] 1)预处理:将50 y L样本与50 y L酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,在37°C温 育7分钟。
[0097] 实施例6
[0098] 一种采用实施例1的检测试剂盒进行IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例 1中的检测方法基本相同,不同之处在于:
[0099] 1)预处理:将50 y L样本与50 y L酸性处理剂加入到反应杯中并混勾,不进行温 育就继续后续检测步骤。
[0100] 实施例7
[0101] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0102] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0? lmol/L的乙酸溶液和浓度为0? 01mol/L的盐酸 溶液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为20 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为3. 0。
[0103] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0104] 实施例8
[0105] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0106] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0. 5mol/L的乙酸溶液和浓度为0. lmol/L的盐酸溶 液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为5 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为1. 5。
[0107] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0108] 实施例9
[0109] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0110] 1)酸性处理剂:主要由浓度为〇? 25mol/L的乙酸溶液和浓度为0? 05mol/L的盐酸 溶液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为13 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为3. 0。
[0111] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0112] 实施例10
[0113] -种IGF-I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0114] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0? 25mol/L的乙酸溶液和浓度为0? 05mol/L的盐酸 溶液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为7 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为2. 0。
[0115] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0116] 实施例11
[0117] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0118] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0. 3mol/L的乙酸溶液配制而成,该酸性处理剂的pH 值为3. 5。
[0119] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0120] 实施例12
[0121] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0122] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0. 6mol/L的乙酸溶液配制而成,该酸性处理剂的pH 值为3.0。
[0123] 一种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0124] 实施例13
[0125] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0126] 1)酸性处理剂:主要由浓度为2mol/L的乙酸溶液配制而成,该酸性处理剂的pH 值为2.0。
[0127] -种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0128] 实施例14
[0129] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0130] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0. 25mol/L的甲酸溶液和浓度为0. 05mol/L的盐酸 溶液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为10 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为2. 5。
[0131] 一种IGF- I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0132] 实施例15
[0133] -种IGF- I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1的检测试剂盒基本相同,不同 之处在于:
[0134] 1)酸性处理剂:主要由浓度为0? 25mol/L的甲酸溶液和浓度为0? 05mol/L的氯酸 溶液,按照其中乙酸和盐酸的摩尔比为10 :1混合而成,该酸性处理剂的pH值为2. 4。
[0135] -种IGF-I化学发光免疫检测的方法,与实施例1中的检测方法基本相同,不同 之处在于:采用本实施例的检测试剂盒进行检测。
[0136] 实施例16
[0137] -种IGF-I化学发光免疫检测试剂盒,与实施例1中的检测试剂盒基本相同,不 同之处在于:
[0138] 2)磁性微球体系:包被羊抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体的磁性微球溶液,其 中:羊抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体的浓度为50 y g/L,磁性微球的质量体积百分浓度为 1. 2%〇
[0139] 标记异硫氰酸荧光素的抗胰岛素样生长因子I抗体1溶液,其中:抗胰岛素样生 长因子I抗体1的浓度为50 y g/L,异硫氰酸荧光素的浓度为0. 5mg/L。
[0140] 本实施例的IGF- I化学发光免疫检测试剂盒的制备方法中,除以下试剂外,其余 均按照常规方法制备。
[0141] 上述包被羊抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体的磁性微球通过以下方法制备:使用 1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC)等作为搭桥物质连接羊抗异硫氰酸 荧光素多克隆抗体与经处理后已吸附羧基基团的磁性微球,30-40°C温育1-2小时,再经过 3-5次磁球悬浮液的洗涤去除杂质即可使用。
[0142] 上述标记异硫氰酸荧光素的抗胰岛素样生长因子I抗体1通过以下方法制备: 无需搭桥物质,异硫氰酸
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