各工作电极在梯度浓度五羟色胺溶液中的氧化峰电流 除以该工作电极对应的校正因子为校正后五羟色胺溶液中氧化峰电流；
[0025] (4)以五羟色胺浓度和校正后五羟色胺溶液中氧化峰电流绘制成标准曲线，进而 得到相应的线性回归方程；
[0026] (5)待测样品去除其中的细胞和蛋白后，取一新的工作电极，在基准溶液中扫描， 记录峰电流，然后将电极清洗晾干，在待测样品中扫描，记录氧化峰电流，将氧化峰电流值 带入线性回归方程中，得到待测样品中五羟色胺的浓度。
[0027] 实验发现，用1 X l(T5m〇l/L多巴胺作为基准溶液，也可筛选在1 X l(T5m〇l/L多巴胺 基准溶液中差分脉冲响应电流差异在20%以内的多根不同碳纤维超微电极作为工作电极。 同样能够避免五羟色胺氧化产物污染电极的弊端，获得更为准确的检测结果。
[0028] 优选地，上述定量测定五羟色胺的方法中，碳纤维超微电极的制备方法为：将洁净 的玻璃毛细管一端拉制成内径18~22 ym的尖端；碳纤维依次用丙酮、乙醇和二次蒸馏水 超声清洗后在空气中晾干；将碳纤维和铜丝用碳粉导电胶粘连，将碳纤维从玻璃毛细管另 一端穿入至露出玻璃毛细管尖端外，毛细管另一端用环氧树脂密封，环氧树脂固化后固定 铜丝；将带有碳纤维的毛细管尖端置于750~850°C的火焰下灼烧至毛细管尖端熔融将碳 纤维密封于其中；再将经熔融密封的碳纤维靠向340~360°C的火焰至黑色背景下观察到 碳纤维尖端微红时立即拿开，获得碳纤维超微电极。
[0029] 优选地，上述定量测定五羟色胺的方法中，梯度浓度五羟色胺溶液的五羟色胺浓 度在 1.0XKT6~2. 0Xl(T4m〇l/L 范围内。
[0030] 优选地，上述定量测定五羟色胺的方法中，五羟色胺溶液由IX l(T2m〇l/L五羟色 胺母液经pH值7. 2的Tris-HCl稀释配制。
[0031] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0032] 本发明以洁净的碳纤维超微电极和火焰灼烧活化后的碳纤维微电极为工作电极， Ag/AgCl作为参比电极，以原洁净碳纤维超微电极在基准溶液中的峰电流为基准电流，火焰 灼烧活化后电极峰电流与原洁净电极峰电流的比值为电流校正因子，各梯度浓度五羟色胺 溶液中氧化峰电流除以校正因子为校正后五羟色胺溶液中氧化峰电流。或筛选在基准溶液 中差分脉冲响应电流差异在20%以内的不同碳纤维超微电极作为工作电极，测定并记录其 在基准溶液中的峰电流，各电极峰电流与第一根电极峰电流的比值为电流校正因子，电极 在梯度浓度五羟色胺溶液中氧化峰电流除以校正因子为校正后五羟色胺溶液中氧化峰电 流。对五羟色胺氧化峰电流进行校正后，其与五羟色胺浓度线性关系良好，可以克服五羟色 胺氧化产物污染电极的弊端，实现了神经递质五羟色胺的定量测定检测。
【附图说明】
[0033] 图1为洁净的碳纤维超微电极在1 X l(T4m〇l/L五羟色胺溶液中10次循环伏安扫 描曲线，电流随扫描次数递减，表明采用循环伏安法测试时，五羟色胺对电极表面有严重的 毒化作用。
[0034] 图2为洁净的碳纤维超微电极在1 X 10_4mol/L五羟色胺溶液中10次差分伏安扫 描曲线，电流随扫描次数递减，表明采用差分脉冲伏安法测试时，五羟色胺对电极表面有严 重的毒化作用。
[0035] 图3为洁净的碳纤维超微电极在1. 0 X 10_3mol/L铁氰化钾溶液（A、B)与 1.0Xl(T4m〇l/L多巴胺溶液（C、D)中的电化学行为，a.毒化前，b.毒化后，c.活化后，表明 火焰灼烧法能活化电极表面，增加电流响应。
[0036] 图4为洁净电极以及经火焰灼烧活化后的洁净电极在1. OX 10_3mol/L铁氰化钾溶 液中的差分脉冲伏安叠加图。通过火焰灼烧后，被污染的电极表面活化，电化学性能优良， 与此同时，碳纤维也会因为灼烧而变短，电流一定程度减小。
[0037] 图5为洁净电极以及经火焰灼烧活化后的洁净电极在浓度范围为1. OX 1(T6~ 2. 0 X 10_4mol/L五羟色胺中的差分脉冲伏安图。
[0038] 图6为电流校正前五羟色胺氧化峰电流与其浓度的线性关系。
[0039] 图7为电流校正后五羟色胺氧化峰电流与其浓度的线性关系。
【具体实施方式】
[0040] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的 理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0041] 五轻色胺溶液由1 X l(T2m〇l/L五轻色胺母液经pH值7. 2的Tris-HCl逐级稀释配 制。五羟色胺母液由0. lmol/L HC104水溶液溶解五羟色胺粉末配制而成，然后置于4°C冰 箱内保存。
[0042] 20mmol/L、pH值7. 2的Tris-HCl缓冲溶液：将242. 3mg三羟甲基氨基甲烷（Tris) 粉末溶于80mL蒸馏水，采用lmol/L盐酸将溶液pH调节至7. 2,混勾并定容至100mL。
[0043] 实施例中如无特殊说明，循环伏安法与差分脉冲伏安法均采用双电极系统，所有 电位均以Ag/AgCl作为参比电极。
[0044] 实施例1碳纤维超微电极制备
[0045] 将洁净的玻璃毛细管（内径为1mm) -端拉制成内径约为20 ym的尖端。碳纤维 (直径6 ym，长约15mm)依次用丙酮，乙醇，二次蒸馏水超声清洗5分钟，在空气中晾干。将 碳纤维和铜丝（直径0.2mm，长约10cm)用碳粉导电胶粘连，将碳纤维从玻璃毛细管另一端 穿入至露出玻璃毛细管尖端外约2_，毛细管另一端用环氧树脂密封，静置过夜环氧树脂固 化后固定铜丝。将带有碳纤维的毛细管尖端置于酒精灯中部的外焰处（温度在750~850°C 之间）灼烧约〇.5s，毛细管尖端熔融将碳纤维密封于其中。再将经熔融密封的碳纤维小心 靠向置于火焰底部的外焰处（温度约为350°C)，在黑色背景下可以看到碳纤维尖端微红时 立即拿开，即可制得长度为50~200 y m，尖端直径为几百纳米的碳纤维超微电极。
[0046] 实施例2电极不经火焰灼烧活化对五羟色胺的检测
[0047] 将实施例1制备的碳纤维超微电极分别在丙酮、无水乙醇和超纯水中清洗3min， 其置于0. 5mol/L H2S04水溶液中用循环伏安法活化0. 5h，再用超纯水清洗，得到活化后洁 净的碳纤维超微电极。
[0048] 将一根洁净的碳纤维超微电极置于1. OX l(T4m〇l/L五羟色胺溶液进行循环伏安 扫描10次，设定扫描速度为100mV/s，扫描范围从0.1 V至0. 8V。电流随扫描次数增加而递 减，如图1所示，表明用循环伏安法，五羟色胺对电极表面有严重的毒化作用。采用双电极 系统，所有电位均以Ag/AgCl作为参比电极。
[0049] 将一根洁净的碳纤维超微电极置于1. OX l(T4m〇l/L五羟色胺溶液进行差分脉冲 扫描10圈，设定扫描速度为0. 1V/S，扫描范围从0V至1. 0V。电流随扫描圈次数增加而递 减，结果如图2所示，表明用差分脉冲法，五羟色胺对碳纤维超微电极表面有严重的毒化作 用。
[0050] 实施例3
[0051] (1)火焰灼烧活化碳纤维超微电极方法：用镊子压紧酒精灯灯芯，使酒精灯火焰 呈现微弱火焰，再将经熔融密封的碳纤维缓缓靠近火焰底部的外焰处（温度约为350°C )， 在黑色背景下观察碳纤维尖端微微发红时立即拿开即可。
[0052] (2)将一根洁净的碳纤维超微电极分别在1. OX 10_4mol/L多巴胺和1. OX 10_3mol/ L铁氰化钾溶液中进行循环伏安扫描与差分脉冲伏安扫描，经五羟色胺毒化后再将其置于 上述溶液中扫描，用火焰灼烧法活化碳纤维超微电极后再将其置于上述溶液中扫描。碳纤 维超微电极毒化前后和活化后在各电活性物质中的循环伏安与差分脉冲图如图3所示。实 验结果说明，碳纤维超微电极在五羟色胺溶液扫描过程中被严重毒化，使得电极表面的活 性点大部分被覆盖，电活性物质的峰电流大幅降低甚至消失，碳纤维电极毒化后会严重影 响其检测灵敏度。经火焰灼烧后相当于更新了电极表面，活化后的电极电化学性能良好。
[0053] 实施例4
[0054] 在1. OX 1(T6~2