一种促黄体生成素(lh)定量检测法
【技术领域】：
[0001]本发明涉及一种促黄体生成素（LH)定量检测法，属于化学发光免疫分析法检测 领域。
【背景技术】：
[0002] 促黄体生成素（LuteinizingHormone，LH)是人体中重要的内分泌激素。内分泌 功能障碍，可导致人体多种疾病的发生，因此准确检测体内激素水平对诊断内分泌疾病有 着重要的意义。
[0003] 促黄体生成素（LH)与促卵泡刺激素（FSH) -样同属促性腺激素家族，二者协同调 节和刺激性腺（卵巢和睾丸）的发育和功能。与FSH、TSH(促甲状腺激素）和hCG(人绒 毛膜促性腺激素）一样，LH也是糖蛋白，由两种亚单位（a和0)组成，含121个氨基酸和 3条糖链，分子量29. 5kD。在有卵泡刺激素存在下，与其协同作用，刺激卵巢激素分泌，使卵 泡成熟与排卵，使破裂卵泡形成黄体并分泌雌激素和孕激素。刺激睾丸间质细胞发育并促 进其分泌睾酮。故又称间质细胞促进素。促黄体生成素的分泌受下丘脑促黄体生成素释放 激素的调节，是由脑垂体千叶分泌的促性腺素的一种，作用于卵巢的黄体或黄体细胞，促进 孕激素的分泌。
[0004] 对于女性，该激素在下丘脑-垂体-卵巢调节环路中发挥作用，控制月经周期。LH 和FSH从垂体的促性腺细胞中阵发性的释放，经血流到达卵巢，在卵巢中LH和FSH-起刺 激卵泡的成长和成熟，进而刺激雌激素和雄激素的生物合成。LH水平在月经周期的中期呈 现最高峰，诱导排卵和形成黄体，其主要分泌物是雄激素。在睾丸的Leyding细胞内，LH刺 激睾酮的产生。LH检测对查明下丘脑-垂体-卵巢系统的功能失常有作用。LH和FSH联 合检测还可以用于查明染色体异常的先天性的疾病、多囊性卵巢（PC0)、闭经的病因、绝经 综合征和疑有间质细胞发育不全。
[0005]目前血清LH检测主要有酶免疫法（ELISA)、免疫放射法（IRMA)、时间分辨荧光免 疫测定（TRFIA)。由于受示踪剂性状的限制，ELISA的灵敏度不高，检测范围有限；IRMA试 剂盒受同位素半衰期的影响，有效期短，此外还有一定的放射性污染；当进行超微量分析的 时候，TRFIA受激发光的杂散光的影响很严重。
[0006] 化学发光免疫分析（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)，是将具有高灵敏 度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、 酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时 间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。主要具有灵敏度高、试剂价 格低廉、试剂稳定且有效期（6-18个月）、方法稳定快速、检测范围宽、安全无毒无污染、操 作简单自动化程度高等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。
【发明内容】
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[0007] 本发明的目的是提供一种化学发光免疫分析法定量测定促黄体生成素（LH)的检 测方法，主要解决现有LH检测领域存在的灵敏度低、稳定性差、操作繁琐、污染环境、试剂 不稳定且价格昂贵等问题。
[0008] 本发明的技术方案：本发明描述的通过化学发光免疫分析法定量测定促黄体生成 素（LH)，包含的材料为微孔板、校准品、标记物、发光底物A、发光底物B、浓缩洗涤液。本 发明采用夹心法测定血清中LH水平，以抗LH抗体作为包被抗体，加入LH校准品或待测血 清后，再加入另一株抗LH抗体标记物进行反应，充分洗涤后加入发光底物测定其发光强度 (RLU)，根据标准曲线即可算出样品中LH的含量，样品的RLU值随LH浓度的增加而上升。
[0009] 本发明的基本操作如下：
[0010] 1.LH抗体包被微孔板的制备
[0011] ①包被缓冲液的制备
[0012] 柠檬酸三钠7. 0~7. 4g
[0013]柠檬酸 4.2~4.6g
[0014] 纯化水加至1000ml
[0015] 将上述试剂称量好放入洁净容器中，溶解混匀，2~8°C密封保存备用。
[0016] ②包被工作液的制备
[0017] 取促黄体生成素（LH)，按1yg/ml的浓度加入①中制备的包被缓冲液中，搅拌混 匀，2~8°C密封保存备用。
[0018] ③封闭液的制备
【主权项】
1. 一种通过化学发光免疫分析法定量测定促黄体生成素（LH)的检测方法，其特征是 包含微孔板、校准品、标记物、发光底物A、发光底物B、浓缩洗绦液。
2. 根据权利要求1所述微孔板，其特征在于制备过程中所使用的包被工作液是浓度为 I y g/ml促黄体生成素（LH)。
3. 根据权利要求1所述标记物，其特征在于标记物制备过程中辣根过氧化物酶：LH的 比例是I:1。
4. 根据权利要求1所述标记物，其特征在于标记物的稀释度为1 : 20000。
5. 根据权利要求1中所述的化学发光底物液A，其特征在于由12. Ig三羟甲基氨基甲 烷，1.0 g小牛血清白蛋白，0. 50g鲁米诺，0. 003g增强剂，加纯化水至1000 ml配制而成。
6. 根据权利要求5中所述的化学发光底物液A，其特征在于增强剂为四苯硼钠。
7. 根据权利要求1中所述的化学发光底物液B，其特征在于由0. 73g柠檬酸三钠， 0. 44g梓檬酸，3. 3ml 30%双氧水，加纯化水至1000 ml配制而成。
8. 根据权利要求1中所述的浓缩洗涤液，其特征在于稀释度1 : 30。
【专利摘要】本发明公开了一种通过化学发光免疫分析法定量测定促黄体生成素(LH)的检测方法，本发明采用夹心法测定血清中LH水平，以抗LH抗体作为包被抗体，加入LH校准品或待测血清后，再加入另一株抗LH抗体标记物进行反应，充分洗涤后加入发光底物测定其发光强度(RLU)，根据标准曲线即可算出样品中LH的含量，样品的RLU值随LH浓度的增加而上升。本发明操作简单，测试时间短，可提高临床检验的效率。
【IPC分类】G01N33-74
【公开号】CN104849475
【申请号】CN201510227904
【发明人】王贤俊, 江新涛, 郭二豪, 郑蓓蕾
【申请人】王贤俊
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月2日