，但就试剂和时间而言，它们是昂贵的。在某些实施方案中，本发明提供如下装置和方法，与传统蛋白质印迹相比，所述装置和方法提供类似和/或较大的信息量，但具有降低的试剂和时间消耗以及增加的生产量和多重能力。在一些实施方案中，本发明提供包括被配置来覆盖存在于含蛋白质膜上的泳道的微流体通道组的微流体装置。在各种实施方案中，通过微流体通道内的抗体探测膜上的蛋白质。在一些实施方案中，膜上的单一蛋白质泳道被两个或更多个微流体通道(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)覆盖，每个微流体通道含有用于探测蛋白质泳道的不同抗体。
[0027]在一些实施方案中，本发明提供了与传统免疫印迹相比的许多优点。例如，代替将整个膜与单一类型的一抗孵育，在每个蛋白质泳道的单一微流体通道内提供更小数量的抗体。在其中每个蛋白质泳道提供多个微流体通道的实施方案中，可通过多种不同的抗体同时探测单一的蛋白质泳道。在一些实施方案中，与传统免疫印迹相比，本发明允许采用更多类型的抗体(例如，每个凝胶泳道2...5…10…20或者更多种)、使用更少的试剂(例如，微流体通道对孵育整个膜)、更少的样品(例如，凝胶上的单一泳道对用于每种不同抗体的不同凝胶)和更少的时间(例如，单一的凝胶和膜转移对不同的凝胶和转移)进行探测。在一些实施方案中，从时间的角度来看，在完成一次传统蛋白免疫印迹花费的时间内，本发明的装置和方法可完成3、5、10、20或更多次免疫印迹。在一些实施方案中，从成本的角度来看，本发明的装置和方法可用小于传统蛋白质印迹成本的1%完成免疫印迹。
[0028]Α.装置
[0029]在某些实施方案中，提供包括一个或多个微流体通道(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多)的一个或多个组(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多)的微流体装置。在一些实施方案中，通道沿装置的平的表面延伸，使得包含在通道内的流体暴露于装置的表面。在一些实施方案中，每个通道包括储蓄池或用于将抗体溶液引入微流体通道内的其他流体引入装置。
[0030]在一些实施方案中，微流体装置不需要阀、栗送、混合腔室和/或其他对微流体装置是普遍的、但增加装置的成本和其使用复杂性的更复杂元件。在一些实施方案中，微流体装置不需要与凝胶电泳整合以进行免疫印迹。
[0031]在一些实施方案中，微流体装置包括一组或多组通道，每组包括一个或多个通道。每组被配置来探测蛋白质凝胶上的单一泳道。在一些实施方案中，一组中的每个通道被配置来用不同抗体探测蛋白质泳道。每个通道组可包括相同或不同数量的通道。
[0032]在一些实施方案中，装置可以具有任何合适的大小和尺寸。在一些实施方案中，装置被配置来配合特定凝胶或膜的尺寸。在一些实施方案中，装置被配置来适用于具有不同大小和/或尺寸的凝胶和膜。在一些实施方案中，装置包括具有在Icm至50cm之间的或更大的尺寸(例如，Icm X lcm、4cm x 6cm、8cm x 6cm、5cm x 20cm、20cm x 40cm 等)的覆盖区(例如，膜接触面)。在一些实施方案中，微流体装置的膜接触面的长度和/或宽度是Icm...2cm...3cm...4cm...5cm...6cm...7cm...8cm...9cm...10cm...11cm...12cm...13cm...14cm...15cm...16cm...17cm...18cm...19cm...20cm...21cm...22cm...23cm...24cm...25cm...26cm...27cm...28cm...29cm...30cm...31cm...32cm...33cm...34cm...35cm...36cm...37cm...38cm...39cm...40cm...41cm...42cm...43cm...44cm...45cm...46cm...47cm...48cm...49cm...50cmo
[0033]在一些实施方案中，微流体装置的通道可以具有任何合适的大小和尺寸。在一些实施方案中，通道是如此设定尺寸以允许适当的溶液有效地穿过和/或占据微流体通道。在一些实施方案中，通道的长度与装置的长度是成比例的。在一些实施方案中，通道的长度与被配置用于使用的膜和/凝胶的长度是成比例的。在一些实施方案中，通道的长度是在 Icm 至 50cm 之间(例如，lcm...2cm...3cm...4cm...5cm...6cm...7cm...8cm...9cm...10cm...11cm...12cm...13cm...14cm...15cm...16cm...17cm...18cm...19cm...20cm...21cm...22cm...23cm...24cm...25cm...26cm...27cm...28cm...29cm...30cm...31cm...32cm...33cm...34cm...35cm...36cm...37cm...38cm...39cm...40cm...41cm...42cm...43cm...44cm...45cm...46cm...47cm...48cm...49cm...50cm) 0 在一些实施方案中，通道具有适当的宽度和/或深度以允许必要的溶液(例如，抗体溶液)流经/穿过、占据和/或填充通道。在一些实施方案中，优化通道的宽度以便在特定宽度的组中提供所需的通道数。在一些实施方案中，当将通道变窄以使每组容纳更多泳道时，将通道加深以提供必要的通道体积。在一些实施方案中，通道组的宽度在Imm至50cm的范围内(例如，Imm...2mm...3mm...4mm...5mm...6mm...7mm...8m...9mm...lcm...2cm...3cm...4cm...5cm...6cm...7cm...8cm...9cm...10cm...11cm...12cm...13cm...14cm...15cm...16cm...17cm...18cm...19cm...20cm...21cm...22cm...23cm...24cm...25cm...26cm...27cm...28cm...29cm...30cm...31cm...32cm...33cm...34cm...35cm...36cm...37cm...38cm...39cm...40cm...41cm...42cm...43cm...44cm...45cm...46cm...47cm...48cm...49cm...50cm)。在一些实施方案中，组宽度被配置来配合凝胶和/或膜的泳道宽度。在一些实施方案中，一组微通道包括一个或多个通道(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10...20...30...40...50...100...500等)。在一些实施方案中，每组通道的数量取决于组的宽度、通道之间的间距和通道的宽度(例如，通道的宽度可取决于通道内待使用的溶液的类型)。在一些实施方案中，通道的宽度在50 μπι至500 μm的范围内(例如，50 μηι、60 μηι、70 μηι、80 μπι、90 μηι、100 μηι、110 μηι、120 μηι、130 μηι、140 μηι、150 μηι、160 μηι、170 μηι、180 μηι、190 μπι、200 μ m...250 μ m...300 μ m...350 μ m...400 μ m...450 μ m...500 μ m)。在一些实施方案中，通道的宽度在ΙΟΟμπι至200 μπι的范围内(例如，125μπι至175μπι、140μπι至160 μπι、约150 μ m、150 μπι)。在一些实施方案中，通道的深度在25 μ m至200 μ m的范围内(例如，25 μηι、30 μηι、40 μηι、50 μηι、60 μηι、70 μηι、80 μηι、90 μπι、100 μπκΙΙΟ μηι、120 μηι、130 μπι、140 μ m、150 μ m、160 μ m、170 μ m、180 μ m、190 μ m、200 μ m)。在一些实施方案中，通道的宽度在75μπι至125 μm的范围内(例如，90 μπι至110 μπι、约100 μm、100 μm)。在一些实施方案中，每个通道容纳0.Ιμ?至5μ1之间的溶液(例如，0.1μ1、0.2μ1、0.3μ1、0.4μ1、0.5μ1、0.6μ1、0.7μ1、0.8μ1、0.9μ1、1.0μ1、1.1μ1、1.2μ1、1.3μ1、1.4μ1、1.5μ1、1.6μ1、1.7μ1、1.8μ1、1.9μ1、2μ1...3μ1...4μ1...5μ1)0
[0034]在一些实施方案中，微流体装置与以下中的一种或多种一起被提供为试剂盒的部分:适当设定大小的膜、具有被配置来配合装置的通道的泳道的适当设定大小的凝胶、抗体溶液、缓冲液、激活溶液、具有被配置来配合装置的通道的泳道的用于浇注凝胶的梳子、说明书等。在一些实施方案中，针对特定分析来优化装置或套件。在一些实施方案中，试剂盒设置有抗体和用于进行特定分析的泳道配置。
[0035]在一些实施方案中，通道组和/或微流体通道在整个装置上是不一致的。根据组宽、每组微通道数、微通道宽度、间距等中的一项或多项，单一装置上的通道可在整个单一装置上不同。
[0036]B.方法
[0037]在一些实施方案中，利用本发明的装置，使用任何合适的技术和试剂进行免疫印迹实验。
[0038]用本发明的装置进行免疫印迹的示例性程序如下。将含蛋白质的样品上样至凝胶(例如，聚丙烯酰胺凝胶)的孔中并且通过凝胶电泳(例如，天然凝胶电泳、SDS-PAGE等)分离样品中存在的蛋白质。将膜(例如，PVDF膜)放置在凝胶顶上以允许蛋白质转移至膜上。然后将膜放置在玻璃载玻片上。将微流体装置放置在膜顶上并且使微流体通道与蛋白质泳道对齐。将封闭缓冲液(例如，Tween-20和BSA)任选地注入每个通道。在有封闭步骤的实施方案中，通道的入口 /出口被覆盖(例如，用胶带)以使孵育期间的蒸发减到最少。将抗体注入适当的通道(例如，一组内每个微通道中的不同抗体)。入口 /出口被覆盖(例如，用胶带)以使孵育期间的蒸发减到最少。孵育(例如，I小时)之后，将微流体装置去除并且将膜转移至适当二抗的溶液中(例如，将膜留在此溶液中I小时或直到膜完全湿润)。将膜从二抗溶液中去除并且用新鲜的封闭缓冲液洗涤(例如，5次，每次3分钟)。将膜转移至显色溶液中(例如，30分钟)并且将膜去除并用DI水冲洗。然后使膜干燥。在一些实施方案中，可针对替代程序或为适应特定用途而改变上述的任何或所有步骤。例如，在一些实施方案中，将装置放置在有预先上样至通道内的抗体的膜上。在其他实施方案中，将封闭、二抗溶液、洗涤和显色溶液施加穿过微流体通道。在一些实施方案中，将样品直接或从除凝胶外的其他表面(例如，微量滴定板、阵列等)放置在膜上。
[0039]在一些实施方案中，使相同的样品在相同的条件下在凝胶的多个孔上运行。在此类情况下，多个通道组的微流体通道可全部被上样不同的抗体以分析相同的样品。在其他实施方案中，使不同的样品(或在不同的条件下的相同的样品)在两个或更多个凝胶泳道上运行。在此类情况下，各个通