消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种消栓通络片中主要活性成分的含量测定方 法。
【背景技术】
[0002] 消栓通络片由川考、丹参、黄苗、泽泻、三七、槐花、郁金、桂枝、木香、冰片和山楂组 成。其具有活血化瘀、温经通络功能，用于血脂增高、脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言 语迟涩、发音不清、手足发凉、活动疼痛等病症。该制剂收载于中国药典2010年版一部。研 究表明其具有能改善心血管功能，化瘀而不伤正的特点而广泛应用于临床治疗。
[0003] 现阶段的中药质量控制模式基本上是借鉴化学药品质量控制的模式，含量测定作 为中药质量标准中的要害内容之一，对于有效成分制剂而言，可在很大程度上控制药品质 量，但对于复方制剂采用多种不同提取方式或多条提取路线的工艺以及多个有效部位制成 的新药而言，仅建立某单一成分的含量测定在很大程度上带有较大的片面性。虽然研究者 越来越熟悉到中药新药工艺过程的控制对于质量控制的重要性，但是多数制剂的质量标准 仍然不能全面反映制剂的过程控制结果，即难以全面控制中药制剂的质量。因此，从中药质 量标准的技术要求方面，全面提高质量标准仍然有很大的发展空间。因此，从中药研究的 技术要求方面，将来的新药研究有必要在质量标准中建立多指标含量测定，目的之一是实 现对多数成份指标的控制，并将对中药制剂工艺过程的控制直接在质量标准中得到体现。 即处方中含有多个明确有效成分的，或者处方中药味分别按不同路线提取等各种不同情况 下，均有必要研究建立多个指标的含量测定。但是，这就对质量控制的效率带来了挑战，如 果均采用快捷的薄层扫描定量，则准确度会较差，如果均采用色谱法测定，则非常耗费时间 并且显著增加质量控制的成本，在同一色谱系统中同时测定几种成分，则是比较理想的质 量控制方法。
[0004] 在中国药典2010年版一部中，对消栓通络片的质量控制指标单一，仅是针对该制 剂中三七中的人参皂苷Rgl进行检测。有文献表明以HPLC法测定其中丹参酮IIA、黄芪甲 苷、三七皂苷Rl及芦丁的含量，另有文献表明以电化学检测器测定其中酚酸含量。但是正 如上面所述，作为中成药制剂，对其控制应从多成分多角度出发。因此，在同一色谱系统中 同时测定几种消栓通络片中的主要活性成分为本领域技术人员所需。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供一种消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法，所述 测定方法可同时对消栓通络片中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rb 1及三七皂苷Rl进行含量测定， 方法简便可行、测定结果可靠。
[0006] 本发明的含量测定方法如下：
[0007] 色谱条件：色谱柱为C18柱，规格为250mmX 4. 6mm，流动相A为乙腈，B为水，洗脱 梯度：〇~20min，流动相A由0%增至20% ;20~21min，流动相A由20%增至40% ;21~ 2611^11，流动相4由40%降至20%;26~351^11，流动相4保持20%;检测波长为20311111，流 速：1.0mL/min，柱温：30-50°C;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl及三七皂苷Rl与各自相邻峰的 分离度均大于1. 5 ;
[0008] 对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rbl对照品、三七皂 苷Rl对照品，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rgl 1.0 mg，人参皂苷Rbl 1.0 mg，三七皂 苷Rl 0· 2mg的混合溶液，即得；
[0009] 供试品溶液配制：取消栓通络片，除去包衣，精密称定，研细，充分混匀，取2g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声（120W，频率 60kHz) 30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml 分次溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次（30ml，30ml，20ml，20ml)， 合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水25ml洗涤， 正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤 液即得；
[0010] 测定方法：将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品混合溶 液进样量分别为10 μ L，供试品液进样量为5 μ L，记录色谱峰面积，外标法计算含量。
[0011] 在本发明中，所述消栓通络片可以按照中国药典2010版一部中1035-1036页记载 的内容进行制备，也可以通过商业渠道采购获得。
【具体实施方式】
[0012] 下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求 保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附 权利要求书记载的内容为准。
[0013] 实施例1方法学研究
[0014] 1仪器与材料
[0015] 高效液相色谱仪（Waters e2695)、紫外检测器（Waters 2489)、KQ3200DE型医用 数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、人参皂苷Rgl对照品（中国药品生物制品 检定所）、人参皂苷Rbl对照品（中国药品生物制品检定所）、三七皂苷Rl对照品（中国药 品生物制品检定所），乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。消栓通络片购自哈尔 滨市康隆药业有限责任公司方正分公司。
[0016] 2方法与结果
[0017] 2.1三七的含量测定
[0018] 2. I. 1色谱条件与系统适用性试验
[0019] 色谱柱：C18 柱（Agilent Extend C18)，规格为 250mmX4. 6mm，流动相 A 为乙腈， B为水，洗脱梯度：0~20min，流动相A由0%增至20% ;20~21min，流动相A由20%增 至40 % ;21~26min，流动相A由40 %降至20 % ;26~35min，流动相A保持20 % ;检测 波长为203nm，流速：1. OmL/min，柱温：35°C ;在此色谱条件下，得到三七皂苷RU人参皂苷 RgU人参皂苷RbU混合对照品色谱图及消栓通络片的供试品色谱图，三七皂苷RU人参皂 苷RgU人参皂苷Rbl的保留时间分别为12. 31、16. 10和22. 65min，各自相邻峰的分离度均 大于1. 5〇
[0020] 2. I. 2对照品溶液的制备
[0021 ] 精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rb