一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种荔枝核指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途。
【背景技术】
[0002] 蒸枝核，即无患子科植物蒸枝Litchi chinensis Sonn.的干燥成熟种子。主要含 有挥发类成分、皂苷类、黄酮类、氨基酸类、糖类、有机酸和脂肪酸类等成分，具有行气散结、 祛寒止痛的功效，用于寒疝腹痛、睾丸肿痛、胃脘痛、妇女气滞血瘀刺痛等症。现代研究表 明，荔枝核具有抗氧化、降血压、调血脂、抗肝损伤的作用，而且在抗炎、抑制肿瘤等方面也 取得了良好的效果。在质量控制方面，2010版《中华人民共和国药典》一部收载了荔枝核药 材，但仅仅进行了粉末鉴别来控制其质量。由于中药的产地、来源、采收季节、加工方法等情 况复杂，需要采用更科学、合理的方法控制其质量，这对保证临床用药的安全有效是十分必 要的。指纹图谱作为从整体上对中药进行质量控制的一种技术目前已被广泛认可，其优势 比起单一组分甚至多组分定性定量方法更加明显。目前文献中尚未见到关于荔枝核指纹图 谱的研究报道，因此，为科学有效地控制其内在质量，有必要建立荔枝核的指纹图谱。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准 指纹图谱和用途。
[0004] 本发明荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，是按以下步骤进行：
[0005] -、供试品溶液的制备：a、取荔枝核药材，用粉碎机将其粉碎，加5倍质量的质量 百分浓度为95%乙醇，浸泡10~12h，超声20~30min，过滤，分别收集固相物A和液相物 A，将固相物A加入5倍质量的质量百分浓度为95%乙醇中浸泡2~3h，超声20~30min， 过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；
[0006] b、将浸膏用少量蒸馏水溶解后上到大孔树脂色谱柱上，先用蒸馏水洗涤4个柱体 积，再用质量浓度为30%的乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，然后减压浓缩洗脱液至干， 得到干燥固体C;
[0007] c、将步骤b得到的干燥固体C，用色谱甲醇溶解成浓度为2mg/mL的溶液，用微孔滤 膜进行过滤，滤液即为供试品溶液；
[0008] 二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比 为9:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，以体积比为0. 2:100的磷酸和水的混合液为B相 进行梯度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱填料Thermo C18,规格为250X4. 6mm， 5 μπι;柱温为35°C ;流速0. 8mL/min，检测波长280nm，进样量10 μ L ;在此条件下分析供试 品溶液，得到荔枝核的指纹图谱。
[0009] 三、标准指纹图谱的确定：确定了 15个共有特征峰；以8号峰为对照峰，共有特 征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0. 380±0. 002%，2号峰相 对保留时间为0. 435±0. 002%，3号峰相对保留时间为0. 485±0. 002%，4号峰相对保留 时间为〇. 571±0. 001%，5号峰相对保留时间为0. 661±0. 001%，6号峰相对保留时间为 0. 737±0. 003%，7号峰相对保留时间为0. 842±0. 002%，8号峰相对保留时间为1. 000,9 号峰相对保留时间为1. 684±0. 006%，10号峰相对保留时间为1. 832±0. 005%，11号峰相 对保留时间为1. 934±0. 003%，12号峰相对保留时间为2. 053±0. 010%，13号峰相对保留 时间为2. 301 ±0. 002%，14号峰相对保留时间为2. 387±0. 003%，15号峰相对保留时间为 2. 882±0. 005%，上述共有特征峰构成了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图 谱。
[0010] 本发明荔枝核标准指纹图谱的用途是指荔枝核指纹图谱作为标准指纹图谱用于 荔枝核质量控制中。
[0011] 本发明的有益效果：
[0012] 本发明的荔枝核标准指纹图谱有15个共有特征峰，这些共有特征峰构成了荔枝 核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。本发明的荔枝核标准指纹图谱作为标准指 纹图谱经多批样品验证后可用于荔枝核质量控制中，用于从整体上评价和控制荔枝核药材 的质量，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定荔枝核整体质量的片面性，又减少了为 质量达标而人为添加对照成分的可能性。本发明荔枝核的高效液相色谱指纹图谱的建立方 法具有可重复性强、精密度高和稳定可靠、易于掌握的优点，适用于荔枝核药材的真伪、产 地和品质的鉴别和质量控制。
【附图说明】
[0013] 图1为试验1提供的荔枝核标准指纹图谱；其中1至15为荔枝核的15个共有特 征峰；
[0014] 图2为S1-S10是10批荔枝核药材指纹图谱。
【具体实施方式】
[0015] 本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。
【具体实施方式】 [0016] 一：本实施方式一、供试品溶液的制备：a、取蒸枝核药材，用粉碎机 将其粉碎，加5倍质量的质量百分浓度为95%乙醇，浸泡10~12h，超声20~30min，过滤， 分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入5倍质量的质量百分浓度为95%乙醇中浸 泡2~3h，超声20~30min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B混合，得到浸提液，将 浸提液减压浓缩得浸膏；
[0017] b、将浸膏用少量蒸馏水溶解后上到大孔树脂色谱柱上，先用蒸馏水洗涤4个柱体 积，再用质量浓度为30%的乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，然后减压浓缩洗脱液至干， 得到干燥固体C;
[0018] c、将步骤b得到的干燥固体C，用色谱甲醇溶解成浓度为2mg/mL的溶液，用微孔滤 膜进行过滤，滤液即为供试品溶液；
[0019] 二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比 为9:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，以体积比为0. 2:100的磷酸和水的混合液为B相 进行梯度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱填料Thermo C18,规格为250X4. 6mm， 5 μπι;柱温为35°C ;流速0. 8mL/min，检测波长280nm，进样量10 μ L ;在此条件下分析供试 品溶液，得到荔枝核的指纹图谱。
【具体实施方式】 [0020] 二：本实施方式与一不同的是：步骤一中的微孔滤膜 过滤是采用0. 45 μ m微孔滤膜进行过滤的。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0021] 三：本实施方式与一或二不同的是：步骤二中梯度洗 脱顺序为：〇min - 20min - 40min - 45min - 50min，体积比为9:1的甲醇和乙腈混合溶液 15 % - 20 % - 30 % - 35 % - 50 %。其它与一或二相同。
【具体实施方式】 [0022] 四：本实施方式采用一种荔枝核高效液相色谱指纹图谱的建立方法 得到的荔枝核标准指纹图谱。
[0023] 本实施方式的荔枝核标准指纹图谱有15个共有特征峰，这些共有特征峰构成了 荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。
【具体实施方式】 [0024] 五：本实施方式与四不同的是：荔枝核的标准指纹图 谱有15个共有特征峰；以8号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有 特征峰相对保留时间为0. 380 ± 0. 002 %，2号峰相对保留时间为0. 435 ± 0. 002 %，3号峰 相对保留时间为0. 485±0. 002%，4号峰相对保留时间为0. 571±0. 001%，5号峰相对保 留时间为〇. 661±0. 001%，6号峰相对保留时间为0. 737±0. 003%，7号峰相对保留时间为 0. 842±0. 002%，8号峰相对保留时间为1. 000,9号峰相对保留时间为1. 684±0. 006%，10 号峰相对保留时间为1. 832±0. 005%，11号峰相对保留时间为1. 934±0. 003%，12号峰相 对保留时间为2. 053±0. 010%，13号峰相对保留时间为2. 301 ±0. 002%，14号峰相对保留 时间为2. 387±0. 003%，15号峰相对保留时间为2. 882±0. 005%，这15个共有特征峰构成 了荔枝核的指纹特征，可作为荔枝核的标准指纹图谱。其它与四相同。
【具体实施方式】 [0025] 六：本实施方式荔枝核标准指纹图谱的用途是指荔枝核指纹图谱作 为标准指纹图谱用于荔枝核质量控制中。
[0026] 本实施方式的荔枝核标准指纹图谱作为标准指纹图谱经多批样品验证后可用于 荔枝核质量控制中，用于从整体上评价和控制荔枝核药材的质量，既避免了因只测定一、二 个化学成分而判定荔枝核整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为添加对照成分的 可能性。
[0027] 通过以下试验验证本发明的有益效果：