一种可以检测多种肿瘤的组合物及其应用_2

文档序号:9596213阅读:来源:国知局
,混匀,37 0C孵育30min,加封闭液继续37 V孵育22min,所述封闭液为含牛血清蛋白的洗涤液,其质量浓度为0.3mg/mL,加入封闭液可避免非特异性结合,再14000rpm,4°C条件下离心20min,去除上清液,稀释液重悬沉淀并洗涤一次,得到胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I,按质量比计算,胶体金:抗SlOOP蛋白多克隆抗体为5:0.21 ;
[0027]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为10?50 μ g/mL的用于识别肝癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-人肝癌组织AFU多克隆抗体标记物II,按质量比计算,胶体金:人肝癌组织AFU多克隆抗体为5:0.25 ;
[0028]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为10 μ g/mL的用于识别结肠癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)标记物III,按质量比计算,胶体金:结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)为5:0.23 ;
[0029](3)将所述聚合物按1:18的重量比溶于二氯甲烷,加入上述步骤(2)制得的标记物1、标记物I1、标记物III,用超声波处理30s,所述超声波处理的频率为35KHZ,经超声波处理可以使形成的聚合物均匀,得到胶体金标记的识别胃癌、肝癌、结肠癌三种肿瘤的特异性抗原的抗体共聚物。
[0030]将所述胶体金标记的识别胃癌、肝癌、结肠癌三种肿瘤的特异性抗原的抗体共聚物作为抗体载体参加免疫浊度反应,作为检测胃癌、肝癌、结肠癌的免疫增强体外诊断试剂,大大提高了检测的灵敏度。
[0031]实施例2:
[0032]—种可以检测胃癌、肝癌、结肠癌的组合物,是由用于识别胃癌特异性抗原的抗体、用于识别肝癌特异性抗原的抗体、用于识别结肠癌特异性抗原的抗体、聚合物、胶体金溶液组成;其中,所述用于识别胃癌特异性抗原的抗体为抗SlOOP蛋白多克隆抗体;所述用于识别肝癌特异性抗原的抗体为人肝癌组织AFU多克隆抗体;所述用于识别结肠癌特异性抗原的抗体为结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3);所述聚合物为可生物降解的聚合物,选自聚羟基醋酸、聚羟基丁酸酯、乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物或聚羟基烷基醇酯中的任意一种,这些课生物降解的聚合物生物相容性较好,也便于后期处理。
[0033]该纳米金标记的识别肿瘤特异性抗原的抗体共聚物制备方法为:
[0034](I)制备胶体金溶液:用质量百分比浓度为I %的梓檬酸三钠水溶液与质量百分比浓度为0.01%氯金酸水溶液,按1.5mL:1OOmL的体积比,将氯金酸溶液加热至沸腾,把柠檬酸三钠水溶液快速加入其中,搅拌反应至所得的反应液为酒红色,再加热lOmin,直至溶液透亮,冷至室温,然后用浓度为0.075mol/L的碳酸钾水溶液调节pH值为7.0,即得胶体金溶液;
[0035](2)在步骤(I)所得的胶体金溶液中,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为30 μ g/mL的用于识别胃癌特异性抗原的抗体水溶液,混匀,37 0C孵育30min,加封闭液继续37 V孵育23.5min,所述封闭液为含牛血清蛋白的洗涤液,其质量浓度为0.65mg/mL,加入封闭液可避免非特异性结合,再14000rpm,4°C条件下离心21min,去除上清液,稀释液重悬沉淀并洗涤一次,得到胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I,按质量比计算,胶体金:抗SlOOP蛋白多克隆抗体为5:0.22 ;
[0036]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为10?50 μ g/mL的用于识别肝癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-人肝癌组织AFU多克隆抗体标记物II,按质量比计算,胶体金:人肝癌组织AFU多克隆抗体为5:0.265 ;
[0037]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为30 μ g/mL的用于识别结肠癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗SlOOP蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)标记物III,按质量比计算,胶体金:结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)为5:0.245 ;
[0038](3)将所述聚合物按1:24的重量比溶于二氯甲烷,加入上述步骤(2)制得的标记物1、标记物I1、标记物III,用超声波处理45s,所述超声波处理的频率为35?55KHz,经超声波处理可以使形成的聚合物均匀,得到胶体金标记的识别胃癌、肝癌、结肠癌三种肿瘤的特异性抗原的抗体共聚物。
[0039]将所述胶体金标记的识别胃癌、肝癌、结肠癌三种肿瘤的特异性抗原的抗体共聚物作为抗体载体参加免疫浊度反应,作为检测胃癌、肝癌、结肠癌的免疫增强体外诊断试剂,大大提高了检测的灵敏度。
[0040]实施例3:
[0041]—种可以检测胃癌、肝癌、结肠癌的组合物,是由用于识别胃癌特异性抗原的抗体、用于识别肝癌特异性抗原的抗体、用于识别结肠癌特异性抗原的抗体、聚合物、胶体金溶液组成;其中,所述用于识别胃癌特异性抗原的抗体为抗SlOOP蛋白多克隆抗体;所述用于识别肝癌特异性抗原的抗体为人肝癌组织AFU多克隆抗体;所述用于识别结肠癌特异性抗原的抗体为结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3);所述聚合物为可生物降解的聚合物,选自聚羟基醋酸、聚羟基丁酸酯、乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物或聚羟基烷基醇酯中的任意一种,这些课生物降解的聚合物生物相容性较好,也便于后期处理。
[0042]该纳米金标记的识别肿瘤特异性抗原的抗体共聚物制备方法为:
[0043](I)制备胶体金溶液:用质量百分比浓度为I %的梓檬酸三钠水溶液与质量百分比浓度为0.01%氯金酸水溶液,按1.5mL:1OOmL的体积比,将氯金酸溶液加热至沸腾,把柠檬酸三钠水溶液快速加入其中,搅拌反应至所得的反应液为酒红色,再加热lOmin,直至溶液透亮,冷至室温,然后用浓度为0.lmol/L的碳酸钾水溶液调节pH值为8.0,即得胶体金溶液;
[0044](2)在步骤(I)所得的胶体金溶液中,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为10?50 μ g/mL的用于识别胃癌特异性抗原的抗体水溶液,混匀,37°C孵育30min,加封闭液继续37°C孵育25min,所述封闭液为含牛血清蛋白的洗涤液,其质量浓度为lmg/mL,加入封闭液可避免非特异性结合,再14000rpm,4°C条件下离心22min,去除上清液,稀释液重悬沉淀并洗涤一次,得到胶体金-抗S100P蛋白多克隆抗体标记物I,按质量比计算,胶体金:抗S100P蛋白多克隆抗体为5:0.23 ;
[0045]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为50 μ g/mL的用于识别肝癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗S100P蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-人肝癌组织AFU多克隆抗体标记物II,按质量比计算,胶体金:人肝癌组织AFU多克隆抗体为5:0.28 ;
[0046]另取步骤(I)所得的胶体金溶液,在磁力搅拌下缓慢加入浓度为50 μ g/mL的用于识别结肠癌特异性抗原的抗体水溶液,按照上述制备胶体金-抗S100P蛋白多克隆抗体标记物I同样的操作方法,得到胶体金-结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)标记物III,按质量比计算,胶体金:结肠癌抗原3抗体(SDCCAG3)为5:0.26 ;
[0047](3)将所述聚合物按1:30的重量比溶于二氯甲烷,加入上述步骤(2)制得的标记物1、标记物I1、标记物III,用超声波处理60s,所述超声波处理的频率为55KHZ,经超声波处理可以使形成的聚合物均匀,得到
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