由实施例1表4中标准曲线计算，样品A中各组分含量如表9所述。
[0161]表9 阳162]
阳163] 效果实施例1 阳164]检出限的测定 阳1化]将实施例1中浓度为10μg/Kg混合标准工作溶液摇匀，进样10μL按实施例1中LC-MS/MS条件分析。信噪比S/N= 3时下平行蒸发仪浓缩至干的检出限，W及信噪比S/N =10时，青霉嚷挫酸和脱簇青霉嚷挫酸的定量限如表10所示。 阳166]表10阳167]
[0168] 效果实施例2
[0169] 精密度的测定 阳170] 取6份实施例1中制备的30μg/Kg的混合标准工作溶液，作为样品液，每次进样 10μL重复进样8次，按实施例1中LC-MS/MS的条件进行分析。具体测量结果如表11所 示。测定各次的峰面积Α，RSD为9. 86%(η= 6)，表明精密度良好。 阳171] RSD为相对标准偏差（relativestandarddeviation)，指标准偏差与计算结果算 术平均值的比值。 阳17引 表11 阳 173]
[0174] 效果实施例3 阳17引稳定性的测定 阳176] 将实施例1中制备的浓度为100μg/Kg的混合标准工作溶液，连续进样8次，测 定青霉嚷挫酸和脱簇青霉嚷挫酸的峰面积，外标法定量，计算其浓度，其结果如表12所示， RSD值为3. 25%，表明检测方法稳定性良好。 阳177] RSD为相对标准偏差（relativestandarddeviation)，指标准偏差与计算结果算 术平均值的比值。 阳178] 表12 阳 179]
[0180]效果实施例4 阳181] 本实施例用于证明本发明预处理方法的准确性（测定其回收率），其结果如表13 所述。 阳182] 取Ξ组同样的普通牛奶（市售产品），编号为1、2、3。其中，编号1为空白样品，不 做任何处理；编号2中的牛奶分别加入实施例1的40μg/Kg的青霉嚷挫酸标准溶液ImL、 实施例1的40μg/Kg的脱簇青霉嚷挫酸标准溶液ImL;编号3中的牛奶分别加入实施例1 的400μg/Kg的青霉嚷挫酸标准溶液ImL和实施例1的400μg/Kg的脱簇青霉嚷挫酸标准 溶液ImL。将上述3组分别进行如实施例2中的预处理，按照实施例1中LC-MS/MS进行分 析，上述3组分别重复进样5次，取平均值。计算其回收率，得到结果如表13所示。
[0183]表13加标回收率实验结果 阳184]
阳185]注明：N表示未检出。
【主权项】
1. 一种青霉嚷挫酸和/或脱簇青霉嚷挫酸的检测方法，其特征在于，其包括W下步骤： (1) 将待测样品和乙腊的混合物，离心收集上清液；所述的待测样品为不含固体颗粒 的乳制品； (2) 将所述上清液上样至已经活化的OasisP化MEHLB固相萃取小柱，收集流出液，即 得预处理后的待测样品； (3) 将所述预处理后的待测样品去除溶剂，再用溶剂A溶解，过滤，得进料样品；所述溶 剂A为甲醇水溶液、乙腊水溶液或水； (4) 将步骤（3)中所述进料样品再进行高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测青霉 嚷挫酸和/或脱簇青霉嚷挫酸，即可。2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的待测样品为原料乳 和/或液态乳制品； 所述的液态乳制品较佳地为高巧牛奶、高铁牛奶、低乳糖牛奶和低脂牛奶中的一种或 多种； 所述的原料乳较佳地为牛乳和/或羊乳。3. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的待测样品中，青霉嚷 挫酸的含量为20~1000μg/Kg，较佳地为20~50μg/Kg;所述的待测样品中，脱簇青霉嚷 挫酸的含量为10~1000μg/Kg，较佳地为20~50μg/Kg; 步骤（1)中，所述乙腊的添加量为3~40mL/l~4g待测样品，较佳地为3~lOmL/lg待测样品； 步骤（1)中，在所述离屯、的操作之前，先将所述混合物进行縱满震荡；所述的旋满震荡 的时间较佳地为1~lOmin。4. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1)中，所述混合物中还包含酸； 所述酸较佳地为甲酸和/或乙酸；所述酸的添加量较佳地为0.1~2%，更佳地为0.8~ 1.2%，上述百分比为所述酸占所述乙腊的体积百分比浪佳地使用所述乙腊和酸进行两次 离屯、操作。5. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的离屯、的转速为 5000~15000巧m;所述的离屯、的时间为5~30min; 步骤（1)中，将所述上清液先进行定容后再进行步骤（2)的操作；所述定容的操作过程 中，较佳地使用水或乙腊进行定容；所述定容的终点较佳地为10~25mL/g待测样品。6. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2)中，活化采用的溶剂种类为乙 腊水溶液；所述乙腊水溶液中，乙腊占水的体积百分比较佳地为20~90% ;所述乙腊水溶 液的用量较佳地为3~lOmL; 步骤（2)中，所述上清液在所述固相萃取小柱中的流速为0. 025~0. 30mL/s。7. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（3)中，所述去除溶剂的方法为使 用平行蒸发仪在20~50°C下浓缩至干； 步骤（3)中，所述乙腊水溶液中，乙腊占水的体积百分比为1~20% ;所述甲醇水溶液 中，甲醇占水的体积百分比为1~20% ; 步骤（3)中，所述溶剂A的用量为1~2mL/g所述待测样品； 步骤（3)中，所述的过滤的方法为采用孔径为0. 22μm或0. 45μm的有机微孔滤膜进 行过滤。8. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾 串联二级质谱检测中，高效液相色谱法检测的色谱柱为十八硅烷键合硅胶色谱柱；所述的 十八硅烷键合硅胶色谱柱的规格较佳地为4.6mmX250mm或4.6mmX150mm; 步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，高效液相色谱法使用梯 度洗脱的方法，流动相A为乙腊，流动相B为甲醇水溶液；所述流动相B中，甲醇的体积分数 较佳地为0. 05~1 % ; 其中，较佳地，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如表2所示： 表2其中，百分比为各组分分别占流动相A和流动相B总体积的体积百分比。9. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾 串联二级质谱检测中，高效液相色谱法检测的柱溫为25~35°C; 步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，所述的高效液相色谱法 检测的所述待测样品的流速为0. 3~1. 5mL/min; 步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，所述青霉嚷挫酸的高效 液相色谱法检测的检测波长为225nm;所述脱簇青霉嚷挫酸的高效液相色谱法检测的检测 波长为225nm; 步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，高效液相色谱法检测的 进样体积为15-25μL。10. 如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4)所述的高效液相色谱-电喷 雾串联二级质谱检测中，质谱检测的条件为： 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压如表3所示： 表3离子源：电喷雾离子源； 扫描模式：正离子模式； 毛细管电压：3500伏； 离子源溫度120°C; 去溶剂溫度：550°C; 检测方式：多反应监测。
【专利摘要】本发明公开了一种青霉噻唑酸和/或脱羧青霉噻唑酸的检测方法。其包括以下步骤：①将待测样品和乙腈的混合物，离心，收集上清液；②将所述上清液上样至已经活化的Oasis？PRiME？HLB固相萃取小柱，收集流出液；③将流出液去除溶剂，再用溶剂溶解，过滤；④将过滤后料液进行LC-MS/MS检测。本发明的预处理方法快速、简单、经济、可靠，能够有效地提取出待测组分，去除复杂基质影响，有益于待测样品的快速检测；在保持较高提取率的同时，节约了有机溶剂的使用、排放和损失，有利于环境保护，节约了预处理步骤、时间和能耗，方法快速，简单，精密度高，准确性高，具有较强的应用价值。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/06
【公开号】CN105403644
【申请号】CN201510995900
【发明人】王渊龙, 游春苹, 刘振民
【申请人】光明乳业股份有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月25日