、1. 3g过硫酸钾、和0. 03g苯乙烯磺酸钠。由此获得的乳胶颗粒的平均粒度为 0. 40μm(±0. 01μm)。
[0133] 3)大于 0. 4μπι
[0134] 用与第1)节相同的方式获得乳胶颗粒，不同之处在于使用1200g水、200g苯 乙烯单体、1. 2g过硫酸钾、和0.Olg苯乙烯磺酸钠。由此获得的乳胶颗粒的平均粒度为 0. 42μm(±0. 01μm)。
[0135] (抗体固定化乳胶的制备）
[0136] 将如前所述获得的两种单克隆抗体（#91和#51)，利用下述材料和方法固定化在 载体上。
[0137] 1.材料
[0138] (1)抗PSA单克隆抗体
[0139] #63291 (#91)
[0140] #63251 (#51)
[0141] (将这些单克隆抗体溶解于PBS中。）
[0142] (2)乳胶
[0143] 如前所述获得的聚苯乙烯乳胶（平均粒度：0. 19-42μm)
[0144] 2.抗体固定化乳胶液的制备
[0145] (1)含#91抗体-乳胶复合物（#91Lx)液体的制备
[0146] 1)将乳胶和#91抗体分别用20mM甘氨酸缓冲液（pH:9)稀释，制备1 %乳胶液和 #91抗体液（0. 4mg/ml)。混合乳胶液和#91抗体液（1 : 1，v/v)，并将混合物搅拌约1小 时。
[0147] 2)向混合物中加入封闭试剂（10%BSA) (0. 1 : 2,v/v)，并将混合物搅拌约1小 时。
[0148] 3)离心除去上清液，悬于5mMMOPS缓冲液（pH:7. 0)中并稀释，以使600nm波长 下的吸光度为3Abs/ml，获得#91抗体固定化的乳胶（#91Lx)液。
[0149] (2)含#51抗体-乳胶复合物（#51Lx)液体的制备
[0150] 1)将乳胶和#51抗体分别用20mM甘氨酸缓冲液（pH:8)稀释，制备1 %乳胶液和 #51抗体液（0. 4mg/ml)。混合乳胶液和#51抗体液（1 : 1，v/v)，并将混合物搅拌约1小 时。
[0151] 2)向混合物中加入封闭试剂（10%BSA) (0. 1 : 2,v/v)，并将混合物搅拌约1小 时。
[0152] 3)离心除去上清液，悬于5mMMOPS缓冲液（pH:7. 0)中并稀释，以使600nm波长 下的吸光度为3Abs/ml，获得#51抗体固定化的乳胶（#51Lx)液。
[0153][测试例1]
[0154](由于乳胶平均粒度改变导致的c/f比值改变的测定）
[0155] 使用fPSA和PSA-ACT(浓度：5ng/ml)作为测量样品，使用下述PSA测定试剂和测 量条件确定与fPSA和PSA-ACT的反应性。确定与PSA-ACT的反应性和与fPSA的反应性的 比值"PSA-ACT/fPSA"（c/f比值）。结果显示于表1中。
[0156] (l)PSA测定试剂
[0157] 第一试剂（缓冲液）
[0158]包括 0· 5MKC1、0. 1%BSA(Proliant)、和 0· 3%PVPK-90 的 30mMHEPES缓冲液 (pH：7. 0)
[0159] 第二试剂（抗体固定化乳胶液）
[0160] 包括小鼠抗PSA单克隆抗体固定化（两种抗体固定化颗粒的混合比，含#91Lx液 体：含#51Lx液体=1 : 1)的乳胶颗粒的5mMMOPS缓冲液（pH:7. 0)。
[0161] 本实施例中使用的含抗体液体的每种组合分别用具有相同平均粒度 (0. 19-0. 42μm)并且其上固定化了 #91抗体或#51抗体的乳胶颗粒制备。
[0162] (2)测量条件
[0163] 测量系统：Hitachi7170自动分析仪（H-7170)
[0164] 测量参数：
[0165] 分析方法：2-终点法（测量点：19至34)
[0166] 液量（μ1) : 14. 4/90/90
[0167]测量波长（nm) :570 (主）/800 (副）
[0168] 校准：样条
[0169]用Nanopia(注册商标）PSA校准器（PSA浓度：0、4· 2,10、和 29ng/ml，Sekisui MedicalCo.，Ltd.)进行校准。
[0170] (3)测量样品
[0171]将fPSA和PSA-ACT(Fitzgerald)溶解于包括 1 %BSA和0·1 %NaN3的PBS(pH: 7. 4)中来制备测量样品。
[0172] [表 1]
[0173]
[0174] 根据表1显示的结果，证明当平均粒度大于0. 20μm并等于或小于0. 40μm时c/ f比值为85%或更高（接近于100% )且获得了等摩尔反应。
[0175] 当平均粒度为0. 20μm或更小，或超过0. 40μm时，c/f比值小于80%且没有获得 等摩尔反应。
[0176][测试例2]
[0177](通过加入凝集促进剂调节c/f比值）
[0178] 使用fPSA和PSA-ACT(浓度：35ng/ml)作为测量样品。在与测试例1中所使用 的相同的测量条件下，使用下述PSA测量试剂测定与fPSA和PSA-ACT的反应性，并测定与 PSA-ACT的反应性和与fPSA的反应性的比值"PSA-ACT/fPSA"（c/f比值）。结果显示于表 2至4。
[0179] (l)PSA测定试剂 [0180] 第一试剂（缓冲液）
[0181]包括0· 5M KC1、0. 1 % BSA(Proliant)、和0-0· 8 %凝集促进剂（PEG(聚乙二 醇）（数值为数均分子量）、PVP(聚乙烯吡咯烷酮）（PVP K-30的分子量：40,000, PVP K-90的分子量：360, 000，Wako Pure Chemical Industries，Ltd. )、MPC聚合物（分 子量：1，000, 000)、普鲁兰PI-20 (分子量：大约200, 000, Hayashibara Co.，Ltd)、或 PGA-Na (聚-γ -谷氨酸钠）（数值为数均分子量）（参见表2至4))的30mM HEPES缓冲液 (pH :7. 0)〇
[0182](比较例中不加入凝集促进剂。）
[0183] 第二试剂（抗体固定化乳胶液）
[0184] 包括小鼠抗PSA单克隆抗体固定化的乳胶颗粒（两种抗体固定化颗粒的混合比， 含 #91Lx液体：含 #51Lx液体=1 : 1)的 5mMMOPS缓冲液（pH:7· 0)。
[0185] 本实施例中含抗体的液体是使用具有相同平均粒度（0.29μπι)并且其上固定化 了 #91抗体或#51抗体的乳胶来制备。
[0186][表2]
[0187]
[0192] 根据表2至4显示的结果，证明由于加入凝集促进剂以及凝集促进剂的量的增加， 使得c/f比值从大约82%接近100%，通过适当调节凝集促进剂的量通过一步反应获得了 等摩尔反应（c/f比值：85%或更高）（表现出c/f比值增加至大约100%的效果）。应注 意，术语"一步反应"指同时加入两种类型的抗PSA单克隆抗体并使其反应。
[0193][测试例3]
[0194](使用不同抗体组合的反应性的测定）
[0195] 使用单克隆抗体#79和#91、#14和#51、#91和#17、或#14和#17的组合代替单 克隆抗体#51和#91的组合，并且使用下述包括0. 6%MPC聚合物作为凝集促进剂的测量 试剂来测定c/f比值。其它条件与测试例1中使用的那些相同。使用fPSA和PSA-ACT(浓 度：35ng/ml)作为样品。
[0196] (l)PSA测定试剂
[0197] 第一试剂（缓冲液）
[0198]包括 0· 5MKC1、0. 1%BSA(Proliant)、和 0· 6%MPC聚合物的 30mMHEPES缓冲液 (pH：7. 0)
[0199] 结果显不在表5中。
[0200][表 5]
[0201]
[0202] 根据表5显示的结果，证明通过使用上述组合的任何一种，获得了等摩尔反应（c/ f比值：89. 0-101. 9% )。
[0203](测试例中使用的单克隆抗体的Kd值）
[0204] 表6显示了测试例中使用的单克隆抗体对fPSA和PSA-ACT的Kd值。如表6所示， 证明抗PSA单克隆抗体对游离PSA的解离常数（fKd)和对游离PSA与α1-抗胰凝乳蛋白 酶的复合物（PSA-ACT)的比值（fKd/cKd)优选为大于0. 1和等于或小于2.0,对游离PSA的 解离常数（fKd)为10nM或更小。
[0205][表6]
[0206]
[0207]当使用 #16 抗体（fKd= 1. 33nM，cKd= 23. 18nM，fKd/cKd=0·057)代替测试例 3-3中的#91抗体时，c/f比值为52. 4%，没有获得等摩尔反应。
[0208] 表6中的Kd值在下述实验条件下测定。
[0209] 1.Biacore(注册商标）系统和专用试剂（GEHealthcare(前身为Biacore)，
[0210] (i)-(viii)表示Biacore的产