一种生肌膏中氨基酸指纹图谱的分析方法_4

文档序号:9764986阅读:来源:国知局
燥物, 取干燥物0.25g置于安飯中,向安飯中加入6mo 1/L盐酸溶液6mL,110°C水解12h,放置至室 溫,过滤至50mL量瓶中,过滤剩余的残渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量 取50mL量瓶中的溶液5血,蒸干,用0.1 mo 1 /L盐酸溶液转移至1 OmL量瓶中,定容,摇匀,即得 空白样品溶液;
[0071] 步骤3,对照品溶液的制备:称取天冬氨酸、谷氨酸、L-径脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、 组氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、鄉氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯 丙氨酸、赖氨酸等17种氨基酸对照品于量瓶中,加 O.lmol/L盐酸溶液制成每ImL分别含天冬 氨酸43yg、谷氨酸12化ga-径脯氨酸84yg、丝氨酸44yg、甘氨酸210蛇、组氨酸29yg、苏氨酸 10化g、丙氨酸56yg、精氨酸75yg、脯氨酸10化g、酪氨酸66yg、鄉氨酸7祉g、甲硫氨酸60yg、异 亮氨酸43yg、亮氨酸77yg、苯丙氨酸9 Iyg、赖氨酸10化g的对照品溶液;
[0072] 步骤4,溶液的衍生化:将供试品溶液、空白样品溶液W及对照品溶液各IOmL分别 置于离屯、管中,依次加 Imol/LS乙胺的乙腊溶液ImL和O.lmol/L异硫氯酸苯醋(PITC)的乙 腊溶液ImL,縱满混合5min后,室溫放置60min,再向其中加入正已烧4mL,縱满混合5min后, 放置1 Omin,取下层溶液,再向下层溶液中加入正已烧4mL,振摇,放置1 Omin,取放置W后的 下层溶液,微孔过滤后,微孔过滤所采用的微孔滤膜的孔径为0.45WH,即得经衍生化的供试 品溶液、经衍生化的空白样品溶液W及经衍生化的对照品溶液;
[0073] 步骤5,色谱测定:色谱条件为Hypersi 1 0DS-2C18色谱柱(250mmX 4.6mm,5皿),流 动相A为乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液,其中乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液的PH为6.5,乙腊与 O.lmol/L醋酸钢溶液的配比为3:97,流动相B为乙腊-水,其中乙腊与水的配比为4:1,进行 梯度洗脱,体积流量ImL/min,检测波长254nm,柱溫40°C,进样量化L。
[0074] 实施例8
[0075] -种生肌膏中氨基酸指纹图谱的分析方法,生肌膏包含下列重量组份的原料药: 象皮19份,当归13份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油450份,炉甘石29份,生石膏29份 W及蜂蜡88份,按照下述方法进行测定:
[0076] 步骤1,供试品溶液的制备:取生肌膏45g置于锥形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥 形瓶中加入热水45mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙 化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物,取干燥物0.3g置于安飯中,向安飯 中加入6mol/L盐酸溶液5血,110°C水解1化,放置至室溫,过滤至50血量瓶中,过滤剩余的残 渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量取50mL量瓶中的溶液5mL,蒸干,用 0.1mol/L盐酸溶液转移至IOmL量瓶中,定容,摇匀,即得供试品溶液;
[0077] 步骤2,空白样品溶液的制备:按照当归13份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油 450份,炉甘石29份,生石膏29份W及蜂蜡88份,将炉甘石、石膏粉碎成极细粉,过筛备用,当 归、龟甲、血余、生地与麻油同置锅内炸枯,去渣,滤过,将蜂蜡完全烙化后滤入热油内,离火 降溫,加入炉甘石粉及石膏粉,不断揽拌至冷却成膏,即得空白样品,取空白样品45g置于锥 形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥形瓶中加入热水45mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷 冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物, 取干燥物0.3g置于安飯中,向安飯中加入6mol/L盐酸溶液5mL,110°C水解Uh,放置至室溫, 过滤至50mL量瓶中,过滤剩余的残渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量取 SOmL量瓶中的溶液5mL,蒸干,用0.1 mo 1/L盐酸溶液转移至IOmL量瓶中,定容,摇匀,即得空 白样品溶液;
[0078] 步骤3,对照品溶液的制备:称取天冬氨酸、谷氨酸、L-径脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、 组氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、鄉氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯 丙氨酸、赖氨酸等17种氨基酸对照品于量瓶中,加 O.lmol/L盐酸溶液制成每ImL分别含天冬 氨酸43yg、谷氨酸12化ga-径脯氨酸84yg、丝氨酸44yg、甘氨酸210蛇、组氨酸29yg、苏氨酸 10化g、丙氨酸56yg、精氨酸75yg、脯氨酸10化g、酪氨酸66yg、鄉氨酸7祉g、甲硫氨酸60yg、异 亮氨酸43yg、亮氨酸77yg、苯丙氨酸9 Iyg、赖氨酸10化g的对照品溶液;
[0079] 步骤4,溶液的衍生化:将供试品溶液、空白样品溶液W及对照品溶液各IOmL分别 置于离屯、管中,依次加 Imol/LS乙胺的乙腊溶液ImL和O.lmol/L异硫氯酸苯醋(PITC)的乙 腊溶液ImL,縱满混合5min后,室溫放置60min,再向其中加入正已烧4mL,縱满混合5min后, 放置1 Omin,取下层溶液,再向下层溶液中加入正已烧4mL,振摇,放置1 Omin,取放置W后的 下层溶液,微孔过滤后,微孔过滤所采用的微孔滤膜的孔径为0.45WH,即得经衍生化的供试 品溶液、经衍生化的空白样品溶液W及经衍生化的对照品溶液;
[0080] 步骤5,色谱测定:色谱条件为Hypersi 1 0DS-2C18色谱柱(250mmX 4.6mm,5皿),流 动相A为乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液,其中乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液的PH为7.0,乙腊与 O.lmol/L醋酸钢溶液的配比为5:95,流动相B为乙腊-水,其中乙腊与水的配比为3:2,进行 梯度洗脱,体积流量ImL/min,检测波长254nm,柱溫40°C,进样量化L。
[0081 ] 实施例9
[0082] -种生肌膏中氨基酸指纹图谱的分析方法,生肌膏包含下列重量组份的原料药: 象皮18份,当归15份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油500份,炉甘石29份,生石膏29份 W及蜂蜡88份,按照下述方法进行测定:
[0083] 步骤1,供试品溶液的制备:取生肌膏40g置于锥形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥 形瓶中加入热水40mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙 化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物,取干燥物0.25g置于安飯中,向安飯 中加入6mol/L盐酸溶液6血,110°C水解12h,放置至室溫,过滤至50血量瓶中,过滤剩余的残 渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量取50mL量瓶中的溶液5mL,蒸干,用 0.1mol/L盐酸溶液转移至IOmL量瓶中,定容,摇匀,即得供试品溶液;
[0084] 步骤2,空白样品溶液的制备:按照当归15份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油 500份,炉甘石29份,生石膏29份W及蜂蜡88份,将炉甘石、石膏粉碎成极细粉,过筛备用,当 归、龟甲、血余、生地与麻油同置锅内炸枯,去渣,滤过,将蜂蜡完全烙化后滤入热油内,离火 降溫,加入炉甘石粉及石膏粉,不断揽拌至冷却成膏,即得空白样品,取空白样品40g置于锥 形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥形瓶中加入热水40mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷 冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物, 取干燥物0.25g置于安飯中,向安飯中加入6mo 1/L盐酸溶液6mL,110°C水解12h,放置至室 溫,过滤至50mL量瓶中,过滤剩余的残渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量 取50mL量瓶中的溶液5血,蒸干,用0.1 mo 1 /L盐酸溶液转移至1 OmL量瓶中,定容,摇匀,即得 空白样品溶液;
[0085] 步骤3,对照品溶液的制备:称取天冬氨酸、谷氨酸、L-径脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、 组氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、鄉氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯 丙氨酸、赖氨酸等17种氨基酸对照品于量瓶中,加 O.lmol/L盐酸溶液制成每ImL分别含天冬 氨酸43yg、谷氨酸12化ga-径脯氨酸84yg、丝氨酸44yg、甘氨酸210蛇、组氨酸29yg、苏氨酸 10化g、丙氨酸56yg、精氨酸75yg、脯氨酸10化g、酪氨酸66yg、鄉氨酸7祉g、甲硫氨酸60yg、异 亮氨酸43yg、亮氨酸77yg、苯丙氨酸9 Iyg、赖氨酸10化g的对照品溶液;
[0086] 步骤4,溶液的衍生化:将供试品溶液、空白样品溶液W及对照品溶液各IlmL置于 离屯、管中,依次加 Imol/LS乙胺的乙腊溶液1.2mL和O.lmol/L异硫氯酸苯醋(PITC)的乙腊 溶液1.2mL,縱满混合6min后,室溫放置60min,再向其中加入正已烧4mL,縱满混合6min后, 放置IOmin,取下层溶液,再向下层溶液中加入正已烧6mL,振摇,放置12min,取放置W后的 下层溶液,微孔过滤后,微孔过滤所采用的微孔滤膜的孔径为0.35WH,即得经衍生化的供试 品溶液、经衍生化的空白样品溶液W及经衍生化的对照品溶液;
[0087] 步骤5,色谱测定:色谱条件为Hypersi 1 0DS-2C18色谱柱(250mmX 4.6mm,5皿),流 动相A为乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液,其中乙腊-0 . Imol/L醋酸钢溶液的PH为6.5,乙腊与 O.lmol/L醋酸钢溶液的配比为3:97,流动相B为乙腊-水,其中乙腊与水的配比为4:1,进行 梯度洗脱,体积流量ImL/min,检测波长254nm,柱溫40°C,进样量化L。
[0088] 实施例10
[0089] -种生肌膏中氨基酸指纹图谱的分析方法,生肌膏包含下列重量组份的原料药: 象皮18份,当归15份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油500份,炉甘石29份,生石膏29份 W及蜂蜡88份,按照下述方法进行测定:
[0090] 步骤I,供试品溶液的制备:取生肌膏45g置于锥形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥 形瓶中加入热水45mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙 化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物,取干燥物0.3g置于安飯中,向安飯 中加入6mol/L盐酸溶液5血,110°C水解1化,放置至室溫,过滤至50血量瓶中,过滤剩余的残 渣用纯化水反复冲洗3次,加纯化水至刻度,摇匀,量取50mL量瓶中的溶液5mL,蒸干,用 0.1mol/L盐酸溶液转移至IOmL量瓶中,定容,摇匀,即得供试品溶液;
[0091] 步骤2,空白样品溶液的制备:按照当归15份,血余13份,生地25份,龟甲25份,麻油 500份,炉甘石29份,生石膏29份W及蜂蜡88份将炉甘石、石膏粉碎成极细粉,过筛备用,当 归、龟甲、血余、生地与麻油同置锅内炸枯,去渣,滤过,将蜂蜡完全烙化后滤入热油内,离火 降溫,加入炉甘石粉及石膏粉,不断揽拌至冷却成膏,即得空白样品,取空白样品45g置于锥 形瓶中,水浴加热使其烙化,向锥形瓶中加入热水45mL,充分揽拌,静置冷却后置于冰箱冷 冻化,待凝固后,取水层冷冻层,烙化,过滤,滤渣用无水乙醇洗涂3次后,干燥后得干燥物, 取干燥物0.3g置于安飯中,向安飯中加入6mol/L盐酸溶液5mL,110°C水解Uh,放置至室溫, 过滤至50mL量
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