液（l〇〇〇mg/L):准确称取丙烯酰胺标准品，用甲醇溶解并 定容，使丙烯酰胺浓度为l〇〇〇mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0032]②丙烯酰胺中间溶液（100mg/L):移取丙烯酰胺标准储备溶液lml，加甲醇稀释至 l〇ml，使丙烯酰胺浓度为100mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0033] ③丙烯酰胺工作溶液I(10mg/L):移取丙烯酰胺中间溶液lml，加0.1%甲酸稀释至 l〇ml，使丙烯酰胺浓度为10mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0034]④丙烯酰胺工作溶液II (lmg/L):移取丙烯酰胺工作溶液I lml，加0.1 %甲酸稀释 至10ml，使丙稀酰胺浓度为lmg/L，现用现配。
[0035] ⑤取6个10ml容量瓶，分别移取0 · lml、0 · 5ml、lml丙烯酰胺工作溶液II和0 · 5ml、 lml和3ml丙烯酰胺工作溶液I用甲酸稀释至刻度。标准系列溶液浓度分别为lug/L、10ug/L、 50ug/L、100ug/L、500ug/L、1000ug/L、3000ug/L。现配现用。
[0036] b.色谱条件
[0037] 柱子：Diamonsil C18 250X4.6mm，5ym
[0038] 流动相：甲醇:0 · 1 %甲酸:水=10:90( V/V)
[0039] 流速:0.3ml/min
[0040] 进样量:20μ1
[0041 ] 出峰时间：5.2min左右
[0042] 检测波长：198-210nm
[0043] 柱温：25°C
[0044] c.质谱条件
[0045] 在micrOTOF-Q II质谱仪上测定，得到分析物的子离子。
[0046]质谱条件：
[0047]检测方式:选择反应监测EIC;
[0048] 扫描宽度(m/z):0.002;
[0049] 扫描时间（s):0.500;
[0050] 扫描事件数：1;
[0051] 峰宽Ql(FWHM) :0.70;
[0052] 进样方式:部分体积；
[0053] 其他质谱参数见下表1和表2。
[0054] 表1.质谱参数
[0055]
[0056]表2.分析物质谱分析参数
[0057]
[0058] 实施例2:
[0059] 牛干巴分别于120、140、160、170、180、190°C油炸4min后，分别称取不同温度油炸 下的牛干巴样品2g于烧杯中，按照上述实验步骤进行操作，测定不同温度油炸下牛干巴中 丙烯酰胺的含量。经检测油炸120、140、160、170、180、190°C油炸后的牛干巴中丙烯酰胺含 量分别为 10.136yg/kg、34.137yg/kg、103.5249yg/kg、145.676yg/kg、81.6158yg/kg、8.288 yg/kg。
[0060] 实施例3:
[0061] 直接称取电烤鸡样品2g于烧杯中，按照上述实验步骤进行操作，测定电烤鸡样品 中丙烯酰胺的含量。经检测烤鸡腿中丙烯酰胺含量为158.37yg/kg。
[0062] 以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明 的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和 改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其 等同物界定。
【主权项】
1. 一种热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:包括以下步骤： 步骤1:称取粉碎后的热加工肉制品样品l-5g置于离心管中； 步骤2:将步骤1中的肉制品样品加入提取溶剂，取3ml上清液加热水浴离心； 步骤3:取上清液加卡瑞试剂1、2各100μΙ离心； 步骤4:取上清液加7.5ml正己烷，振荡2min，移去上层正己烷； 步骤5:水浴氮吹干，加入lml蒸馏水振荡2min，过柱收集过滤后样液，将样液过滤膜收 集备测； 步骤6:色谱测定。2. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 1中所述的样品为热加工后的肉制品，包括油炸牛干巴、烧鸡、烤鸭中的一种或几种组合物。3. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 2中所述的提取溶剂为0.1 %的甲酸水溶液，提取温度为60°C;提取时间为60min。4. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 3 所述的离心为 1000-5000r/min，8-12min。5. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 5中所述的氮吹干温度为50°C。6. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 5中所述的固相萃取小柱为C18，流动相为甲醇:0.1 %甲酸:水=5:95。7. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 5中所述的收集洗脱液过滤优选为用0.45um的过滤膜过滤。8. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 6中所述的色谱测定采用高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱联用仪中采用正离子电 离模式和多反应监测模式进行检测。9. 根据权利要求1所述的热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，其特征在于:步骤 6中所述的色谱测定的色谱柱为超高效液相色谱专用C18色谱柱;流动相为：甲醇:0.1%甲 酸水=10:90V/V，电离模式为ESI+;检测波长:205nm;柱温:25°C。
【专利摘要】本发明公开了一种热加工肉制品中丙烯酰胺含量的检测方法，包括以下步骤:步骤1：称取粉碎后的热加工肉制品样品1-5g置于离心管中；步骤2：将步骤1中的肉制品样品加入提取溶剂，取3ml上清液加热水浴离心；步骤3：取上清液加卡瑞试剂1、2各100μl离心；步骤4：取上清液加7.5ml正己烷，振荡2min，移去上层正己烷；步骤5：水浴氮吹干，加入1ml蒸馏水振荡2min，过柱收集过滤后样液，将样液过滤膜收集备测；步骤6：色谱测定。与现有技术相比，本发明的有益效果为：本方法排除检测中杂质的干扰，使检测结果更准确、更可靠。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105572287
【申请号】CN201610063717
【发明人】胡永金, 葛长荣, 谷大海, 普岳红, 和劲松, 丁晓倩, 杨立亭, 王雪峰, 范江平
【申请人】云南农业大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月29日