酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒的制备方法
【专利摘要】一种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，由对照试剂和测试试剂组成，试剂成份包括硝酸亚汞、硝酸镍、硫酸汞、乳化剂及其相应的溶剂硝酸、硫酸，对照试剂及测试试剂均由按体积比A溶液:B溶液:C溶液:D溶液=3:5:1:1混合而成，A溶液为硫酸汞溶于硫酸溶液，B溶液为硝酸镍溶于硝酸溶液，C溶液为硝酸亚汞溶于硝酸溶液，D溶液为乳化剂溶于硝酸溶液。本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对已确诊的恶性肿瘤患者和非恶性肿瘤病人进行测试，与病理诊断结果对照，各项检测指标为：敏感度96%，特异性99%，准确率98%，假阳性率1%，假阴性率3.6%，阳性结果预测值98.2%，阴性结果预测值98.1%。
【专利说明】
酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及癌症筛查试剂盒的制备方法，尤其是一种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒的制备方法。
【背景技术】
[0002]
癌症的早期发现，尤其在肿瘤自然生长史的临床前阶段发现，是降低肿瘤发病率和癌症死亡率的关键。尿液中酚核氨基酸及其衍生物属于癌症病理性代谢产物，比其他肿瘤标志物出现的更早，该类检测试剂成为目前市场开发的热点。近年来，国内外相关技术专利均在米伦试剂原理的基础上进行创新，在应用中有一定效果，但是，大量实践证明，还存在不足之处。首先，假阳性率太高，达13%，不适用于癌症的普查和筛查。原因是试剂的灵敏度高，检测限达到100mg/L(以酪氨酸的量计)，临床上的正常值范围是小于250mg/L;第二，反应速度慢(体检中心的尿液标本检测实验是集中进行，尿液标本的温度低，酪氨酸等的溶解度下降)，引起外界氧化物对反应体系的氧化，加深反应体系的颜色，使读数变大;第三，比色卡不可能做到标准和广泛适用，不同的尿液标本本身的颜色不同，即使相同浓度的检测底物其反应结果的颜色有差异，尤其处在临界值时，阴性或阳性难以区分。这些不足之处影响相关技术产品的推广应用。
本发明的目的是提出一种新的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，同时引入新组分，以提高试剂的稳定性、增溶和增敏。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就是针对现有技术的缺陷和不足，提供一种稳定性好、准确度高的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒的制备方法。
[0004]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，由对照试剂和测试试剂组成，试剂的成分包括硝酸亚汞(Hg2(NO3)2.2H20)，硝酸镍(Ni (NO3)2.6H2O)，硫酸汞(HgSO4)和乳化剂OP及其相应的溶剂硝酸(HNO3)和硫酸(H2SO4)，其制备方法，包括以下步骤:
1、对照试剂的制备:
A1S液制备:称取75-125g HgSO4溶于1500ml 3-7M的硫酸溶液中；
B1S液制备:称取250-320g Ni(NO3)2.6H2O溶于2500ml 5-10M的硝酸溶液；
&溶液制备:称取Ilg Hg2(N03)2.2H20溶于500ml 5-10M的硝酸溶液；
0!溶液制备:称取25-45g乳化剂OP溶于500ml 5-10M的硝酸溶液；
将以上四种液体按体积比A1溶液:B1溶液:C1溶液:D1溶液=3:5:1:1混合，即得至IJ对照试剂。
[0005]2、测试试剂的制备:
A2液制备:称取75-125g HgSO4溶于1500ml 3-7M的硫酸溶液；
B2液制备:称取250-320g Ni(N03)2.6H20溶于2500ml 5-10M的硝酸溶液； C2溶液制备:称取87-156g Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 5-10M的硝酸溶液；
D2溶液制备:称取25-45g乳化剂OP溶于500ml 5-10M的硝酸溶液；
将以上四种液体按体积比A2溶液:B2溶液:C2溶液:D2溶液=3:5:1:1混合，即得至IJ测试试剂。
[0006]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，用于恶性肿瘤筛查和辅助诊断时，各取晨尿3ml，分别滴入本试剂盒的对照试剂和测试试剂各0.5ml，摇匀、静置1-3分钟，观察颜色变化。如果两个颜色相同，即都出现白色/黄色沉淀或浅红色沉淀者为阴性;如果两个颜色都是红色且测试试剂反应的颜色更深，则为阳性。
[0007]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，试剂用于疗效监测时，可在治疗实施前后进行检测。如治疗后仍为阳性，则疗效不明显；如治疗前为阳性反应，治疗后为转阴性反应，则治疗有效。
[0008]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，试剂用于病情监测时，可用上述方法定期检测，在此过程中，如出现沉淀的颜色逐渐加深，或由阴性反应转为阳性反应，则提示肿瘤复发或转移。
[0009]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对已确诊的965例恶性肿瘤患者和非恶性肿瘤病人进行测试，其中恶性肿瘤337例，非恶性肿瘤628例，结果是:阳性反应者341例，阴性反应者624例。与病理诊断结果对照后，假阳性6例，假阴性12例，阳性325例，阴性622例。各项检测指标为:敏感度96%，特异性99%，准确率98%，假阳性率1%，假阴性率3.6%，阳性结果预测值98.2%，阴性结果预测值98.1%。
[0010]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，应用于疗效监测，对57例已确诊恶性肿瘤的65个化疗疗程进行疗效评价，采用的指标为完全缓解、部分缓解、稳定和进展。检测结果为19个化疗疗程为完全缓解和部分缓解，与同期临床评价相比(临床评价，完全缓解和部分缓解的化疗疗程为21个)，本试剂评价的符合率为90%。
[0011]本发明的酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对93例已治疗出院的恶性肿瘤患者进行一年半的病情跟踪观察，16例逐渐显示阳性反应，提示肿瘤的复发或转移。与同期的临床资料相比，确诊者为14例，准确率为87.5%。
【具体实施方式】
[0012]实施例1:一种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对照试剂和测试试剂分别配制5000ml:
对照试剂制备:
A1液制备:称取75g HgSO4溶于1500ml 7M的硫酸溶液；
Br液制备:称取250gNi(NO3)2.6H20溶于2500ml 5M的硝酸溶液；
Cl溶液制备:称取Ilg Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 5M的硝酸溶液；
0!溶液制备:称取25g乳化剂OP溶于500ml 5M的硝酸溶液；
将以上四种液体按体积比A1溶液:B1溶液:C1溶液:D1溶液=3:5:1:1混合，即得至IJ对照试剂测试试剂。
[0013]测试试剂制备:与对照试剂相比，只有C2溶液制备不同，其他41与六2、81与出、01与02相同，&溶液制备:称取87g Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 5M的硝酸溶液;将以上四种液体按体积比A2溶液:B2溶液:C2溶液:D2溶液=3:5:1:1混合，即得到测试试剂。
[0014]实施例2:—种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对照试剂和测试试剂分别配制5000ml:
对照试剂制备:
A1液制备:称取125g HgSO4溶于1500ml 3M的硫酸溶液；
Br液制备:称取320gNi(NO3)2.6H20溶于2500ml 1M的硝酸溶液；
Cl溶液制备:称取Ilg Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 1M的硝酸溶液；
0!溶液制备:称取45g乳化剂OP溶于500ml 1M的硝酸溶液；
将以上四种液体按体积比A1溶液:B1溶液:C1溶液:D1溶液=3:5:1:1混合，即得至IJ对照试剂测试试剂。
[0015]测试试剂制备:与对照试剂相比，只有C2溶液制备不同，其他41与六2、81与出、01与02相同，&溶液制备:称取156g Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 1M的硝酸溶液;将以上四种液体按体积比A2溶液:B2溶液:C2溶液:D2溶液=3:5:1:1混合，即得到测试试剂。
[0016]实施例3:—种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒，对照试剂和测试试剂分别配制5000ml:
对照试剂制备:
A1液制备:称取95g HgSO4溶于1500ml 5M的硫酸溶液；
Br液制备:称取300gNi(NO3)2.6H20溶于2500ml 8M的硝酸溶液；
Cl溶液制备:称取Ilg Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 8M的硝酸溶液；
0!溶液制备:称取30g乳化剂OP溶于500ml 8M的硝酸溶液；
将以上四种液体按体积比A1溶液:B1溶液:C1溶液:D1溶液=3:5:1:1混合，即得至IJ对照试剂测试试剂。
[0017]测试试剂制备:与对照试剂相比，只有C2溶液制备不同，其他41与六2、81与出、01与02相同，c2溶液制备:称取126g Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 8M的硝酸溶液;将以上四种液体按体积比A2溶液:B2溶液:C2溶液:D2溶液=3:5:1:1混合，即得到测试试剂。
【主权项】
1.一种酚核氨基酸及其衍生物尿检试剂盒的制备方法，其特征在于:它包括以下步骤: (1)、对照试剂的制备: A1S液制备:称取75-125g HgSO4溶于1500ml 3-7M的硫酸溶液中； Bi溶液制备:称取250-320g Ni(NO3)2.6H2O溶于2500ml 5-10M的硝酸溶液； Cl溶液制备:称取IIg Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 5-10M的硝酸溶液； 0!溶液制备:称取25-45g乳化剂OP溶于500ml 5-10M的硝酸溶液； 将以上四种液体按体积比A1溶液:B1溶液:C1溶液:D1溶液=3:5:1:1混合，即得到对照试剂； (2)、测试试剂的制备: A2液制备:称取75-125g HgSO4溶于1500ml 3-7M的硫酸溶液； B2液制备:称取250-320g Ni(NO3)2.6H2O溶于2500ml 5-10M的硝酸溶液； C2溶液制备:称取87-156g Hg2(NO3)2.2H20溶于500ml 5-10M的硝酸溶液； D2溶液制备:称取25-45g乳化剂OP溶于500ml 5-10M的硝酸溶液； 将以上四种液体按体积比A2溶液:B2溶液:C2溶液:D2溶液=3:5:1:1混合，即得到测试试剂。
【文档编号】G01N21/82GK105866113SQ201610236141
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月18日
【发明人】杨祖平
【申请人】杨祖平, 江西安健生物技术有限公司