用于增强植物干旱耐受性的核苷酸序列及其编码的多肽的制作方法

文档序号:178986阅读:393来源:国知局

专利名称::用于增强植物干旱耐受性的核苷酸序列及其编码的多肽的制作方法
技术领域
:本发明涉及分离的多核苷酸、由其编码的多肽以及那些序列使转基因植物具有增强的干旱耐受性的用途。
背景技术
:植物持续暴露于多种生物的(例如病原体感染和食草昆虫)和非生物的(例如高温或低温、干旱、水淹、缺氧条件和盐)胁迫。为了在这些挑战中存活,植物U出精密的机制来感知外部信号,并以适当的生理学和形态学改变来显示适应性应答(Bohnertet等人,1995)。植物暴露于热和/或缺水或干早条件下,通常使植物材料、种子、果实和其它可食用产物的产量较低。特别是由于气候变迁或社会经济对水源的制约,使所有农业区倾向于干旱。因此,令人非常感兴趣和重要的是能够鉴别赋予干旱耐受性的基因,从而能创造在水有限条件下具有改良的生存能力的转化植物(例如农作物植物)。为了满足不断增长的世界人口的供给,以及保证可再生原材料的供应,在农业和林业领域中,不断做出努力以产生具有增加生长潜能的植物。这通常通过植物育种来实现。然而,育种过程是费时且是劳动密集型的。此外,对每个相关植物物种必需执行适当的育种程序。遍及人类文明史,食物和饲料可再生流的可获取性和维持是高度优先的,并在农业起源即存在。农艺科学、农业、农作物科学、园艺学和林业科学领域的专家和研究人员至今仍不断努力去发现和生产具有加速生长潜能的植物,来满足不断增长的世界人口的供给和保证可再生原材料的供应。在这些科学领域研究的有力水平表明,在全^种地理环境和气候中,为人口提供足可支撑的食物、饲料和能量来源处于重要的主导水平。在使用分子遗传学方法来操纵植物以提供更好的产量方面已经取得了巨大的选艮。无论独特的地理和/或气候环境,通过在植物中导入和表达重组核酸分子,研究者目前可以不受影响地为社会提供更有效生长和产生更多产物的植物物种。这些新的方法具有额外的优点,即不受限于一种植物物种,而是能应用于多种不同的植物物种(l)。发明概述本发明因此涉及分离的多核苷酸、由其编码的多肽以及那些序列使转基因植物具有增加的干旱耐受性的用途。本发明也涉及在异常的水条件下增加植物生长潜能的方法、在这些方法中所使用的重组核酸分子和多Ji^良其用途,也涉及植物本身。除非另外定义,此处使用的所有技术上和科学上的术语与本发明所属领域内普通技术人员通常所了解的具有同样的意义。发明简述图1.SEQIDNO.1前导68M酸序列的同源比对。框中为保守区域。在比对的下面显示共有序列。图2.SEQIDNO.18前导69^J^酸序列的同源比对。框中为保守区域。在比对的下面显示共有序列。图3.SEQIDNO.49前导94M酸序列的同源比对.框中为保守区域。在比对的下面显示共有序列。图4.SEQIDNO.61前导95^J^酸序列的同源比对。框中为保守区域。在比对的下面显示共有序列。发明详述1.发明本申请的发明可以通过(但是并无需限于)以下示例性实施方案描述。本发明公开新的分离的核酸分子、千扰这些核酸分子的核酸分子、与这些核酸分子杂交的核酸分子以及由于DNA密码简并而编码同样蛋白质的分离的核酸分子。本申请的另外实施方案还包括由本发明中分离的核酸分子所编码的多肽。更具体地,本发明的核酸分子包含(a)编码JLi酸序列的核苷酸序列,所述M酸序列与前导序列68、69、94和95中任何一个具有至少为85%的同一性,分别对应于SEQIDNo.XX-XX,(b)与^L据(a)的任一个核苷酸序列互补的核普酸序列,(c)根据SEQIDNo.XXXXXXXXX的任一的核苷酸序列,(d)当以5,到3,方向读码时,与根据(c)的任一个核苷酸序列反向的核酸序列,(e)能干扰根据(a)的任一核苷酸序列的核苷酸序列,(f)在低于杂交核酸双链体解链温度从约40°C到约48°C的温度下,能与根据(a)-(e)的任一项中的核苷酸形成杂交核酸双链体的核苷酸序列,和(g)编码M^列的核苷酸序列,所述M酸序列被鉴定为前导68、69、94和95中任何一个,分别对应于SEQIDNo.XXX-XXXX。本发明另外的实施方案包括在SEQIDNO:1-93和173-176中公开的那些多肽和核酸分子序列。本发明还包含载体,其包含具有编码植物转录和/或翻译信号的核苷酸序列的第一核酸和具有根据本发明中分离的核酸分子的核苷酸序列的第二核酸。更具体而言,第一和笫二核酸可以有效连接。甚至更具体而言,第二核酸可能对于第一生物体是内源的,而载体中任何其它核酸对于笫二生物体是内源的。最具体而言,第一和第二生物体可以是不同种的。在本发明的另一实施方案中,宿主细胞可能包含根据本发明的分离的核酸分子。更具体而言,在本发明的宿主细胞中发现的本发明的分离的核酸分子可能对于第一生物体是内源的,其侧翼为对于第二生物体内源的核苷酸序列。而且,第一和第二生物体可以是不同种的。甚至更具体而言,本发明的宿主细胞可能包含根据本发明的载体,其本身包含根据本发明的核酸分子。在本发明的另一个实施方案中,本发明的分离的多肽可能又包含与前导68、69、94和95的任一个具有至少85%的同一性的#^酸序列,分别相应于SEQIDNo.XX-XX。本发明的其它实施方案包括将本发明的分离的核酸导入宿主细胞的方法。更具体而言,在使分离的核酸分子能够向宿主细胞内运输的条件下将本发明的分离的核酸分子与宿主细胞接触。甚至更具体而言,可以通过同样的方法将本发明先前实施方案中描述的栽体导入宿主细胞。作为本发明实施方案的检测方法也是有效的。具体为检测样品中根据本发明的核酸分子的方法。更具体而言,在允许分离的核酸分子的核苷酸序列与样品中核酸的核苷酸序列进行比较的条件下,使根据本发明的分离的核酸分子与样品相接触。随后考虑这种分析的结果以确定是否可检测本发明的分离的核酸分子以及因此而存在于样品中。本发明的又一实施方案包含植物、植物细胞、植物材料或植物种子,其包含本发明的分离的核酸分子和/或栽体。更具体而言,本发明的分离的核酸分子可能对于植物、植物细胞、植物材料或植物种子是外源的。本发明的又一实施方案包括从根据本发明的植物细胞或种子再生的植物。更具体而言,植物、或4发明的植物、植物细胞、植物材料或植物种子衍生的植物,与在同等条件下种植的野生型植物相比,优选具有增加的干早耐受性。此外,转基因植物可能包含本发明的第一分离的核酸分子,其编码涉及增加干旱耐受性的蛋白质,以及编码能在植物中驱动表达的启动子的第二分离的核酸分子,其中增加干早耐受性的组分和启动子是有效连接的。更为优选地,赋予增加干旱耐受性的基因可能在本发明的转基因植物中异常表达,并且当转基因植物和祖先植物在同等环境条件下种植时,转基因植物与缺乏此基因的祖先植物相比呈现增加的干旱耐受性。本发明增加干旱耐受性表型的另一实施方案可能是由于特定序列的失活,例如使用RNA干扰。优选实施方案由根据本发明的植物、植物细胞、植物材料或植物种子组成,其包含本发明的分离的核酸分子,其中植物、或从植物、植物细胞、植物材料或植物种子衍生的植物,与在同等条件下种植的野生型植物相比具有增加的千旱耐受性。本发明的另一实施方案包括在植物中增加干旱耐受性的方法。更具体而言,这些方法包含用根据本发明的分离的核酸分子转化植物。优选地,此方法是在转化的植物中增加干旱耐受性的方法,由此用编码本发明的多肽的核酸分子转化植物。本发明的多肽包括共有序列。共有序列在图1-4中显示。2.定义在本申请中使用如下术语干旱植物物种耐受干旱条件的能力不同。"干旱"可被定义为一组环境条件,在此条件下植物将开始遭受脱水作用,例如减少气孔导度和光合作用、减慢生长速率、丧失充盈(萎蔫)、或胚珠发育不完全。由于这些原因,经历干旱胁迫的植物通常呈现生物量和产量显著减少。脱水作用可能由降雨缺乏或灌溉有限所引起。可选地,水分亏缺也可能由损坏根和限制向茎干摄取水分的高温、低湿度、盐土、水冻温度或者水塞土壤所引起。由于植物物种耐受水分亏缺的能力不同,引起干早胁迫的具体环境条件并不是M的。然而,在水有限的*下,干旱耐受性的植物比非千旱耐受性的植物产生更高的生物量和产量,并且在严重缺水的条件下呈现增加的生存能力和/或延迟的干燥作用。用熟知的测量和分析方法能够对物理外观、恢复和产量上的差异进行定量和统计分析。水淹植物物种耐受水淹的能力不同。某些植物(例如稻)在水里种植,而植物例如玉米则不能耐受水淹。此处所指"水淹"是水饱和的状态,在此条件下土壤变得含氧量低或缺氧,因此限制根的呼吸。呼吸减少会破坏根,并能限制根对水的渗透性,导致叶的水势降低和萎蔫。由于植物物种耐受水淹的能力不同,引起水洽胁迫的具体环境条件并不是普遍的。然而,水淹耐受性植物其特征在于它们保持正常外观或迅速从水淹恢复的能力。这种水淹耐受性植物比非水淹耐受性植物产生更高的生物量和产量。用熟知的测量和分才斤方法能够对物理外观、恢复和产量上的差异进行定量和统计分析。功能性可比的蛋白质或功能性同源物此术语描述那些至少有一种共同的功能性特征的蛋白质。这种性质包括序列相似性、生物化学活性、转录方式相似性和表型活性。通常,功能性同源物共有某些序列相似性和至少一种生物化学功能。另外,功能性同源物通常共有至少一种生物化学和/或表型活性。功能性同源物将会使相同特树目似,但是无需至相同程度。通常,功能性同源物给出相同的特征,其中由于彼此相似性的定量测量至少为对方的20%,更通常在30到40%;甚至更通常在50%-60%;甚至更通常在70%到80%;甚至更通常在90%到100%之间。异源序列"异源序列"是那些天然上彼此没有有效连接或不邻近的序列。例如,来自玉米的启动子被认为是拟南芥04m6W印s/s)编码区域序列的异源序列。同样,i人为来自编码玉米生长因子基因的启动子是编码玉米生长因子受体序列的异源序列。调节元件序列,例如UTR或3,末端终止序列,天然上并不A^源于与编码序列同样的基因,它们被认为与所述编码序列是异源的。天然有效连接和相互邻近的元件不是彼此的异源序列。另一方面,如果其它填充序列被置于它们之间,则这些相同的元件保留有效连^^是成为异源序列。因此,表达M酸转运蛋白的玉米基因的启动子和编码序列并非相互异源,而以一种新方式有效连接的玉米基因的启动子和编码序列则是异源的。高温植物物种耐受高温的能力不同。很少的植物物种能在温度高于45。C时存活。然而,高温对于植物的作用可以从较低的温度开始,依赖于物种和其它环境4H申,例如湿度和土壤湿度决定。"高温"可定义为对特定植物物种有不利影响的温度,其证据为例如減少光合作用的症状。由于植物物种耐受高温的能力不同,不能概括引起高温胁迫的精确环境条件。然而,高温耐受性植物其特征在于其保持正常外观或从高温条件迅速恢复的能力。此种高温耐受性植物比非高温耐受性植物产生更高的生物量和产量。用熟知的测量和分析方法能够对物理外,见、恢复和产量上的差异进行定量和统计分析。低温植物物种耐受低温的能力不同。冷敏感的植物物种包括许多农艺学上重要的物种,它们能够被水冻温度之上的寒冷损伤。在水的水点以下的温度,多数植物物种将受到损坏。因此,"低温"可以定义为对特定植物物种有不利影响的温度,其证据为例如减少的光合作用以M损伤(用电解质渗漏来测量)的症状。由于植物物种耐受低温的能力不同,不能概括引起低温胁迫的精确环境条件。然而,低温耐受性植物其特征在于其保持正常外观或从低温a迅速恢复的能力。此种低温耐受性植物比非低温耐受性的植物产生更高的生物量和产量。用熟知的测量和分析方法能够对物理外观、恢复和产量上的差异进行定量和统计分析。植物种子在低温M下萌发的能力有很大的不同.多数植物物种的种子在低于10。C时不会萌发。一旦种子级人水分,它们就会对疾病、水分和化学损害变得非常敏感。在萌发过程中耐受低温胁迫的种子能在过低而不适合萌发的温度下存活相对长的周期。由于植物物种在萌发过程中耐受低温的能力不同,不能概括引起萌发过程中低温胁迫的精确环境条件。然而,萌发过程中低温耐受性植物其特征在于其保持正常外观或从低温M迅速恢复的能力。此种低温耐受性植物产生、萌发、建立、生长更快,最终比非低温耐受性植物产生更高的生物量和产量。用熟知的测量和分析方法能够对萌发速率、外观、恢复和产量上的差异进行定量和统计分析。异常表达术语"异常表达"指与野生型相比编码区转录为互补RNA序列的增加或减少。此术语也包括与野生型相比在不同时期基因或编码区的表达和/或翻译、或此类转录和/或翻译的抑制,和/或来自植物基因组内部非天然位置,包括来自不同植物物种或非植物生物体的基因或编码区的表达和/或翻译、或此类转录和/或翻译的抑制。序列同一性百分比此处所用术语"序列同一性百分比"指任何给定查询序列和目的序列之间同一性的程度。查询核酸或M酸序列与一个或多个目的核酸或JL^酸序列用计算机程序ClustalW(1.83版本,缺省^lt)进行比对,此程序允许核酸或蛋白质序列通过它们的全长进行比对(总体比对)。ClustalW计算在查询序列和一个或多个目的序列之间最相配的序列,并且比对以确定其同一性、相似性和差别。在查询序列、目的序列或两者中可以插入一个或多个残基的空位,以使序列比对达到最大化。对于核酸序列的快速成对比对,使用以下缺省桐故字大小2;窗口大小4;记分法百分数;顶角(topdiagonals)数4;和空位罚分5。对于核酸序列的多重比对,使用以下^lt:空位开放罚分10.0;空位延伸罚分5.0;和加权转换是。为了使蛋白质序列快速配对比对,使用以下参数字码大小1;窗口大小5;记分法百分数;顶端对角(diagonals)数5;空位罚分(penalty):3。对于蛋白质序列的多重比对,使用以下参数加权矩阵blosum;空位开放罚分10.0;空位延伸罚分0.05;亲水空位开;亲水残基Gly、Pro、Ser、Asn、Asp、Gln、Glu、Arg和Lys;残基特异空位罚分开。输出的;L^映序列间相互关系的序列比对。CIustalW能在例如BaylorCollegeofMedicineSearchLaunchersite(searchlauncher.bcm.tmc.edu/multi-align/multi-align.html)和EuropeanBioinformaticsInstitutesiteontheWorldWideWeb(ebi.ac.uk/clustalw)运行。在功能性同源物检索的情况,为了确保目的序列与查询序列具有同样功能,比对必须根据查询序列长度的至少80%进行,以使目的序列包含查询序列的主要部分。为了确定查询序列和目的序列之间的同一性百分数,ClustalW通it^目似的残基Jt划分最佳比对中的同一性数目(空位位置除外),并将结果乘以100。输出的是目的序列对于查询序列的同一性百分数。值得注意的是同一性百分数的值可以近似到最接近的十分位。例如,78.11、78.12、78.13和78.14近似为78.1,而78.15、78.16、78.17、78.18和78.19近似为78.2。调节区术语"调节区"指当与一个序列有效连接时,影响所述序列的转录起始或翻^^始或转录终止以及所述过程速率、和/或转录或翻译产物稳定性和/或迁移率的核苷酸序列。在此处使用的术语"有效连接"指能够起到所述影响的调节区和所迷序列的定位。调节区包括(不限于)启动子序列、增强子序列、应答元件、蛋白质识别位点、可诱导元件、蛋白质结合序列、5,和3,非翻译区(UTR)、转录起始位点、终止序列、多聚腺苷酸化序列和内含子。调节区被分为两类,启动子和其它调节区。严格性此处所用"严格性"是探针长度、探针组分(G+C含量)、和盐浓度、有机溶剂浓度和杂交温度或洗脱条件的功能。通常按照与Tm的温度差异通过参数Tm比较严格性,Tm为在杂交中50%的互补分子进行杂交的温度。高严格性条件是那些Tm-5°C到Tm-10。C的条件。中等或适度严格条件是那些Tm-20。C到Tm-29°C的条件。低严格性条件是那些Tm-40°C到Tm-48°C的制中。杂交条件与Tm(用。C表示)之间的关系用数学方程式ijt^示Tm二81.5-16.6(log10Na+)+0.41(%G+C)■(600/N)(1)。其中N是探针长度。此方程式对于探针有长度14到70个核苷酸与乾序列相同时能够很好地工作。下面的关于DNA-DNA杂交分子的Tm方程式适用于探针为50个到大于500个核苷酸的范围,并且包括有机溶剂(甲酰胺)的糾。Tm=81.5+16.61og《Na+/(l+0.Na1)〉+0.41(o/oG+C)-500/L0.63(%甲酰胺)(2)其中L是杂交分子中探针的长度。(P.Tijessen,"核酸探针杂交",生物化学和分子生物学实验技术,P.C.vandderVHet,编辑,c.1993byElsevier,Amsterdam.),方程式(2)中的Tm受到杂交分子性质影响;对于DNA-RNA杂交分子,Tm比计算值高10-15。C,对于RNA-RNA杂交分子,Tm高20-25°C。由于当使用长探针时,同源性每下降1%,Tm值减少1°C(Bonner等人,JMol.Biol.81:123(1973)),所以可以调节严格性条件以利于检测相同基因或相关家族成员。方程式(2)由假定的平衡衍生,并且因此根据本发明的杂交最优选在探针过量且有足够时间达到平衡的条件下进行。达到平衡所需要的时间可以通过在杂交緩冲液中包含杂交加速剂,例如硫酸葡聚糖或其它高体积的多聚体来缩短。可以在杂M应过程中,或杂交之后通过改变洗脱液所用的盐和温度M控制严格性。当用于计算洗脱液的严格性时,上面显示的公式同样有效。优选洗脱液严格性在上述范围之内;高严格性是低于Tm值5-8。C,中等或适度严格性是低于Tm值26-29°C,而低严格性是低于Tm值45-48。C。总库用于本发明上下文中的"总库"包含来自500个不同事件的等量种子,代表100个不同的外源核苷酸序列。事件是携带不同外源序列的唯一插入且异常表达该序列的植物。单个核普酸的转化能够导致多个事件,因为每次转化中序列可插入基因组的不同部分。TV本申请中使用的术语"TQ"指用转化培养基接种的整个植物、外植体或愈伤组织。Tl:L指单一事件,其在整个植物转化时为T。植物的子代,或在外植体或愈伤组织转化时为再生幼苗。T2:T2指L植物的子代。T2子代是自体受精或与L植物杂交授粉的结果。T3:T3指转化实验直接产生的植物的第二代子代。T3子代是自g精或与T2植物杂交授粉的结果。3.本发明的多核苷酸和多肽的重要特征本发明的多核苷酸和多肽是令人感兴趣的,因为当它们异常表达时(即当在非天然位点表达或者以增加或减少的量表达时),产生具有增加的干旱耐受性的植物。术语"干旱耐受性"包括对影响植物可利用水量的环境条件的多种应答。例如,在高热条件下,水分从土壤和植物本身迅速蒸发,导致维持或起始生理过程的可利用水分减少。同样地,在寒冷或干旱*下或土壤含水量低的情况下,水分可利用率也有限。有趣的是,水淹^Ht也影响植物可利用水分的量,因为它破坏才艮,并因此限制植物向茎干运输水分的能力。此处使用的增加的干早耐受性包括所有这些情况以及其它影响植物有效使用和/或维持水分能力的环境情况(例如渗透性胁迫、盐浓度等等)。短期或长期的干旱对于多数非灌溉田地是产量的主要障碍之一。缺少廉价的水也是限制农作物能生长在哪里的主要环境因素之一。在整个美国中西部,干旱是导致年复一年产量降低的主要因素。目前公认在植物生命周期始终存在多次干旱,其中对干旱的耐受性是有利的。干早耐受性可以用许多方法测量,包括幼苗或整个植物水平增加的叶活力、从严重干旱的恢复、增加的产量、减少的胚珠发育不全、增加的光合能力、相对水含量和增加的水势。通过下面详述以及由多种实验结果证明,本发明的多核苷酸和多肽有利于增加千旱耐受性。不同供水环境条件下,可以4吏用这些性状用于开发或最大化农业、园艺、生物转化的生物量和/或林业目的的植物产品。调整本发明的核苷酸和多肽的表达导致转基因植物抵抗干燥、需要更少的水分、和在高热和/或千旱条件下得到更高的产量,或者对于过多的水分具有增加的耐受水平,并在潮湿条件下得到更高的产量。转基因植物的两个分类使农民减少成本,并在其各自的环境条件得到更高的产量。也可以通过在干旱诱导型启动子的控制下表达这些基因/多肽来调整根据本发明的干旱耐受性。4.本发明的基因本发明的多核苷酸和通过翻译这些多核苷酸而表达的蛋白质在序列表中列出,特别是SEQIDNo.l-^。序列表包括功能上可比较的蛋白质。其中包含共有序列之一定义的序列的多肽可用于本发明的目的,即使转基因植物具有增加的干旱耐受性。5.该基因在制造转基因植物中的用途为了使用本发明的序列或它们的组合或部分和/或突变和/或融合和/或它们的变体,制备重组DNA构建体,所述构建体包含插入载体中的本发明的多核苷酸序列,且适合于转化植物细胞。用标准重组DNA技术(见16)制备构建体,并且通过例如农杆菌介导的转化或其它转化手段例如下面所公开的方法,将其导入目的植物物种中。载体骨架可以是任意本领域中常用的那些栽体,例如质粒、病毒、人工染色体、BAC、YAC、PAC和载体例如细菌-酵母穿梭载体、人噬菌体载体、T-DNA融合栽体和质粒载体(见17-24)。通常,构建体由含有本发明的核酸分子的栽体組成,其携带任何希望的转录和/或翻译调节序列,例如启动子、UTR和3,末端终止序列。载体还可以包括例如复制起始区、支架附着区(SAR)、标记、同源序列和内含子。栽体也可以包含标记基因,赋予植物细胞可选择的表型。标记可能优选编码杀生物剂抗性性状,特别是抗生素抗性,例如抗卡那霉素、博来霉素或潮霉素,或除草剂抗性,例如抗草甘磷、氯磺隆(chlorosulfuron)或phosphinotricin。应该了解重组多核苷酸中可能存在一个以上的调节区,例如内含子、增强子、上游激活区、转录终止子和可i秀导元件。因此一个以上的调节区能够与所述序列有效连接,为了使一个序列与启动子序列"有效连接",所述序列的翻译读码框的翻译起始位点通常位于启动子下游1到约50个核苷酸之间。然而,启动子可以置于翻译起始位点上游多达5000个核苷酸或转录起始位点上游约2000个核苷酸的位置。启动子通常包含至少一个核心Oi^)启动子。启动子也可以包括至少一个控制元件,例如增强子序列、上游元件或上游激活区(UAR)。例如,一个合适的增强子是章鱼碱合酶(ocs)基因上游区的顺式调节元件(-212到-154)(Fromm等人,ThePlantCell1:977-984(1989))。基础启动子是装配转录起始必需的转录复合物所需的最小序列。M启动子通常包括"TATA盒"元件,可能位于转录起始位点上游约15到约35核苷酸之间。基础启动子还可能包括"CCAAT盒"元件(通常是序列CCAAT)和/或GGGCG序列,其位于转录起始位点上游约40到约200核苷酸之间,通常是约60到约120核苷酸之间。所包括的启动子的选择依赖于多个因素,包括(但不限于)效率、可选择性、可诱导性、希望的表达水平以及细胞或组织偏好的表达。通过适当选择和定位启动子和所述序列的其它调节区来调节序列的表达,是本领域技术人员的常识。某些合适的启动子仅(或主要)在某些细胞类型中起始转录。例如可使用主要在生殖组织中(例如果实、胚珠、花粉、雌蕊、雌配子体、卵细胞、中央细胞、珠心、胚柄、助细胞、花、胚胎组织、胚囊、胚、合子、胚乳、珠#皮、或种皮)有活性的启动子。因此,此处所用的细胞类型或组织偏好的启动子是优先在靶组织中驱动表达的启动子,但是也可能导致在其它细胞类型或组织中也有一些表达。在植物基因组DNA中鉴别和表征启动子区域的方法包括例如那些如下文献中描述的方法Jordano,等人,PlantCeH,1:855-866(1989);Bustos,等人,PlantCell,1:839-854(1989);Green,等人,EMBOJ.7,4035-4044(1988);Meier,等人,PlantCell,3,309-316(1991);和Zhang,等人,PlantPhysiology110:1069-1079(1996)。下面描述各类启动子的实例。下面指出的一些启动子在美国专利申请系列No.60/505,689;60/518,075;60/544,771;60/558,869;60/583,691;60/619,181;60/637,140;10/950,321;10/957,569;11/058,689;11/172,703;11/208,308;和PCT7US05/23639中有更详细的描述。应该理解启动子基于其在一种植物物种中的活性而适合一种分类的标准,而基于其在另一种植物物种中的活性而适合不同分类标准。其它调节区在此处所描述的核酸构建体中包括5,非翻译区(UTR)。5,UTR被转录,但是不被翻译,并且位于转录起始位点和翻*始密码子之间,可能包括+l核苷酸。3,UTR位于翻译终止密码子和转录终点之间。UTR具有特定功能,例如增加mRNA稳定性或减弱翻译。3,UTR的实例包括(但不限于)多聚腺苷酸化信号和转录终止序列,例如胭脂氨酸合酶终止序列。可以使用多种启动子来驱动本发明的基因表达。这类启动子的核苷酸序列在SEQIDNo:94-172中列出。它们中的某些可以是广泛表达的启动子,其它的可能是更有组织偏好的。当启动子在许多(并无需在所有的)植物組织或植物细胞中促进转录时,可#皮称为是"广^达"的。例如广泛表达的启动子能在一个或多个茎千、茎干顶端(尖)和叶中促进有效连接序列的转录,但是在例如根或茎中作用较弱或完全没有作用.另一个实例,广^达的启动子能在一个或多个茎、茎干、茎干顶端(尖)和叶中促进有效连接序列的转录,但是在例如花和发育的种子等生殖组织中促进转录的作用较弱或完全没有作用。此处提供的核酸构建体中包括的广泛表达启动子的非限制性实例包括p326(SEQIDNO:)、YP0144(SEQIDNO:)、YP0190(SEQIDNO:)、p13879(SEQIDNO:)、YP0050(SEQIDNO:)、p32449(SEQIDNO:)、21876(SEQIDNO:)、YP0158(SEQIDNO:)、YP0214(SEQIDNO:)、YP0380(SEQIDNO:)、PT0848(SEQIDNO:)、PT1026(SEQIDNO.XX)和PT0633(SEQIDNO:)。另外的实例包括花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、甘M合酶(MAS)启动子、从根瘤农杆菌T-DNA衍生的l,或2,启动子、玄参花叶病毒34S启动子、肌动蛋白启动子例如稻肌动蛋白启动子、和泛素启动子例如玉米泛素-l启动子。在某些情况下,CaMV35S启动子是排除在广泛表达启动子类别之外的。根活性启动子在根组织,例如根内皮层、根表皮或根脉管组织中驱动转录。在某些实施方案中,#>活性启动子^1才艮优先的启动子,即仗在或主要在根组织中驱动转录。根优先的启动子包括YP0128(SEQIDNO:XX)、YP0275(SEQIDNO:XX)、PT0625(SEQIDNO:XX)、PT0660(SEQIDNO:XX)、PT0683(SEQIDNO:XX)和PT0758(SEQIDNO:XX)。其它根优先的启动子包括PT0613(SEQIDNO:JXX)、PT0672(SEQIDNO:XX)、PT0688(SEQIDNO:XX)、和PT0837(SEQIDNO:XX),主要在根组织中驱动转录,在胚珠和/或种子中转录程度较小。其它根优先的启动子的实例包括CaMV35S启动子的根特异亚结构域(Lam等人,Proc.Natl.Acad.ScLUSA86:78卯-7894(1989))、根细胞特异启动子(Conkling等人,PlantPhysiol.93:1203-1211(1990))和烟草RD2基因启动子。在某些实施方案中,在成熟胚乳中驱动转录的启动子是有用的。从成熟胚乳启动子转录通常在受精后开始,并且主要出现在种子发育过程中的胚乳组织,在细胞分裂期通常达到最高。最适合的启动子是主要在成熟胚乳中有活性的启动子,尽管有时可以使用在其它组织中也有活性的启动子。包含于此处提供的核酸构建体的成熟胚乳启动子的非限制性实例包括油菜籽蛋白启动子、Arcelin-5启动子、菜豆蛋白基因启动子(Bustos等人,PlantCelll(9):839-853(1989))、大豆胰蛋白酶抑制剂启动子(Riggs等人,PlantCell1(6):609-621(1989))、ACP启动子(Baerson等人,PlantMolBiol,22(2):255-267(1993))、硬酯酰-ACP去饱和酶基因(Slocombe等人,PlantPhysiol104(4):167-176(1994))、大豆j3-conglycinin启动子的a'亚基(Chen等人,ProcNatlAcadSciUSA83:8560-8564(1986))、油质蛋白启动子(Hong等人,PlantMolBiol34(3):549-555(1997))、和玉米醇溶蛋白启动子例如15kD、16kD、19kD、22kD和27kD玉米醇溶蛋白启动子。合适的启动子也有来自稻谷蛋白-1基因的Osgt-l启动子(Zheng等人,MolCellBiol13:5829-5842(1993))、|S淀粉酶启动子和大麦醇溶蛋白基因启动子。其它成熟胚乳启动子包括YP0092(SEQIDNO:XX)、PT0676(SEQIDNO:XX)和PT0708(SEQIDNO:XX)。在子房组织例如胚珠壁和中果皮中驱动转录的启动子也是有用的,例如多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonidase)启动子、香蕉TRX启动子和甜瓜肌动蛋白启动子。其它优选在胚珠中驱动基因表达的此类启动子有YP0007(SEQIDNO:XX)、YP0111(SEQIDNO:XX)、YP0092(SEQIDNO:XX)、YP0103(SEQIDNO:XX)、YP0028(SEQIDNO:XX)、YP0121(SEQIDNO:XX)、YP0008(SEQIDNO:XX)、YP0039(SEQIDNO:XX)、YP0115(SEQIDNO:XX)、YP0119(SEQIDNO:XX)、YP0120(SEQIDNO:XX)和YP0374(SEQIDNO:XX)。在本发明的某些其它实施方案中,胚嚢/早期胚乳启动子用于在极核和/或中央细胞、或极核前体中驱动目的序列的转录,但是在卵细胞或卵细胞前体中则不能。最适合的启动子是仅在或主要在极核或其前体和/或中央细胞中驱动表达的启动子。在胚嚢/早期胚乳优先的启动子中也发现从极核延伸到胚乳发育早期的转录形式,尽管在细胞分裂期过程中及之后的胚乳发育晚期,转录通常显著降低。通常胚嚢/早期胚乳启动子不在合子或发育胚胎中表达。合适的启动子包括从如下基因衍生的那些启动子拟南芥胎萌-l(见GenBankNo.U93215);拟南芥atmycl(见Urao(1996)PlantMolBiol,32:571-57;Conceicao(1994)Plant,5:493-505);拟南芥FIE(GenBankNo.AF129516);拟南芥MEA;拟南芥FIS2(GenBankNo.AF096096);和FIE1.1(美国专利6,卯6,244)。其它合适的启动子包括从如下基因衍生的那些启动子玉米MAC1(见Sheridan(1996)Genetics,142:1009-1020);玉米Cat3(见GenBankNo.L05934;Abler(1993)PlantMolBiol,22:10131-1038)。其它启动子包括如下拟南芥启动子YP0039(SEQIDNO:XX)、YP0101(SEQIDNO:XX)、YP0102(SEQIDNO:XX)、YP0110(SEQIDNO:XX)、YP0117(SEQIDNO:XX)、YP0119(SEQIDNO:XX)、YP0137(SEQIDNO:XX)、DME、YP0285(SEQIDNO:XX)和YP0212(SEQIDNO:卯),其它可能有用的启动子包括如下稻启动子p530cl0、pOsFIE2-2、pOsMEA、pOsYpl02和pOsYp285。优先在受精以后的合子细胞中驱动转录的启动子能提供胚胎优先的表达,并可能有益于本发明。最适合的是优先在心期之前的早期胚胎中驱动转录的启动子,但是在晚期和成熟胚胎中表达也是合适的。胚胎优选启动子包括大麦脂转移蛋白(Ltpl)启动子(PlantCellRep(2001)20:647-654)、YP0097(SEQIDNO:XX)、YP0107(SEQIDNO:XX)、YP0088(SEQIDNO:XX)5YP0143(SEQIDNO:XX)、YP0156(SEQIDNO:XX)、PT0650(SEQIDNO:XX)、PT0695(SEQIDNO:XX)、PT0723(SEQIDNO:XX)、PT0838(SEQIDNO:XX)、PT0879(SEQIDNO:XX)和PT0740(SEQIDNO:XX)。在光合作用组织中,驱动绿色组织例如叶和茎中转录的启动子活性是本发明特别感兴趣的。最适合的是仅在或主要在此类组织中驱动表达的启动子。这类启动子的实例包括核酮糖-l,5-二磷酸羧化酶(RbcS)启动子,例如来自东方落叶爭>(丄^£\:toi7'"Vifl)的RbcS启动子、木》cab6启动子(Yamamoto等人,PlantCellPhysiol.35:773-778(1994))、来自小麦的Cab-l基因启动子(Fejes等人,PlantMoLBiol.15:921-932(19卯))、来自菠菜的CAB-1启动子(Lubberstedt等人,PlantPhysiol.104:997-1006(1994))、来自稻的cablR启动子(Luan等人,PlantCell4:971-981(1992))、来自玉米的丙酮酸正砩酸二激酶(PPDK)启动子(Matsuoka等人,ProcNatlAcad.SciUSA90:9586-9590(1993))、烟草Lhcbl*2启动子(Cerdan等人,PlantMoLBiol.33:245-255(1997))、拟南芥SUC2蔗糖-H十共运输体启动子(Truernit等人,Planta196:564-570(1995))和来自菠菜的类嚢体膜启动子(psaD、psaF、psaE、PC、FNR、atpC、atpD、cab、rbcS)。其它在茎、叶和绿色组织中驱动转录的启动子有PT0535(SEQIDNO:XX)、PT0668(SEQIDNO:XX)、PT0886(SEQIDNO:XX)、PR0924(SEQIDNO:XX)、YP0144(SEQIDNO:XX)、YP0380(SEQIDNO:XX)和PT0585(SEQIDNO:XX),在本发明的其它一些实施方案中,可能希望的是可诱导的启动子。可诱导的启动子应答外界刺激,例如化学剂或环境刺激而驱动转录。例如,可"^秀导的启动子能应答激素例如赤霉素或乙烯、或应答光或干早而转录。干早诱导启动子的实例有YP0380(SEQIDNO:XX)、PT0848(SEQIDNO:XX)、YP0381(SEQIDNO:XX)、YP0337(SEQIDNO:XX)、YP0337(SEQIDNO:XX)、PT0633(SEQIDNO:XX)、YP0374(SEQIDNO:XX)、PT0710(SEQIDNO:XX)、YP0356(SEQIDNO:XX)、YP0385(SEQIDNO:XX)、YP0396(SEQIDNO:XX)、YP0384(SEQIDNO:XX)、YP0384(SEQIDNO:XX)、PT0688(SEQIDNO:XX)、YP0286(SEQIDNO:XX)、YP0377(SEQIDNO:XX)、PD1367(SEQIDNO:XX)、RD29a启动子(Kasuga等人,PlantCellPhysiol.45:346(2004)和Yamaguchi-Shinozaki和Shinozaki,MolGenGenet.236:331(1993))、和其它包含DRE(脱水应答元件)的启动子,例如DREBl(Liu等人,Cell10:1391(1998))。氮诱导的启动子实例有PT0863(SEQIDNO:XX)、PT0829(SEQIDNO:XX)5PT0665(SEQIDNO:XX)和PT0886(SEQIDNO:XX)。阴i秀导启动子的一个实例是PR0924。其它启动子其它类启动子包括(但不限于)叶优先、茎/茎千优先、愈伤组织优先、保护细胞优先例如PT0678(SEQIDNO:XX)s、和衰老优先的启动子。如前面参考的专利申请所述,有用的特定启动子有YP0086(SEQIDNO:XX)、YP0188(SEQIDNO:88)、YP0263(SEQIDNO:XX)、PT0758(SEQIDNO:XX)、PT0743(SEQIDNO:51)、PT0829(SEQIDNO:XX)、YP0119(SEQIDNO:XX)和YP0096(SEQIDNO:XX)。可选择地,可以用双组分系统来实现异常表达,第一组分由包含与启动子有效连接的转录激活因子的转基因植物组成,第二组分由包含与转录激活因子靶结合序列/区有效连接的本发明核酸分子的转基因植物組成。两种转基因植物杂交,本发明的核酸分子在子代植物中表达.在本发明另一个可选实施方案中,通过将双组分系统的序列转化到一个转基因植物林中来实现异常表达。另一备选存在于在目的植物物种中抑制干旱耐受性多肽的表达。术语"表达"指通过多核苷酸转录将编码多肽的遗传信息转换为RNA(即通过RNA聚合酶的作用),及通过mRNA的翻译转换为蛋白质。"上调"或"激活"指相对于基底或天然状态,促^达产物产生的调节,而"下调"或"抑制"指相对于基底或天然状态,降低产物产生的调节。许多基于核酸的方法,包括反义RNA、核酶定向RNA剪切和RNA干扰(RNAi)被用于在植物中抑制蛋白质表达。反义技术是一个熟知的方法。在此方法中,克隆一段来自内源基因的核酸片段,并将其有效地连接在启动子上,以使RNA的反义链被转录。如前所述,随后将重组载体转化进植物中,并产生RNA的反义链。核酸片段无需是要抑制的内源基因的全部序列,但是通常与要抑制的内源基因至少一部分充分一致。通常可用较高的同源性来补偿使用较短的序列。通常使用至少30个核苷酸的序列(例如,至少40、50、80、100、200、500个核普酸或更多)。因此,例如此处提供的分离的核酸可以是前述编码干旱耐受性多肽的核酸之一的反义核酸。减少编码干旱耐受性多肽的基因的转录或翻译产物水平的核酸被转录为与干旱耐受性多肽有义编码序列相似或相同的反义核酸。可选地,分离核酸的转录产物与千旱耐受性多肽的有义编码序列相似或相同,但是其为未多聚腺苷酸化的RNA,缺少5,帽结构,或者包含未剪接的内含子。在另一种方法中,核酸可以被转录为核酶或催化性RNA,从而影响mRNA的表达。(见美国专利No.6,423,885)。核酶可以被设计与事实上任何靶RNA配对,并在特异位点剪切磷酸二酯链,从而使乾RNA功能上失活。异源核酸能编码剪切特定mRNA转录物的核酶,因此阻碍多肽的表达。锤头状核酶用于破坏特定mRNA,尽管可以使用多种在位点特异的识别序列剪切mRNA的核酶。锤头状核酶剪切mRNA的位点由与把mRNA形成互补>)5^对的两侧区域所决定,唯一要求是把RNA包含5,-UG-3,核苷酸序列。锤头状核酶的构建体和产物是本领域内乂^的。见例如美国专利No.5,254,678和WO02/46449,及其中参考的文献。可以将锤头状核酶的序列嵌入稳定的RNA,例如转移RNA(tRNA)以增加体内剪切效率。Perriman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92(13):6175誦6179(1995);deFeyter和Gaudron,MethodsinMolecularBiology,74巻,43章,"ExpressingRibozymeshiPlants",Turner,P.C编辑,HumanaPressInc.,Totowa,NJ。RNA核糖核酸内切酶是有用的,例如在四膜虫嗜热菌中天然存在的核糖核酸内切酶,以及被Cech和他的同事广泛描述的核糖核酸内切酶。见例如美国专利No.4,987,071。可以使用基于RNA干扰(RNAi)的方法。RNA干扰是调节基因表达和病毒复制的细胞机制。此方法被认为由双链小干扰RNA分子所介导。细胞通过破坏与双链RNA具有相同序列的内源mRNA,应答此类双链RNA。设计和制备干扰RNA的方法是本领域技术人员所/>知的;见例如WO99/32619和WO01/75164。例如可以制备包括转录为干扰RNA序列的构建体。这样的RNA能够自身退火,例如具有茎环结构的双链RNA。双链RNA茎部分的一条链包含与目的多肽的有义编码序列相似或相同的序列,长度为约10个到约2500个核普酸。与有义编码序列相似或相同的序列长度可以为10到500个核苷酸、15到300个核苷酸、20到100个核香酸或25到100个核香酸。双链RNA茎部分的另一条链包含生物量调整的目的多肽的反义序列,并且其长度比有义序列的相应长度更短、相同或更长。双链RNA的环部分长度可以为10到5000个核普酸,例如15到1000个核苷酸、20到500个核苷酸,或25到200个核苷酸。RNA的环部分可以包括内含子。见例如WO99/53050。在某些抑制植物基因表达的基于核酸的方法中,合适的核酸可以是核酸类似物。核酸类似物可以在^部分、糖部分或磷酸骨架被修饰,以改良例如核酸的稳定性、杂交作用或可溶性。絲部分的修饰包括脱氧尿苷代替脱氧胸苷,及5-甲基-2,-脱氧胞苷和5-溴-2,-脱氧胞苷代替脱氣胞普。糖部分的修饰包括核糖2'羟基的修饰以形成2'-0-曱基或2'-0-烯丙基糖。脱氧核糖磷酸链被修饰产生吗啉代核酸,其中每个磁J^部分与一个六元吗啉环相连接,或者产生肽核酸,其中脱氧磷酸骨架被假肽骨架所替代并保留4个4^Jl。见例如Summerton和Weller,1997,AntisenseNucleicAcidDrugDev.,7:187-195;Hyrup等人1996,Bioorgan.Med.Chem.,4:5-23,另外,脱氧磷酸骨架能被例如硫代磷酸酯或二疏代磷酸酯骨架、亚磷酰胺(phosphoroamidite)或烷基辯酸三酯骨架所替代。转化可以通过多种技术将本发明的核酸分子导入到合适的宿主植物基因组或细胞中。这些技术能转化广泛多样较高等植物物种,是众所周知的并且描述于技术和科学文献中(见例如28-29)。本领域公知的许多技术可有效的向植物宿主细胞中导入DNA。这些技术包括通过以下方法,例如注射(30)、显微注射(31)、DNA电穿孔(32)、PEG(33)、使用生物射弹(34)、细胞或原生质体融合(35)、以及使用根瘤农杆菌(36-37)或4^艮农杆菌(38)或其它细菌宿主(39)经由T-DNA转化植物细胞。另外,许多本领域技术人员熟知的非稳定转化方法也是本发明所希望的。此类方法包括(但不限于)瞬时表达(40)和病毒转染(41)。从转化的植物获得种子,并用于检测稳定性和遗传特性。通常,种植两代或更多代以确保表型特征稳定维持和传递。本领域的普通技术人员能认识到在表达盒被稳定整合到转基因植物中并且被确认有效以后,可以通过性杂交将其导入其它植物。可以使用许多标准育种技术的任一个,这依赖于要杂交的物种。本发明的核酸分子可以用于赋予增加的干旱耐受性的性状,本发明的核酸分子编码来自任何生物体的适当蛋白质,但是优选在植物、真菌、细菌或动物中发现的蛋白质。根据本发明的方法可以应用于任何植物,优选较高等的植物,属于被子植物04"giVwp^ime)和棵子植物((^w/i仍p^7iwe)类。特别合适的是双子叶(ZWo0^fife/fae)和单子叶植物(Mcmoctf0^"&wae)亚类的植物。同样合适的的双子叶植物属于M"giM'oto/es、MW/es、丄"nra/es、胡椒目CP!》mi/es)、/417'加cAi'fl/es、iV戸一flefl/es、及a/i"wcw/a/es、iVi/ievmito、瓶子草科(5Vwrace"z'aceae)、昆蓝树目(Tlroc/wflfewfifrfl/es)、^Hia附fl附e/fV/a/es、五Mawi/"/es、Z^iYwe打Vi/es、Afyn'cfl/es、山毛榉目CFflga/es)、木麻黄目(C"as""i7Vi"/es)、石竹目、5flto/es、_Po(vg0"fl/es、蓝雪目(尸/M附6agiVifl/es)、潔/e"fa/es、山茶目(T7refl/es)、Ma/va/es、t/rt/ca/es、玉蔬目(JLec声A油/es)、Wototes、杨柳目05"//01/&)、白花菜目(C《p/mm/es)、杜鹃花目(五Wcfl/es)、ews^es、、报春花目(iV/附w/fl/es;)、及asa/es、i^6"/es、i^rfosfe附a/es、jRTaZoiYigflt/es、Afyitafcs、山莱萸目(Cofa/es)、山龙目艮目(/Vtftefl/es)、Saif似/es、大花草目(及q/y7es/fl/es)、卫矛目((7e/flWmfes)、大戟目(五wp/wr6/"/es)、鼠李目(及/tfl挑wflfes)、无患子目(5"a/wVirffl/es)、胡杉匕目(Jwg,flMda/es)、toww.a,es、Po(vga,fl,es、伞形目(C/附6e歸es)、龙胆目((ewriaiifl/es)、/We附o"ifl/es、Z^附!'a/es、车前草目(iVflwtog/wfl/es)、玄参目(5^,Aw/flr/fl/es)、Gi附/;fl"M/"/es、萏草目(及"W"/es)、川绿断目(/)&s"cfl/es)和爿Wwfl/es。单子叶植物属于泽泻目(v4他附a似Zes)、水鳖目(Z(^/rocA"n'似/es)、iVay'arfa/es、審草目(7WurzV/a/cs)、CViw附cftVio/cs、五i7Vcfln/fl/es、帚灯草目(J柳Vwia/es)、户卯/es、/"/icfl/es、Qpem/es1、香蒲目(T);一a/es)、凤梨目(5wwe//flfes)、Z/"g访mte、j度fl/es、Cyc/朋说a/es、露兜树目(户flwJfl/ifl/")、Jm/w、l说!Vi/es和兰目(Ofc/^V/fl/es)的在本发明的实施方案中也是有用的。另外实例包括(但不限于)属于棵子植物类的植物,即松目(尸iVifl/es)、银杏目(GY"&0fl/es)、苏铁目(Q;cflrffl/es)和Gweto/es。本发明的方法优选用于在农业、园艺、生物转化的生物量和/或林业方面重要或感兴趣的植物。非限制性实例包括例如烟草、油料种子油菜、甜菜、马铃薯、番茄、黄瓜、胡椒、豆类(bean)、豌豆、柑橘类水果、鳄梨、桃、苹果、梨、草莓、plumb、甜瓜、茄子、棉花、大豆、向日葵、玫瑰、poinsettia、牵牛花、银胶菊(guayule)、巻心菜、菠菜、苜蓿、洋蓟(artichoke)、甘蔗、含羞草、Mm'ce"/es/^(feiYi、玉米、小麦、稻、黑麦、大麦、高粱和草,例如多枝(switch)草、巨型芦苹(giantreed)、狗牙根(Bermuda)草、阿拉伯高粱(Johnsongrass)或草坪草(turfgrasses)、谷子、九寐、芭蕉、白杨、桉树和针叶树。>^发坊逸括时/^源浙本领域^^,序列中的一个或多个氛基酸可以被其它JtJ^酸所取代,其电荷和极性与取代的m^酸相似,即保守H^酸取代,产生生物学/功能的沉默改变。多肽序列中氩基酸的保守取代可以从选自氨基酸所属类别的其它成员。可以将氨基酸分为如下四组(l)酸性(负电荷)氨基酸,例如天冬氨酸和谷氨酸;(2)碱性(正电荷)氨基酸,例如精氨酸、组氨酸和赖氨酸;(3)中性极性M酸,例如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺;和(4)中性非极性(疏水)氨基酸,例如甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸。由于事实上不同核酸序列编码具有一个或多个保守氨基酸改变的蛋白质,所以本发明的核酸分子包含的序列可以是不同于那些选自包括[前导68、69、94和95核苷酸組的编码蛋白质或其片段的序列。生物功能相同的本发明的多肽或其片段具有约10个或更少的保守氨基酸改变,更优选约7个或更少的保守氨基酸改变,及最优选约5个或更少的保守氨基酸改变,在本发明的优选实施方案中,多肽具有在约5个到约500个之间的保守改变,更优选在约10个到约300个之间的保守改变,甚至更优选在约25个到约150个之间的保守改变,及最优选在约5个到约25个之间或在1个到约5个之间的保守改变。6.本发明的多核苷酸和多肽有用性的实發逸明6.1通用方案6.1.1农杆菌介导的拟南芥转化用包含相对35S启动子的有义方向克隆的Ti质粒转化野生型拟南齐Wassilewskija(WS)植物。对于这些构建体一个有用的Ti质粒载体CRS338,包含Ceres构建的植物可选择标记基因膦丝菌素乙酰转移酶(i^7),其赋予转化的植物除草剂抗性。10个单独转化的事件通常以它们Ti代的定性表型来选择和评估。土壤混合物的制备24LSunshineMix#5土壤(SunGroHorticulture,Ltd.,Bellevue,WA)与16LTherm-O-Rock(Therm-O誦RockWest,Inc.,Chandler,AZ)在水泥搅拌器中混合,制成60:40的土壤混合物。向土壤混合物中加入2汤匙(Tbsp)Marathon1。/。颗粒(Hummert,EarthCity,MO)、3汤匙OSMOCOTE14-14-14(Hummert,EarthCity,MO)和1汤匙Peters肥料20-20-20(J.R.Peters,Inc.,Allentown,PA),先加入3加仑水然后加入到土壤中,并充分混合。通常,用4英寸直径的花盆装满土壤混合物,随后用8平方英寸的尼龙网覆盖。种植使用60mL注射器吸入35mL种子混合物。每盆加入25滴。在花盆的上方放置透明的繁殖圆顶,然后放置在55%遮荫布下面,并加入1英寸水进行地下灌溉。植物维持种植以后3到4天,移开盖子和遮荫布。按需要给植物浇水。7-10天后,用镊子将每盆减少到20个植物。2周以后,用Peters肥料进行地下灌溉,比例为每加仑水l汤匙。当抽蟇约为5-10cm长时,截去第一节和茎基底之间的部分以诱导第二次抽蟇。在截断后6到7天进行浸润。农杆菌的制备向150mL新鲜YEB中加入羧爷青霉素、壮观霉素和利福平每种各O.lmL(各自的母液浓度为100mg/ml)。获得农杆菌起始块(农杆菌培养于96孔块中,生长到OD咖约为1.0),通it^始块中的合适的孔转移1mL将每个构建体接种于一个培养瓶中。随后培养瓶在27。C振动培养。在OD柳达到近似1.0以后(约24小时),离心获得培养物。加入200mL浸润培养基重悬农杆菌沉淀。通过向卯0ml水中加入2.2gMS盐、50g蔗糖和5pi2mg/ml的节氨基嘌呤制备浸润培养基。浸润将花盆反转并使植物的地上部分在农杆菌悬浮液中浸没5分钟。使植物正常生长,并且收集种子。通过使用变更水条件的多种筛选来鉴定本发明的核苷酸序列。这些筛选是本领域内技术人员公认的,因为它们模拟能由增加的热和/或低水M产生的不同环境条件,因此能够预测为植物提供增加的干早耐受性的核酸序列,包括改良的对热和/或低水条件的耐受性,这些筛选通常分为两类(l)土壤筛选和(2)体外筛选。土壤筛选的优势在于测定整体植物对特定条件的应答,例如对干旱或高热。另一方面,体外歸选的优势在于依赖确定的培养基并因此允许更确定的生长条件处理。通过向生长培养基中加入特定的化学品,例如甘露醇或聚乙二醇(PEG),在体外筛选中某些"替代物"减少植物可利用的水分(例如Quesada等人(2000)Genetics154:421-36;vanderWeele等人(2000)JExp.Bot.51:1555-1562)。生长培养基渗透势的减少模拟植物生长在干燥土壤中的M。体外筛选的另一个替代类型狄落酸(ABA)抗性。ABA是一种植物激素,是环境胁迫应答的主要调节因子。ABA介导的信号控制一些胁迫应答基因的表达,并调节应答7JC分缺乏的气孔关闭。ABA存在时的筛选能以改变的胁迫应答来鉴别植物,并且有利于鉴别具有增加的干旱耐受性的植物(Shinozaki等人.(2003)Curr.Opin.PlantBiol6:410-417)。用于鉴别本发明的多核苷酸和多肽的土壤筛选和体外筛选在下面有更详细的描迷。一般而言,这些筛选用总库拟南芥T2转化的植物来传导。Ti植物用Ti质粒转化,该质粒含有相对于组成型启动子有义方向的特定核苷酸序列,也包含植物可选择的标记基因膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),其赋予转化的植物以除草剂抗性,尤其是对除草剂FinaleTM(Hoechst)。每个总库包含来自每100个不同转基因的大约5个单独转化事件的T2种子。对于所有筛选,检测来自多个总库的种子。可以在下面的实例中找到每个多核苷酸传导的筛选结果。6.1.2甘露醇总库的种子在30。/o家用漂白剂中灭菌5分钟,然后用水洗3次。已灭菌的种子使用之前最少在4。C避光分层3天。甘露醇培养基包括375mM甘露醇、0.5Vo(w/v)蔗糖、0.025。/o(w/v)MES水合物、0.5xMurashige和Skoog(MS)盐、和0.6%(w/v)植物琼脂。每个总库中大约1200个种子被平均散布在甘露醇平皿中,随后在22°C生长14天。将假定的甘露醇抗性种子转移到无甘露醇培养基中恢复。约一周以后,将这些种子转移到土壤中,并用Finale喷雾以选择转基因植物。用PCR确定存在于Finale抗性植物中的转基因。来自原始转基因林的未入库的T2种子和T3种子在375mM甘露醇培养基中重新测试。6.1.3聚乙二醇(PEG)总库的种子在30%家用漂白剂中灭菌5分钟,然后用水洗3次。已灭菌的种子使用之前最少在4°C避光分层3天。PEG培养基包含20%PEG8000、0.5%(w/v)蔗糖、0.025%(w/v)MES7jc合物、0.5xMS盐和0.3%(w/v)脱乙酰吉兰糖胶。将每个总库中大约1200个种子平均散布在PEG平皿中,^在22°C生长14天。将假定的PEG抗性种子转移到含0.01%(v/v)FinaleTM的无PEG培养基中。一周以后,将抗性种子转移到土壤中。用PCR确定存在于Finale抗性植物中的转基因。来自原始转基因林的未入库的T2种子和T3种子在20%PEG培养基中重新测试。6.1.4ABA总库的种子在30%家用漂白剂中灭菌5分钟,然后用水洗3次。已灭菌的种子使用之前最少在4°C避光分层3天。ABA培养基包括1.5pMABA、0.5。/o(w/v)蔗糖、0.05%(w/v)MES水合物、l.OxMS盐和0.6。/o(w/v)植物琼脂。每个总库中大约1200个种子被平均散布在ABA平亚中,随后在22°C生长14天。假定的ABA抗性种子被转移到含0.01%(v/v)FinaleTM的无ABA培养基中。一周以后,将抗性种子转移到土壤中。用PCR确定存在于FinaleTM抗性植物中的转基因,来自最初的转基因林中的未入库的T2种子和T3种子在20V。PEG培养基中重新测试。6.1.5土壤干旱土壤干旱筛选鉴别对干旱具有增加的耐受性(干燥耐受性)和干旱后恢复增强的植物。(a)土壤干旱总库筛选6个花盆的平板(flat)装满SunshineMix弁5(SunGroHorticulture):蛭石为3:2的土壤混合物,以地下灌溉使水饱和。约1700个总库的种子平均地分布于6个花盆中的5个。第6个花盆为野生型阳性对照种子保留。播种之后,用保湿圆顶覆盖平板,在4。C分层至少3天,然后转移到温室中(16:8小时的光照:黑暗周期;150/i爱因斯坦;70%相对湿度;22。C)。在温室中约4天以后移开保湿圆顶,按需要浇水。在第10天,用FinaleTM喷洒植物,以去除任何非转基因植物。当卯%的植物抽甚时,减少水分并将花盆移出平板以促进干燥均匀。干燥约5天以后,评估植物的干燥耐受性。随后再浇水,4吏植物恢复几天,然后评估干燥恢复性。收集展现干燥耐受性或增强的恢复性的植物的组织,进行PCR确定转基因。用土壤干旱预!HiE分析测试来自原始转基因林的T2种子。(b)土壤干旱预mt分析种子种植于72-花盆的平板中,每个4皮评估的转基因事件12盆,野生型对照12盆。浇水并随后用塑料保湿圆顶覆盖,4。C避光3天。在冷处理之后,将平板移到生长室(16:8小时的光照:黑暗周期;150p爱因斯坦;70%相对湿度;22°C)。在22°C约3天以后或当子叶充分展开时,移开保湿圆顶。间苗佳L每盆只剩一个幼苗。按需要可选择的使用0.5x霍格兰溶液和过滤的水灌溉。播种12天以后,最后一次浇水。在干燥大约12-16天以后,植物标i己为干旱耐受性的或非干旱耐受性的。对显示为显著量的耐受性植物的事件进一步进行土壤干旱测定一干燥耐受性.(c)土壤干旱测定一干燥耐受性种子种植在含有制备的土壤的24-花盆平板中。浇水并用塑料保湿圆顶覆盖,然后置于暗处4°C放置3天.在寒冷处理之后,将平板移到生长室(16:8小时的光照:黑暗周期;150/t爱因斯坦;70%相对湿度;22。C)。在22。C约5天以后或当子叶充分展开时,移开保湿圆顶。在第5天,间苗使每盆只剩一个幼苗。按需要可选择的使用0.5x霍格兰溶液和过滤的水灌溉。抽甚后5天,收集茎生叶在含有FinaleTM(Hoescht)的固体培养基上培养,以鉴别转基因植物(FinaleTM抗性)和非转基因植物(FinaleTM敏感)分离子。在转移到22。C后约16天开始干旱处理。在最后一次浇水以后的12天可观察到植物有规则的萎蔫。当约90%的对照植物萎蔫到3级时,所有样品根据如下等级来记分(l)无可见的变化,(2)叶颜色变化,(3)某些叶萎蔫,(4)所有叶萎蔫,和(5)所有叶严重萎蔫和失色。(d)土壤干旱测定一从干早恢复为评价植物干旱后增强的恢复性,进行上述操作。然后在对照植物萎蔫约卯°/。以后48小时,平板注入3/4满的水,并且1小时以后移去过量的水。重浇水约2到4天,用如下等级来评价植物从萎蔫的恢复(l)所有叶复原,(2)多数成熟的叶复原,(3)某些成熟的叶复原,(4)仅嫩叶复原,和(5)所有叶都没有复原。6.3结果下面给出上述实验的结果,其中每个单独的实施例与所有本发明特定多核苷^/多肽的实验结^目关。ME04218是从干燥耐受性筛选总库中鉴定出来的。在总库29中通过检测其如前所述的千旱耐受性来筛选抗萎蔫植物。从总库29中选出12个候选者。4^成功测序。ME04218在这组中出现一次。对应于克隆15450的基因在萌发的种子和生殖组织(包括花、花粉和长角果)中收Ji调,ME04218的3个事件在预,测定中显示千燥耐受性。根据土壤干旱预發汪测定播种来自ME04218的所有4个事件的种子。事件-01、-02和-04分离为干燥耐受性幼苗,并且进一步在验证测定中按前迷l-5等级记分。事件-03未萌发。ME04218的3个事件显示显著的干燥耐受性。在土壤干旱测定-干燥耐受性实验中,检测来自ME04218的3个T2事件的种子的干燥耐受性。随后,这些事件中的2个在T2和T3代中祐^再评估。表示为-99的T3林指多个T2植物的大量子代种子。在干旱以后,转基因植物比非转基因植物显示更好的恢复性。表1-1显示T2和T3代植物的耐受性。表1-1.干燥耐受性的卡方检验<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>aT为转基因,N为非转基因。b通过将非转基因组合中耐受性植物的出现频率乘以植物总数(耐受性植物加非耐受性植物)计算无效假设的耐受性植物的期望值。c通过将非转基因组合中非耐受性植物的出现频率乘以植物总数(耐受性植物加非耐受性植物)计算无效假设的非耐受性植物的期望值。d将每个事件中耐受性和非耐受性比例与期望的耐受性和非耐受性比例进行比较得到卡方检验的P值。显著性p值为粗体。e因为当进行第一次分析时不能获得事件-01的T3种子,所以进行了第二次分析。ME04218的3个事件显示FinaleTM抗性3:1的分离。在T2代中事件-01、-02和-04的FinaleTM抗性分离为3:1(R:S)。Ti植物的定性分析4个Ti植物的物理外观与对照相同。功能性同源物通过上述^^作鉴别ME04218的功能性同源物,并在图3中显示。实施例2:前导95-ME01466-克隆26369-cDNA14298505ME01466是从PEG和甘露醇耐受性筛选总库中鉴定出来的。在来自总库01的1200个种子中筛选具有增加的活力和在20%PEG平板或375mM甘露醇平板上生长的幼苗。在追踪实验中,观察到来自事件-01和-02的T2种子以PEG和甘露醇耐受性和非耐受性幼苗比例约为3:1分离。事件-04也分离为PEG耐受性植物,但是比例不是3:1。这些观测说明ME01466赋予渗透胁迫耐受性。随后在土壤中测试这些事件的干燥耐受性。ME01466的3个事件显示显著的干燥耐受性。完成3个实验来检测ME01466事件的干燥耐受性。表2-1显示所有3个实验的组合结果。表2-1.干燥耐受性的卡方测试<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>a转基因的情况,T为转基因,N为非转基因。b通过将非转基因组合中耐受性植物的出现频率乘以植物总数(耐受性植物加非耐受性植物)计算无效假设的耐受性植物的期望值。e通过将非转基因组合中非耐受性植物的出现频率乘以植物总数(耐受性植物加非耐受性植物)计算无效假设的非耐受性植物的期望值。d将每个事件中耐受性和非耐受性比例与期望的耐受性和非耐受性比例进行比较得到卡方检验的P值。显著性p值为粗体。在第3个实验中,观察到干旱耐受性植物比非耐受性植物稍矮.结果显示在下面的表2-2中,并JL^明更矮的植物显示延迟的干燥作用。在萎蔫级别为4或5的植物中减少植物的高度有可能引起花序顶端枯萎或花序延伸更早的停止。在转基因ME01466植物中土壤湿度与萎蔫等级的比较。转基因植物呈现的萎蔫程度与土壤中保留的湿度量(50%为饱和土壤)显著相关。表2-2显示萎蔫等级和植物高度之间的相互关系,说明更矮的植物比更高的植物能够更好的抵抗干燥。另外,萎蔫等级也与土壤中保留的湿度量相关。总之,这些观测说明ME01466干燥耐受性的作用方式为更矮的植物通过减少水分利用而引起干燥作用延緩。表2-2:在转基因ME01466植物中植物高度与萎蔫等级的比较。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>ME01466的3个事件显示FinaleTM抗性3:1的分离。在T3代中事件-01和-02的FinaleTM抗性分离为3:1(R:S)。在12代中事件-04的FinaleTM抗性也分离为3:1(R:S)。Ti植物的定性分析不包括于M究的事件-03呈现更大的莲座、增加的分支和披针形叶。剩余的19个Ti植物的物理外观与对照相同;由于在两个不同时期将构建体导入ME导管(pipeline)而存在20个事件。表2-3概述上述来自ME01466/克隆26365的实验结果,显示增强的土壤千燥耐受性,和改良的种子活力及在PEG和甘露醇中的生长力。表2-3:ME01466结果概述<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>功能性同源物通过上述操作鉴定ME014661/克隆26369的功能性同源物,并在图4中显示。实施例3-前导69-ME01854-克隆16209-cDNA23462374ME01854是从甘露醇耐受性筛选总库中鉴定出来的,作为土壤千旱条件下的分析林。总库4产生ME01854作为甘露醇耐受性植物林。测试单独事件-01到-04和-08的ABA、甘露醇和PEG耐受性。事件-03和-08在两世代显示确定的ABA耐受性。ME01854的2个事件显示FinaleTM3:l的分离。在T2代中事件-03和-08的FinaleTM分离为3:1(R:S)。ME01854的2个事件的2代与对照相比显示出应答脱水的干;^緩。选择事件ME01854"03和-08,基于它们的替代干旱筛选结果来测试土壤干旱。干旱抗性的方面,例如干m緩和千旱恢复,用于评价全部干旱性能。在T2和Ts的2个事件中,转基因植物显示在应答干旱时的干,緩性能显著改进,通过卡方比较测试确定p-0.05。(见表3-l)对于干旱后的恢复,两事件都倾向于增强恢复,但是通过卡方比较测试在两世代中没有显著性达到p=0.05的差异。在T3中事件-03具有显著性,但在T2代中没有,而事件-08在T2代而不是T3代具有显著性。表3-1.在两个世代(T2和T3)中,ME01854的2个事件在脱水11天以后应答千旱的干^4緩分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>Ti植物的定量分析10个1\植物中的9个物理外观与对照相同。事件-01被记录为高而具有减弱的生育能力,但是这种表型可能是受环境影响,因为不与任何其它事件共享。功能性同源物ME01854/克隆16209的功能性同源物通过上述过程鉴别,并且在图2中显示。实施例4-前导68-ME00270-克隆3086-cDNA23650508ME00270是从ABA耐受性筛选总库中筛选鉴定而来,作为土壤干早4Hf下的分析林。总库10产生ME00270作为ABA耐受性植物林。测试单独事件-01到-06的ABA、甘露醇和PEG耐受性。在两世代中,事件-04显示假定(但是不确定)的甘露醇耐受性,事件-05显示确定的ABA耐受性(结果未显示)。选择这两事件进行土壤干早测定。ME00270的2个事件显示FinaleTM3:l的分离。在T2代中事件-04和-05的FinaleTM分离为3:1(R:S)(结果未显示)。ME00270的2个事件的2代与对照相比显示出应答脱水的干^1緩和干旱后的恢复增强。基于其替代的干旱筛选结果选择事件ME00270-04和-05测试土壤干旱。4吏用干旱抗性的方面,例如千^4緩和干旱恢复评价全部干旱行为。在T2和T3的2个事件中,转基因植物在应答干旱时显示显著的干^^及干旱恢复,通过卡方比较测试确定p-0.05。表4-1.在两个世4戈(T2和T3)中,ME00270的2个事件在最后一次浇水11天以后应答干旱的干^1緩分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>恢复非恢复观测的期望的观测的1期望的总数野生型127132.1241235.9368ME0027(W)5-18(T3)93.927.111总数1362431379,MW3勉證響:謹f邏絲逾溪辨功能性同源物通过上述^Mt鉴定ME00270/克隆3086的功能性同源物,并在图l中显示。还对以本发明的多核苷酸(具体为前导No.94、95、68和69)转化的植物评价任何有害的、负面的或不希望的特性。这类特性包括萌发率的减少、一般形态学/结构的改变、开花天数的变化、抽墨以后植物花序区大小的变化、和生育力的变化(例如,基于种子充满的长角果数)。对于观测的植物,在本发明的转化植物与对照之间没有统计学上的显著差异。实施例5-功能性同源物序列的确定上述实施例1-4中描述的"前导"序列用于鉴定前导序列的功能性同源物,并且与那些序列一起用于确定前导和功能性同源物序列的给定组的共有序列。如果目的序列和查询序列编码的蛋白质具有类似的功能和/或活性,则目的序列被认为是查询序列的功能性同源物。使用已知的交互BLAST(Rivera等人,Proc.NatlAcadSci.USA,1998,95:6239隱6244)的方法从包括所有公开可用的和专利的肽序列的数据库中鉴定可能的功能性同源物序列,数据库包括来自NCBI的NR和从Ceres克隆翻译的肽。在交互BLAST过程开始之前,用BLAST在来自其起源物种的所有肽中检索特定查询多肽,以鉴别与查询多肽具有80%或更大序列同一性的序列,以及在比对中沿较短序列有85%或更长比对长度的序列。查询多肽和任何上述鉴定的多肽被指定为一个群。主要的交互BALST过程包括两轮BLAST检索;正向检索和反向检索。在正向检索的步骤中,来源于物种SA的查询多M列"多肽A"在目的物种的所有蛋白质序列中进行BLAST。用E值截断值为10-5和同一性截断值为35%确定最高命中序列。在最高命中序列中,具有最低E值的序列被指定为最佳命中序列,并且被认为是可能的功能性同源物。任何其它与最佳命中序列或最初查询多肽的序列同一性为80%或更大的最高命中序列也被认为是可能的功能性同源物。在所有目的物种中重复这一过程。在反向检索的步骤中,在来源于种SA的所有蛋白质或多肽序列中,使用从所有物种的正向检索中确定的最高命中序列进行BLAST,来自上述群中返回多肽的正向检索的最高命中序列作为最佳命中序列,也被认为是可能的功能性同源物。通过可能的功能性同源物序列抬r验指南来确定功能性同源物。在图1-4中显示典型的功能性同源物。每个图代表一组与相应确定的功能性同源物目的序列比对的前导/查询序列。前导序列和它们相应的功能性同源物序列进行比对来鉴别保守氨基酸,及确定包含在比对序列的特定位点经常出现的氨基酸残基的共有序列,如图l-4所示。然后每个共有序列包含确定的和编号的保守区域或结构域,某些保守区域通过保守区域之间的一个或多个氨基酸残基来分离,用破折号(-)表示。因此,本发明的有用的多肽包括图1-4所示的每个前导和功能性同源物序列,也包括在那些图中所示的共有序列。本发明也包含其它有用的具有共有序列和确定保守区域结构的多肽.因此,有用的多肽包括在图l-4中个别图描述的每个比对表中含有一个或多个编号的保守区域的多肽,其中保守区域可能以破折号分离。有用的多肽也包括那些选自图1-4的个别比对表中包含所有编号保守区域的序列,可选的包含单个比对表中和以选自图1-4的单个比对表所描述次序的所有编号保守区域。有用的多肽也包括那些包含单个比对表中和以选自图1-4的单个比对表所描述次序的所有编号保守区域的序列,其中保守区域以破折号分离,其中每个在两个邻近保守区域之间的破折号包含前导和/或功能性同源物序列比对表中特定破折号的位点所描述的氨基酸。在共有序列中这些破折号长度范围可以从比对序列之一的最小破折号数的长度到比对序列之一的最大破折号数的长度。这类有用的多肽长度(氨基酸残基总数)也可以等于鉴定的共有序列的长度,或为选自图1-4的单个比对表中所确定的前导和功能性同源物序列的任意给定家族中最短到最长序列的长度范围。本发明还包含编码上述多肽的核普酸,及其互补序列,并包括其根据遗传密码简并的可选择序列。本发明可被如此描述,即本领域普通技术人员应该明白可以对实际操作本发明的材料和方法进行各种修改。如在以下权利要求所定义的,这类修改被认为包括在本发B月的范围之内。来自专利和期刊文献的每一参考文献在此处以其整体被明确引用。参考文献(1)Zhangetal.(2004)PlantPhysiol.135:615..(2)Salomonetal.(1984)EMBOJ.3:141.(3)Herrera-Estrellaetal.(1983)EMBOJ.2:987.(4)Escuderoetal.(1996)PlantJ.10:355.(5)Ishidaetal.(1996)NatureBiotechnology14:745.(6)Mayetal.(1995)Bio/Technology13:486)(7)Armaleoetal.(1990)CurrentGenetics17:97.(8)Smith.T.F.andWaterman,M.S.(1981)Adv.App.Math.2:482.(9)Needle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^皮鉴定为前导68、69、94和95的任一,分别对应于SEQIDNo.XX-XX;或(g)编码图1-4中任一的前导、功能性同源物或共有序列的核苷酸序列。17.包含权利要求16的植物细胞的转基因植物,其中所述转基因植物与在同样4Hf下种植的野生型植物相比具有增加的干旱耐受性特性。18.权利要求17的植物的子代,其中所述子代与不包含所述核酸的相应对照植物的相应水平相比具有增加的干旱耐受性。19.根据权利要求17的转基因植物的种子。20.根据权利要求17的转基因植物的营养组织。21.食物产品,其包含根据权利要求17的转基因植物的营养组织。22.饲料产品,其包含根据权利要求17的转基因植物的营养组织。23.检测样品中核酸的方法,包括提供根据权利要求1的分离的核酸;在允许将分离核酸的核苷酸序列与样品中核酸的核苷酸序列相比较的4Ht下,使所述分离的核酸接触样品;且对该比较进行分析。24.在植物中增加干旱耐受性的方法,包括(a)用核酸分子转化植物,该核酸分子包含编码图1-4任一中的任一前导、功能性同源物或共有序列的核苷酸序列;和(b)在所述转化的植物中表达所述核苷酸序列,其中所述转化植物与未使用所述核苷酸序列转化的植物相比,具有增加的干旱耐受性。25.增加植物的干旱耐受性的方法,所述方法包括改变根据权利要求1的核酸分子在所述植物中的表达水平。全文摘要公开的是分离的多核苷酸及由其编码的多肽,连同那些产物用于制备转基因植物的用途,所述转基因植物对非生物胁迫(例如,高温或低温、干旱、水淹)具有增加的抗性。文档编号A01H5/00GK101115841SQ200580048025公开日2008年1月30日申请日期2005年12月16日优先权日2004年12月16日发明者C·克里斯坦森,G·纳扎恩,K·A·费尔德曼申请人:塞瑞斯公司
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