一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌及其在吸附霉菌毒素中的应用的制作方法

专利名称：：一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌及其在吸附霉菌毒素中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及的一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌，菌种命名为EnterococcusfaecalisSRG，已与2010年03月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCM2010046。具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明实施例1能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌EnterococcusfaecalisSRGCCTCCM2010046的筛选、培养及对霉菌毒素吸附作用的检测1.主要仪器试剂试剂MRS培养基，苯，己腈，次氯酸钠溶液，AFB1检测试剂盒，水合硅铝酸盐；仪器与主要耗材10mL离心管，大、中、小枪头，酶标仪(Thermo)。2.试验菌株①实验室原有的菌株LP，7340，RDH，FLQ，ZYRLQ，SRG，RS1XL。②鸡肠道以及牛粪中分离的菌株无菌取鸡肠内容物/新鲜牛粪5g，加入装有50mL灭菌生理盐水的带玻璃珠的三角瓶中，混匀后再添加2%CaC03的MRS培养基平板划线分离，37t:培养24h，挑取有Ca2+圈的菌落，继续在平板中划线纯化，然后进行菌体形态的观察和属的鉴定，将纯化后的乳酸菌接种于相应的试管斜面中，挑取乳酸菌属的菌株备用，挑选出来的菌株的特性如表1所示。由表1可知，Rl、R2、R5均为球菌，平板上培养为乳白色或白色圆形菌落；R3、R4为杆菌，平板上培养为乳白色或白色圆形菌落。表1乳酸菌的形状特征<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>③黑龙江八一农垦大学惠赠的乳酸菌菌株NK1、NK5、GLRSG。3.初筛3.1乳酸菌发酵液pH值的测定测定结果见表2。由表2可知，在发酵过程中乳杆菌比乳球菌的终pH值低，在这几株乳酸菌中以7340发酵液的pH最低为3.42，其次为GLSRG、LP、RSG0131和SRG的pH值较低，分别为3.58、3.63、4.08、4.13。表2乳酸菌发酵液的pH值<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3.2乳酸菌菌株吸附AFB1性能的测定3.2.1吸附时间(lh、2h)对乳酸菌吸附率的影响分别将乳酸菌接种到MRS(pH6.5)液体培养基中，37。C厌氧培养24h，分别取5mL乳酸菌培养液于无菌的离心管中，4°C、5000rpm离心5min，弃上清液，在沉淀的乳酸菌细胞中加入生理盐水，轻轻吹打，重复离心1次，加入10iiL黄曲霉毒素Bl苯-乙晴溶液(AFB1浓度为100g/mL)。将混有AFBl的乳酸菌细胞悬液在37°C，180rpm振荡条件下培养lh和2h。在4"以10000rpm离心10min，弃上清液，并向沉淀中加入5mL生理盐水并重复离心1次，用试剂盒2次离心所得上清液中黄曲霉毒素B1的量。按下列公式计算乳酸菌吸附AFB1的强度乳酸菌吸附黄曲霉毒素Bl的强度(％)=(1-上清液中AFB1的量/实验前加入标准的AFB1量)X100%。结果见表3。表3吸附时间(lh、2h)对乳酸菌吸附率的影响乳酸菌菌株7340FIX)ZYRLQRG0131(R4)NK5由表3可知，乳酸菌与黄曲霉毒素Bl混合lh与2h，对乳酸菌的吸附能力差异无显著性(P>0.05)。同时可以得出，不同的乳酸菌菌株吸附AFB1的能力存在差异。3.2.2不同乳酸菌菌株吸附AFB1性能的比较试验选取15株性能优良的乳酸菌菌株，测定其对AFB1的吸附能力，乳酸菌与黄曲霉毒素B1混合时间为lh。方法同3.2.1，结果见表4。表415株不同乳酸菌菌株吸附AFB1性能的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表4可知，不同菌株对AFB1的吸附能力差异显著，其中GLRSG和SRG对AFB1的去除能力较强，分别为67.67%和41.95%，可以选作备用菌株。3.3灭活处理对乳酸菌黏附性能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>无菌取5mL乳酸菌发酵液，IO(TC煮沸10min灭活处理。检测方法同3.2.1，结果见表5。表5灭活处理对乳酸菌黏附性能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表5可以看出，灭活处理对乳酸菌吸附能力有一定的影B向，灭活处理对不同菌株吸附AFB1的能力具有差异性。SRG经过灭活之后其对AFB1的吸附能力由41.46%上升至57.54X，而GLRSG经过灭活之后其对AFB1的吸附能力减弱。3.4胆盐对筛选菌株存活的影响试验选取pH较低的SRG和GLRSG菌株，菌液按5X(v/v)接种于胆盐浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%(w/v)的PBS中，以不加胆盐的PBS缓冲液为对照，在37t:条件下培养10min后，取样进行平板菌落计数。筛选菌株存活率计算公式a/a。X100%。a。各处理的活菌数。表6胆盐MRS培养基中乳酸菌的存活率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从表6可以看出，在MRS胆盐培养基中，SRG对胆盐的耐受性比GLRSG耐受胆盐的能力强，在0.1%、0.2%的胆盐浓度中SRG的存活率在80%以上，在胆盐浓度高达5%时，仍然有1.15%的SRG存活下来，SRG在胆盐MRS中的存活率显著高于GLRSG的存活水平。3.5水合硅铝酸盐与乳酸菌的复配取一定量的水合硅铝酸盐与乳酸菌发酵液(活菌数为20亿)按照不同的比例混合，本试验分为5个浓度梯度，每升乳酸菌菌液中加入水合硅铝酸盐的量分别为0.OOmg，0.20mg，0.40mg，0.60mg，0.80mg，摇匀，加入100yL黄曲霉毒素B苯-乙晴溶液(AFB1浓度为100iig/mL)。混合液在37。C下，180rpm培养lh。4°C以lOOOOrpm离心10min，将没有结合的霉菌毒素(仍在溶液中)与结合型霉菌毒素(在吸附剂中)分离，并向沉淀中加入5mL生理盐水并重复离心1次，弃上清液，用试剂盒2次离心所得上清液中黄曲霉毒素B1的量。试验结果见表7。表7水合硅铝酸盐与乳酸菌的复配效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表7可知，SRG在没有加入水合硅铝酸盐的条件下，其去除AFB1的能力可达98.10%，而此时GLRSG对AFB1的去除能力低于90%。当水合硅铝酸盐的浓度为0.20%0时，SRG组对AFB1的吸附能力达99.24%，高于GLRSG组95.83%的吸附力，当水合硅铝酸盐的浓度为0.40%。时，SRG组与GLRSG组对AFB1的吸附能力差异不大，分别为98.05%和98.18%，当水合硅铝酸盐的浓度为0.60。；时，GLRSG组去除AFB1的能力为98.34%，而水合硅铝酸盐的浓度为0.60%。时SRG组以及水合硅铝酸盐的浓度为0.80%。时，SRG和GLRSG两组对AFB1的吸附力未能测出，这可能是由于试剂盒的灵敏度所造成的，其测定区间为5ng/g-1000ng/g，说明溶液中AFB1的浓度已低于5ng/g，基本上已经吸附干净。4.试验结论通过试验可以得出以下结论①乳酸菌对AFB1吸附能力的大小与乳酸菌的产酸能力没有明显的相关性；②乳酸菌对AFB1的吸附作用迅速，在lh内就能充分发挥吸附作用；③通过试验筛选出两株对AFB1吸附能力较强的乳酸菌菌株，分别为SRG和GLRSG，灭活菌也具有对AFB1的吸附能力，并且不同的菌株灭活后吸附AFB1能力的变化不同；⑤SRG发酵液的活菌数高，对胆盐的耐受能力比GLRSG对胆盐的耐受能力强，综合灭活菌对AFB1的吸附性能与水合硅铝酸盐复配效果，是实际生产应用中最优良的菌株。对筛选出来的最优良的菌株进行鉴定，确定其为乳酸菌家族中的粪肠球菌，对其进行保藏，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，菌种命名为EnterococcusfaecalisSRG，保藏日期为2010年03月02日，保藏编号为CCTCCM2010046。该菌株的生物学特性为细胞球形或卵圆形，O.62.OiimXO.62.5iim，在液体培养基中呈成对或短链；不生芽孢；革兰氏阳性；有时以鞭毛运动；没有明显的荚膜；兼性厌氧；化能异养，发酵代谢；可发酵的碳水化合物范围广泛，主要产L(+)-乳酸，但不产气，最终pH4.24.6，营养需要复杂；接触酶阴性；通常在1045t:能生长，最适37t:，在pH9.6、6.5%NaCl中和40%胆碱中也能生长；很少还原硝酸盐；通常发酵乳糖；通常为Lancefield血清D群。培养基可以为MRS培养基，配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，调节pH5.56.7，115t:条件下灭菌20分钟；其中，金属离子混合液的配方是乙酸钠5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.2g/L、吐温_801mL/L，pH5.56.7，固体加琼脂粉1.52.0%。培养条件为pH5.56.7，温度3042°C。实施例2粪肠球菌SRG特性的研究1材料与方法1.1试验材料粪肠球菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM2010046;大肠杆菌Op鸡金黄色葡萄球菌-C56011:均购自中监所；试验仪器电子天平、水浴锅、微波炉、双目显微镜、干燥器、高速冷冻离心机、水平离心机、垂直净化工作台等。1.2试验方法1.2.l革兰氏染色法蘸取稀释液于MRS琼脂平板划线接种，分别采用需氧、焦性没食子酸法及烛缸法，在37t:培养箱中恒温培养24h.每种方法均挑取5个典型菌落做革兰氏染色，镜检，并做纯培养。1.2.2产酸性能的测定将试验菌株在MRS液体培养基中37t:厌氧培养24h，同时做空白，设3个重复，用无菌注射器取3mL发酵液于10mL离心管，用酸度计测其pH值。1.2.3耐酸性试验。取发酵24h的菌液10mL，3000rpmin离心15min，弃上清，将菌体用生理盐水洗涤3次，先加入生理盐水5mL，1Omol/L的盐酸调节粪肠球菌的菌悬液的pH值分别为2.0、3.0、4.O，然后用生理盐水定容至10mL，于37t:处理2h。取菌悬液，在平皿上作菌落计数，从而计算出粪肠球菌的存活率，以pH5.56.0的菌液为对照。存活率(％)=待测pH的菌液活菌数/pH5.56.0的菌液活菌数X100%。1.2.4体外抑菌试验双碟的制备取直径90mm的平底双碟，注入灭菌的营养琼脂(1.5%v/v)15mL，水平放置使之凝固，作为底层，另取营养琼脂(浓度为0.8%，冷至5(TC左右)与37t:24h培养的指示菌液适量(50mL培养基加2mL左右)混匀，取6mL铺在底层培养基上，水平放置使之凝固，作为菌层。加样品用无菌镊子夹取已灭菌的牛津杯，打开皿盖，放在培养基上。在牛津杯中加满相同量的粪肠球菌菌液(300iiL)，每个样品三个重复。将加完样的双碟小心放入37t:恒温箱内，培养15h后(以金黄色葡萄球菌和鸡大肠杆菌OJ乍指示菌)取出测量抑菌圈直径。1.2.5胆盐对粪肠球菌存活的影响菌液按5%(v/v)接种于胆盐浓度为O.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%(w/v)的MRS培养基中，以不加胆盐的MRS培养基为对照，在37t:条件下培养10min后，取样进行平板菌落计数，计算粪肠球菌存活率。1.2.6粪肠球菌粘附试验粪肠球菌对胃肠道粘液黏附力的测定粘液制备打开动物腹腔，无菌取空肠回肠，分别用lmL无菌NSS液冲洗肠腔3次，剪开，每部分取12g粘液，-201:保存备用。粪肠球菌的粘附取12孔或24孔细胞培养板，实验组各加0.5mL或0.25mL粘液，11每种粘液平行3个孔，4t:过夜固定。然后每孔加1.0mL或0.5mLNSS液洗涤2次，除去未粘附的粘液，每孔加等量0.5mL或0.25mL标记菌悬液。另以0.5mL或0.25mL标记菌悬液作阳性对照，2『C孵育2h。除阳性对照夕卜，再用1.0mL或0.5mLNSS洗去未粘附细菌。计数将吸出的悬液和每次的洗涤液都装入小离心管中，以备计数。菌体计数采用梯度稀释的方法，计算出未粘附的总菌量，最后计算出该菌粘附的百分率。2结果2.1菌株的形态学观察3种方法经37t:培养24h，均生长出乳白色、隆起、湿润光亮、边缘整齐的小菌落，但需氧培养的菌落明显小于厌氧法及CO培养法。革兰氏染色为阳性，卵圆形球菌，端头，呈"枣核状"，菌体单个，23个存在，并有67个菌体短链状。2.2菌株pH值的测定结果见表8。表8粪肠球菌发酵液的pH值<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>从表8可以得出，此株粪肠球菌的产酸性能是比较强的。2.3耐酸性试验结果见表9。表9粪肠球菌耐酸性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表9可以得出，所分离的粪肠球菌在pH2.0、3.0、4.0时的存活率分别为51.0%、87.2%、98.4%，说明该菌具有较强的耐酸性。2.4菌株的体外抑菌试验结果见表10。表10粪肠球菌原液的抑菌圈直径单位mm<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表10可以得出，该菌株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都有较强的抑制作用，抑菌圈平均直径达到20mm和18mm左右。2.5胆盐对粪肠球菌存活的影响结果见表11。表11胆盐对粪肠球菌的影响菌种0.1胆盐浓度(％)0.20.30.40.5粪肠球菌的存活率(％)10082.122.14.101.15从表ll可以得出，在MRS培养基中，胆盐对粪肠球菌的影响比较小，胆盐浓度为0.3%时的存活率仍能达到22.1%。2.6粪肠球菌粘附试验结果见表12。表12粪肠球菌粘附试验活菌数(><108cfU/mL)CK未粘附的菌悬未粘附的菌悬未粘附的菌悬液l液2液3粪肠球菌1.000.160.220.23由表12可以看出，该株粪肠球菌的粘附率能达到79.9%，说明该菌株的粘附性能比较强的。3结论正常菌群是指正常人和动物的体表或体内常在的菌群，它们的种类、数量很多。在正常情况下，与宿主、环境三者之间形成一个动态平衡的微生态系统，与宿主的生长、发育、物质代谢、衰老等有密切关系。某些益生菌可通过人为地添加，重建动物体的部分微生态环境，以达到促进消化吸收、提供营养素、调节免疫功能抵御病原菌侵入的目的，这些作用的产生取决于益生菌是否能够粘附于宿主的特定部位，进而在该部位定植。本试验表明，该株粪肠球菌既具有较强的定植能力，又能够对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌产生较好的抑制作用，因此它可以作为优良粪肠球菌微生态制剂的开发菌株。实施例3制备生物脱霉剂步骤如下(l)发酵(i)菌种选用粪肠球菌EnterococcusfaecalisSRGCCTCCM2010046;(ii)斜面培养将冻干粉菌种接种于固体斜面培养基上，在37t:培养24h;(iii)—级种子培养将培养好的斜面，在无菌条件下用接种环接2环于80mL种子液体培养基中，在37t:条件下，静置培养12h，制得一级种子液；(iv)扩大培养以5%(v/v)的接种量，将一级种子液接于800mL种子液体培养基中，在37t:条件下，静置培养8h，制得二级种子液；(v)发酵罐培养以5%(v/v)的接种量，将二级种子液接于液体发酵培养基中，于37t:条件下，静置培养16h;(vi)收集发酵产物待步骤(v)之发酵液黏度达130000cP时，收集发酵液；上述步骤(iii)、(iv)所述种子液体培养基配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，调节pH6.0，115t:条件下灭菌20分钟；步骤(ii)所述固体斜面培养基为上述种子液体培养基中添加1.5%的进口琼脂粉；步骤(v)中所述液体发酵培养基配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，调节pH6.0;其中，13金属离子混合液的配方是乙酸钠5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.2g/L、吐温-801mL/L，pH6.0。(2)取水合硅铝酸盐，与步骤(1)中得到的发酵液混合，得复配液，即为生物脱霉剂，混合后，水合硅铝酸盐的质量浓度为0.08%;(3)将步骤(2)中得到的复配液加入到饲料中，混合均匀。使用时，根据具体情况添加到饲料中当需要预防饲料霉变时，其添加量为饲料重量的0.050.10%，当需要清除霉菌毒素时，其添加量为饲料重量的0.100.20%。实施例4生物脱霉剂体外吸附效果在霉变饲料中加入本发明的实施例3制备的生物脱霉剂之后，结果见表13，可以看到，各试验组中的AFB1均被不同程度地吸附，其中添加2.00。；的生物脱霉剂组对AFB1的吸附率在99.75%以上，饲料中的黄曲霉毒素基本上已经被完全吸附，而添加1.50%。的生物脱霉剂组对AFB1的吸附率高达98.05%，脱霉效果非常显著。表13生物脱霉剂体外吸附AFB1试验生物脱霉剂含量(％()AFB1剩余ng/g吸附率(°/。)0.50806.259.691.00355.682.221.5019.05.98.052.0055.00299.75实施例5生物脱霉剂体内脱毒效果(—)全收粪试验检测霉必吸对AFB1的脱毒效果为了检测霉必吸对黄曲霉毒素B1(AFB1)的脱毒性能，采用全收粪法检测了动物食用霉变饲料后，被霉必吸吸附而随之排除体外的黄曲霉毒素Bl占食入总量的比例，以此确定霉必吸的脱毒效果。l试验材料与试验动物霉变玉米玉米粉于25°C3(TC，水分含量为15%的条件下发霉35天，6(TC烘干，粉碎。实验动物选用体重相近、采食正常、健康的蛋鸡作为实验动物，供试鸡分为3组，每组4只(设4个重复)。手术缝合针、线、强饲器、50mL塑料收粪瓶2试验方法2.l试验进程试验分为预试期、正试期以及体况恢复期三个阶段，正试期包括禁食排空、强饲和粪尿排泄物收集三个过程，其进程见表14。表14饲喂时间和饲喂方法<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.2排泄物的收集与处理强饲后立即装好集粪瓶，以重复组为单位收集48h的排泄物，12h收集一次，排泄物取出后于6(TC烘干，室内回潮24h，称重，作为每个重复组鸡的平均风干排泄物总量，粉碎，过40目筛，混合均匀后装入取样袋内封存。2.3AFB1的提取与含量测定按照GB样品脂肪含量《3%的AFBl提取方法进行提取。AFBl的含量使用AFBl检测试剂盒(北京市营养源生物研究所)测定，操作方法依照说明书。3试验结果表15生物脱霉剂体内吸附AFBl试验<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表16不同组别AFBl排出率的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>如表15、16所示，空白对照组粪便AFB1的总量占霉变玉米中AFB1总量的38.2%，有大量的AFBl没有随粪便排出而残留在动物体内。霉变玉米中加入1%。的生物脱霉剂之后，50.44X的AFB1随粪便排出体外。霉变玉米中加入2%。的生物脱霉剂效果最好，AFBl的排出率达72.3%，脱霉效果显著。生物脱霉剂将生物脱酶和物理吸附结合起来，显著调高了霉菌毒素随粪便的排出率。基于上述的实验，本发明的发明人建议使用本发明的生物脱霉剂的使用添加量如下按照1.0%。的比例添加，可以吸附饲料中不容易被肉眼蔡觉的微量霉菌毒素，达到预防霉菌毒素中毒的目的；而对于轻度霉变的饲料，添加1.5%。的生物脱霉剂，可以达到防霉脱毒的效果，预防家畜食用霉变饲料后中毒；中度以上能够用肉眼发觉霉变严重的饲料，应当先将霉变饲料分散，降低霉菌毒素的浓度，再添加2.Oo;的生物脱霉剂进行脱毒。(二)霉必吸对维生素吸附性的检测为了检测霉必吸对饲料中维生素类物质的影响，考虑本实验室的实际情况，选择维生素C作为检测对象，测定霉必吸对Ve的吸附性。l试剂与仪器6%(v/v)冰乙酸、0.5%(g/v)淀粉指示液、0.lmol/L碘标准液仪器设备为普通实验室设备2测定方法称取试样0.2g(准确至0.0002g)，加新煮沸过的冷水lOOmL与冰乙酸溶液10mL使其溶解，加入霉必吸1.0%。组和2.0%。组，并设立空白对照组，180rpm摇床放置lh，加淀粉指示剂lmL，立即用0.lmol/L碘标准液滴定，至溶液蓝色在30s内不退。试样中维生素C的含量质量分数按下面公式计算。权利要求一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌，其特征在于该菌种命名为EnterococcusfaecalisSRG，已与2010年03月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCM2010046。2.根据权利要求1所述的能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌，其特征在于其生物学特性如下细胞球形或卵圆形，0.62.0iimXO.62.5iim，在液体培养基中呈成对或短链；不生芽孢；革兰氏阳性；有时以鞭毛运动；没有明显的荚膜；兼性厌氧；化能异养，发酵代谢；可发酵的碳水化合物范围广泛，主要产L(+)-乳酸，但不产气，最终pH4.24.6，营养需要复杂；接触酶阴性；通常在1045t:能生长，最适37。C，在pH9.6、6.5%NaCl中和40%胆碱中也能生长；很少还原硝酸盐；通常发酵乳糖；通常为Lancefield血清D群。3.权利要求1所述的能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌在吸附霉变饲料中含有的霉菌毒素中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用涉及的方法步骤如下(1)发酵选用粪肠球菌EnterococcusfaecalisSRGCCTCCM2010046，发酵，发酵培养基MRS培养基，培养条件为pH5.56.7，温度3042°C;得发酵液；(2)取水合硅铝酸盐，与步骤(1)中得到的发酵液混合，得复配液，混合后，水合硅铝酸盐的质量浓度为0.050.10%;(3)将步骤(2)中得到的复配液加入到饲料中，混合均匀，预防饲料霉变时，其添加量为饲料重量的0.050.1%，清除霉菌毒素时，其添加量为饲料重量的0.100.20%。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵的具体步骤如下(i)菌种选用粪肠球菌EnterococcusfaecalisSRGCCTCCM2010046;(ii)斜面培养将冻干粉菌种接种于固体斜面培养基上，在3042t:培养2028h;(iii)一级种子培养将培养好的斜面，在无菌条件下用接种环接13环于50mLlOOmL种子液体培养基中，在3042t:条件下，静置培养1014h，制得一级种子液；(iv)扩大培养以5%的接种量，将一级种子液接于500mLlOOOmL种子液体培养基中，在3042t:条件下，静置培养512h，制得二级种子液；(v)发酵罐培养以5%的接种量，将二级种子液接于液体发酵培养基中，于3042°C条件下，静置培养1220h;(vi)收集发酵产物待步骤(v)之发酵液黏度达1200015000cP时，收集发酵液；上述步骤(iii)、(iv)所述种子液体培养基配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，调节pH5.56.7，115t:条件下灭菌20分钟；步骤(ii)所述固体斜面培养基为上述种子液体培养基中添加1.52.0%的琼脂粉；步骤(v)中所述液体发酵培养基配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L，调节pH5.56.7;其中，金属离子混合液的配方是乙酸钠5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.2g/L、吐温-801mL/L，pH5.56.7。全文摘要本发明公开了一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌，菌种命名为EnterococcusfaecalisSRG，已与2010年03月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCM2010046。本发明的粪肠球菌能够吸附霉菌毒素，吸附能力较强，可以单独或与水合硅铝酸盐复配作为饲料的脱霉剂应用。本发明的粪肠球菌在脱霉的同时，还具有其基本的生物保健功能。将其与具有较强霉菌吸附能力的水合硅铝酸盐复配起来，不仅通过物理吸附性作用达到脱霉的效果，还能通过粪肠球菌的生物活性起到防霉、脱霉、保健的功效。文档编号A23K1/00GK101792726SQ20101013170公开日2010年8月4日申请日期2010年3月25日优先权日2010年3月25日发明者单宝龙,张建梅,谷巍申请人:山东宝来利来生物工程股份有限公司