专利名称：一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于食品加工技术领域，涉及一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法及应用。
背景技术：
豆粕粗蛋白含量丰富，氨基酸组成合理，此外，含有脂肪、碳水化合物、维生素等其他营养物质和许多能产生生物效应的活性物质，如大豆低聚糖、大豆异黄酮、大豆活性肽等，是一种良好的植物源蛋白饲料。豆粕中含有多种抗营养因子(anti-nutritional factors, ANF)，如胰蛋白酶抑制因子、脲酶等，研究发现，这些抗营养因子影响了畜禽对营养成分的消化、吸收，影响动物的健康及生产性能。这就需要对抗营养因子进行处理，从而提高豆粕的消化率，提高营养价值，目前为止常用的加工方法概括为物理方法、化学方法以及生物学方法。通过微生物发酵的方法制备蛋白酶，以此水解处理豆粕，豆粕中的大分子蛋白被蛋白酶等水解成小分子的肽，蛋白质的利用率得到了提高。大豆肽具有良好的理化性质，在食品和医药方面有着非常广阔的应用前景，发酵豆粕在动物保健，尤其是在调节幼龄动物的肠道微生物方面效果良好，广泛应用在畜牧及饲料工业界。此外，微生物发酵豆粕，不需要加热或添加化学试剂，饲料营养成分被破坏的可能性小，应用安全，实用性强。大豆肽具有独特的理化性质及多种生物活性。通过微生物发酵的方法能够有效地去除豆粕中的多种抗营养因子，降低成本，提高产品的利用率，在实际生产和应用中具有广泛的意义。然而，蛋白酶的制备受环境因子的影响。如①PH的影响。不同pH值的培养基所产生的蛋白酶种类不同，所产蛋白酶的PH值一般相近与参加酶促反应的最适pH值。② 通风量的影响。深层培养的过程，需要通风搅拌，霉菌菌丝的生长和产酶量的多少受到通风量的多少影响，通风量的多少在实际生产中要控制好，一方面要利于菌体的生长，另一方面不会抑制蛋白酶的效果。③温度的影响。不同的微生物发酵产酶所需的最适温度不同，菌体的生长、产酶的周期都会受到温度过高或者过低影响，这样不利于高活性蛋白酶的产生。 此外，发酵培养基的组成及其他代谢产物的生成也会影响到蛋白酶的发酵生产，因此，实际生产中应该根据所筛选得到的微生物摸索适宜的发酵、水解条件，从而获得充足的蛋白酶， 进一步提高大豆肽转化率。
发明内容
本发明的目在于提供一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法及应用。为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，最终获得了如下技术方案 一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，包括如下步骤
(1)将豆粕、麸皮和水按1 :0. 15-0. 2 1. 4-1. 6的重量比配制成固态发酵培养基，灭菌，冷却，以种子液占固体发酵培养基干重质量百分比计，接种活化的黑曲霉(Aspergillusniger, ACCC30787)种子液 8. 5%、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, ACCCO1746)种子液 1. 4%，并在以下条件下发酵培养外加占固体发酵培养基干重质量百分比为1. ^1WKH2PO4, 发酵温度^_32°C，发酵时间60-70h ；
(2)发酵结束后，升温至50-52°C，水解4- ，然后将发酵产物干燥至含水量小于8%，粉碎，过80目筛，得富含活性多肽的饲料制品。优选地，所述的一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，其中所述的黑曲霉 (Aspergillus niger, ACCC30787)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，28-32 0C、200r/min条件下振荡培养32_40h ；以重量份计，所述的液态活化培养基的配方为=NaNO3 0. 2 份，K2HPO4 0. 1 份，KCl 0. 05 份，MgSO4 0. 05 份，FeSO4 0. 001份，蔗糖3.0份，蒸馏水100份，自然PH值。优选地，所述的一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，其中所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, ACCC01746)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，33-35°C,200r/min条件下振荡培养；以重量份计，所述的液态活化培养基的配方为葡萄糖0.2份，NaCl 0.5份，酵母膏0.5份，蛋白胨1份，蒸馏水 100 份，pH7. 0。通过动物试验研究发现，利用上述方法制备的大豆活性多肽制品在提高仔猪生产性能方面具有显著的作用。因此，本发明的第二个目的在于提供一种产品新用途，即利用上述方法制备的活性多肽制品在制备动物饲料中的应用。优选地，上述方法制备的活性多肽制品在制备仔猪饲料中的应用。本发明采用分步发酵的方法，依据发酵过程中微生物生长代谢产生蛋白酶的性质和蛋白酶水解的基本性质，对大豆肽的生产工艺进行优化，使得固态发酵的每个阶段达到各自的最适培养条件，这样的固态发酵过程既有利于高活性蛋白酶的生成，又有利于蛋白酶作用于底物蛋白生成大豆肽，从而达到缩短发酵时间、提高大豆肽转化率的目的，为大豆肽的开发应用提供生产路线。另外，利用本发明的方法制备的大豆活性多肽制品基本不含抗营养因子，分子量小，易吸收，对断奶仔猪生产性能有较为显著的促进作用。
具体实施例方式以下是本发明的富含活性多肽制品的具体制备例和应用例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。实施例1活性多肽制品的制备
(1)将豆粕、麸皮和水按1 :0. 18 1. 5的重量比配制成固态发酵培养基，灭菌，冷却， 以种子液占固体发酵培养基干重质量百分比计，接种活化的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)种子液 8. 5%、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, ACCCOl746)种子液 1. 4%，并在以下条件下发酵培养外加占固体发酵培养基干重质量百分比为1. 2%的KH2PO4,发酵温度30°C，发酵时间65h;
其中，黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787，中国农业微生物菌种保藏管理中心提供)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，30°C、200r/min条件下振荡培养32_40h ；斜面培养基配方NaN03 0. 2g, K2HP04 0. lg, KCl 0. 05g，MgS04 0. 05g, FeS04 0. OOlg，蔗糖 3. 0g，蒸馏水 lOOmL，琼脂 1. 5 2. 0g，121°C，灭菌 20min ；液态活化培养基的配方为=NaNO3 0. 2g，K2HPO4 0. lg, KCl 0. 05g, MgSO4 0. 05g, FeSO4 0. 001g，蔗糖 3. 0g，蒸馏水 100ml,自然 pH 值，121°C，灭菌 20min。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is，ACCCO1746，中国农业微生物菌种保藏管理中心提供)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，330C、 200r/min条件下振荡培养观-301!；斜面培养基配方蛋白胨lg，牛肉提取物0. 3g，NaCl 0. 5g，琼脂2. 0g，蒸馏水100ml，ρΗ7· 0，121°C，灭菌20min ；。液态活化培养基的配方为葡萄糖 0. 2g，NaCl 0. 5g，酵母膏 0. 5g，蛋白胨 lg，蒸馏水 100ml，ρΗ7· 0，121 °C，灭菌 20min。(2)发酵结束后，升温至50°C，水解4h，然后将发酵产物干燥至含水量小于8%，粉碎，过80目筛，得富含活性多肽的饲料制品。实施例2活性多肽制品对仔猪生产性能的影响试验
试验选用观日龄断奶、平均体重7 士 0. Ikg的长白猪($ )X大白猪(早)二元杂交仔猪48头，按单因素试验设计原则，设3个处理组(参见表1 )，每个处理4个重复，每个重复 4头猪(公母各半)，在预饲3天后，进行为期5周的试验。表1试验分组与饲粮配制
权利要求
1.一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，包括如下步骤(1)将豆粕、麸皮和水按1:0. 15-0. 2 1. 4-1. 6的重量比配制成固态发酵培养基，灭菌，冷却，以种子液占固体发酵培养基干重质量百分比计，接种活化的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)种子液 8. 5%、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, ACCCO1746)种子液 1. 4%，并在以下条件下发酵培养外加占固体发酵培养基干重质量百分比为1. ^1WKH2PO4, 发酵温度^_32°C，发酵时间60-70h ；(2)发酵结束后，升温至50-52°C，水解4- ，然后将发酵产物干燥至含水量小于8%，粉碎，过80目筛，得富含活性多肽的饲料制品。
2.根据权利要求1所述的一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，其特征在于 所述的黑曲霉(Aspergillus niger, ACCC30787)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，28-32°C、200r/min条件下振荡培养32_40h;以重量份计，所述的液态活化培养基的配方为=NaNO3 0.2份，K2HPO4 0.1份，KCl 0.05份，MgSO4 0. 05 份，FeSO4 0.001份，蔗糖3.0份，蒸馏水100份，自然pH值。
3.根据权利要求1所述的一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法，其特征在于 所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis, ACCC01746)种子液按如下方法制备将斜面菌种转接到液态活化培养基中，置于摇床中，33-35°C、200r/min条件下振荡培养；以重量份计，所述的液态活化培养基的配方为葡萄糖0.2份，NaCl 0.5份，酵母膏0.5份，蛋白胨1份，蒸馏水100份，pH7. 0。
4.根据权利要求1-3任一项所述方法制备的活性多肽制品在制备动物饲料中的应用。
5.根据权利要求1-3任一项所述方法制备的活性多肽制品在制备仔猪饲料中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种固态发酵生产富含活性多肽制品的方法及应用，该方法以豆粕、麸皮为原料配制固态发酵培养基，经灭菌，冷却后接种活化的黑曲霉、枯草芽孢杆菌种子液，外加KH2PO4后发酵培养，发酵温度28-32℃，时间60-70h，发酵结束后，升温至50-52℃水解，然后将发酵产物干燥至含水量小于8%，粉碎，过80目筛，得富含活性多肽的饲料制品。利用本发明的方法制备的大豆活性多肽制品基本不含抗营养因子，分子量小，易吸收，对断奶仔猪生产性能有较为显著的促进作用。
文档编号A23K1/16GK102550874SQ20121001565
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月18日 优先权日2012年1月18日
发明者吴雷, 张丽琍, 张超, 祁斌 申请人:安徽燕之坊食品有限公司