专利名称：防治番茄黄化曲叶病毒病的生防菌株bf6及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于农业微生物领域，涉及防治番茄黄化曲叶病毒病的生防菌株BF6及其应用。
背景技术：
番爺黄化曲叶病毒病由双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)的番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)引起。TYLCV最早于1939年在以色列约旦河一带被发现，并于1964年被正式命名。在之后的30年间，该病毒迅速扩散到中东、地中海沿岸、非洲、欧洲、美洲、亚洲以及澳大利亚等众多国家和地区。与其他病毒病相比，番茄黄化曲叶病毒病具有变异速度快 、扩展迅速、危害性强、治疗难度大的特点，被称为植物的“癌症”，是番爺生产上的一种毁灭性病害。自20世纪90年代起，在我国云南、广西、广东、海南等地的烟草、番茄和南瓜等多种作物上相继发生。近年来，该病在我国已逐步由南向北急速蔓延。现在除湖南，青海，黑龙江，甘肃等少数省份没有发现该病毒病外，其余各地均有发生，给当地番茄生产造成了极其严重的损失。据不完全统计，目前我国番茄黄化曲叶病毒病的年发生面积超过6.7万hm2，经济损失超过20亿元。生产中主要采用农业措施和化学防治等方法加以防治，成本高、效果不够理想，甚至给环境来负面影响。培育抗病品虽然是防治番茄黄化曲叶病毒病的最好途径，但是由于番茄黄化曲叶病毒病的抗性遗传较复杂，加上具有商业价值的抗性材料有限，很难选育出抗性稳定的育种品系。而且现有抗病品种大部分具有地域性，不容易大范围推广。综上所述，开发新的、更为高效和安全的微生物制剂控制番茄黄化曲叶病毒病的发生是提高社会生产总量的需要，同时更是农业安全及可持续发展的需要。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供防治番茄黄化曲叶病毒病的生防菌株BF6。本发明的另一目的是提供该菌株制备的菌剂。本发明的又一目的是提供该菌株的应用。本发明的目的可通过如下技术方案实现:一种防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6，经鉴定该菌属于假单胞菌(Pseudomonas sp.),2013年I月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCC N0.7238。用所述的防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6制备的生防菌剂。所述的生防菌剂的制备方法:将所述的防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6在LB培养液中30°C 200rpm振荡培养24h，然后6000rpm离心lOmin，用灭菌水进行稀释制成菌剂，成品菌剂中活菌总浓度为IX IO9-1X 101(lCFU/mL。
当然，利用所述的防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6制备生防菌剂并不限于以上方法。凡是能够大量培养BF6，且保持其抗番茄黄化曲叶病毒活性的方法均可用于制备本发明请求保护的生防菌剂。所述生防菌株BF6在防治番茄黄化曲叶病毒病及增产方面的应用。所述生防菌剂在防治番茄黄化曲叶病毒病及增产方面的应用。有益效果:本发明是专门针对番茄黄化曲叶病毒病开发的生防制剂。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于番茄的绿色无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且减少化学药剂的残留，利国利民。温室实验表明:假单胞菌BF6防治番茄黄化曲叶病毒病效果显著，可以达59.51%。同时大田试验结果显示，生防菌剂BF6能够显著降低番茄黄化曲叶病毒病的病害严重度，防效在50.79%-53.72%之间，该菌剂对番茄的增产效果在28%以上。生物样品保藏信息BF6,假单胞菌Pseudomonas sp.,于2013年I月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC N0.7238。
具体实施例方式实施例1筛选方法:假单胞菌BF6由扬州市高邮市高邮镇番茄大棚内番茄根围土分离得至|J。用软毛刷轻轻刷取附着在番茄根表的土壤，称取3g加入27ml灭菌的0.85%NaCl中，180rmp摇床振荡0.5h，静置5min，得到10_1稀释液，吸取上清液0.1mL依次稀释，取10_4、10_5、10_6三个梯度的稀释液各0.1mL涂于LB平板上，28° C培养48h，挑取单菌落接种到新鲜LB固体培养基，经反复转接得到纯化菌株。将纯化后的菌株用40%甘油保存于-70° C超低温冰箱中。鉴定方法:通过形态特征，生理生化实验和16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定。形态学特征:革兰氏阴性杆菌，不产芽孢，菌落光滑，无荚膜，有端鞭毛。主要生理生化特征: 表I
权利要求
1.一种防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6，经鉴定该菌属于假单胞菌(Pseudomonas sp.),2013年I月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCC N0.7238。
2.用权利要求1所述的防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6制备的生防菌剂。
3.权利要求2所述的生防菌剂的制备方法，其特征在于: 将权利要求1所述的防治番茄黄化曲叶病毒病生防菌株BF6在LB培养液中300C 200rpm振荡培养24h，然后6000rpm离心lOmin，用灭菌水进行稀释制成菌剂，成品菌剂中活菌总浓度为I X IO9-1 X 101QCFU/mL。
4.权利要求1所述生防菌株BF6在防治番茄黄化曲叶病毒病及增产方面的应用。
5.权利要求2所述生防菌剂在防治番茄黄化曲叶病毒病及增产方面的应用。
全文摘要
本发明属于农业微生物领域，涉及防治番茄黄化曲叶病毒病的生防菌株BF6及其应用。生防菌株BF6，经鉴定该菌属于假单胞菌(Pseudomonas sp.)，2013年1月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.7238。该菌株防治番茄黄化曲叶病毒病效果显著，可以达59.51%。同时大田试验结果显示，生防菌剂BF6能够显著降低番茄黄化曲叶病毒病的病害严重度，防效在50.79%-53.72%之间，该菌剂对番茄的增产效果在28%以上。因此，该菌株及尤其制备的菌剂可在防治番茄黄化曲叶病毒病及增产方面应用。
文档编号A01P1/00GK103215203SQ20131009748
公开日2013年7月24日 申请日期2013年3月25日 优先权日2013年3月25日
发明者刘红霞, 郭坚华, 丁雪玲 申请人:南京农业大学