一种转基因抗虫棉抗虫性快速检测方法
【专利摘要】一种转基因抗虫棉抗虫性快速检测方法，其特征在于：待测转基因抗虫棉种子经过催芽后，播种于培养瓶中，待棉花植株生长至20天时，打开瓶盖将棉铃虫1龄幼虫接种于棉花植株上，然后观测棉铃虫幼虫死亡率；评价转基因抗虫棉的抗虫性：棉铃虫幼虫死亡率大于95％为高抗品种，死亡率高于85％，但低于95％为中抗品种，死亡率高于40％，但低于85％为低抗品种，死亡率低于40％的棉花品种为非抗虫棉花品种。与现有同类检测方法相比，本发明检测速度快，成本低，方法简单，重复性好，准确率高。
【专利说明】一种转基因抗虫棉抗虫性快速检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种转基因抗虫棉抗虫性快速检测方法，具体来说，涉及一种用棉花幼苗快速检测转基因抗虫棉抗虫性的方法。
【背景技术】
[0002]目前关于转基因抗虫棉抗虫性的检测方法主要有以下几种:(1)笼罩接虫试验法:把棉铃虫接种在笼罩内的棉花植株上，观测棉铃虫残虫量、蕾铃受害率和落卵量等指标；(2)田间鉴定法:是将受试棉花材料种于田间，利用自然条件感虫鉴定。(3)室内鉴定法:在虫害危害期将可能危害的棉花器官样品取回室内，经处理后接种棉铃虫，观测虫害数量级危害程度等。
[0003]上述评价转基因棉抗虫性的方法主要存在以下缺点:(1)测定周期过长，一般都需要测定不同生育期、不同棉铃虫虫期棉花虫害发生情况等，需要数月之久；(2)由于棉花植株处于室外，环境条件不可控，试验重复性差。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于提供一种快速、准确的转基因抗虫棉抗虫性测定方法，其包括将待测转基因抗虫棉种子经过催芽后，播种于培养瓶中，待棉花植株生长数天，打开瓶盖将棉铃虫I龄幼虫接种于棉花植株上,然后观测棉铃虫幼虫死亡率,评价转基因抗虫棉的抗虫性。
[0005]本方法可以包括:
[0006](1)每品种待测棉花取脱绒非包衣种子120粒，用10% (v/v) NaClO对种子消毒20分钟，然后用清水清洗种子5遍，放入3个培养皿中，每个培养皿中放入40粒，然后加水，在培养箱中25°C暗培养3天；
[0007](2)配置琼脂营养液，按照1000ml水溶解硝酸铵(NH4NO3) lg、磷酸二氢钾(KH2PO4) Sg、琼脂粉3g的比例，配置琼脂营养液，待融化后的琼脂营养液温度降至50°C左右时，倒入透明培养瓶中(内径8cm，高15cm)，每个培养瓶中倒入250ml琼脂培养液，待琼脂培养液凝固后盖上培养瓶的盖子；
[0008](3)3天后，挑选大小一致的棉花种子，置于培养瓶中，每瓶放置3粒种子，盖上盖子，放入光照培养箱中，光暗比为14: 10，温度比为28: 22;
[0009](4) 5天后，选择长势一致的棉花幼苗，每个培养瓶间苗至1株；
[0010](5) 20天后，每个培养瓶中接5头I日龄棉铃虫幼虫，并继续在光照培养箱中培养，光暗比为14: 10，温度比为28: 22;
[0011](6) 3天后，统计培养瓶中棉铃虫的存活率，计算死亡率。
[0012]应用本发明的检测方法对转基因抗虫棉进行检测，具有以下优点:
[0013](I)检测周期短，一般需要30天左右。与笼罩接虫试验法和田间鉴定法相比周期缩短30天至数月。[0014](2)重复性好，本发明的检测条件均为控制条件，可重复检测，结果一致性好。
[0015](3)准确性高，对20多个转基因抗虫棉和常规棉进行验证试验，准确率为100%。
[0016](4)检测成本低廉，本发明的检测方法不需要土壤种植、不需要长期管理，省去了土地租赁和田间管理成本，同时试验本身只需要购买培养瓶，琼脂等耗材，其中培养瓶可重复使用，其他用材与常规方法基本一致，因此，大大降低了检测成本。
【具体实施方式】
[0017](1)分别取待测棉A、B、C、D、E的脱绒非包衣种子120粒种子，用10% (v/v) NaClO对种子消毒20分钟，然后用清水清洗种子5遍，放入3个培养皿中，每个培养皿中放入40粒，然后加水，在培养箱中25°C暗培养3天；
[0018](2)配置琼脂营养液，按照1000ml水溶解硝酸铵(NH4NO3) lg、磷酸二氢钾(KH2PO4) Sg、琼脂粉3g的比例，配置琼脂营养液，待融化后的琼脂营养液温度降至50°C左右时，倒入透明培养瓶中(内径8cm，高15cm)，每个培养瓶中倒入250ml琼脂培养液，待琼脂培养液凝固后盖上培养瓶的盖子；
[0019](3) 3天后，挑选大小一致的棉花种子，置于培养瓶中，每瓶放置3粒种子，盖上盖子，放入光照培养箱中，光暗比为14: 10，温度比为28: 22;
[0020](4) 5天后，选择长势一致的棉花幼苗，每个培养瓶间苗至I株；
[0021](5) 20天后，每个培养瓶中接5头I日龄棉铃虫幼虫，并继续在光照培养箱中培养，光暗比为14: 10，温度比为28: 22;
[0022](6) 3天后，统计培养瓶中棉铃虫的存活率，计算死亡率，结果显示待测棉A、B、C、D、E的棉铃虫死亡率分别为97 %、98 %、28 %、89 %、67 %，因此待测棉A、B为高抗品种，待测棉C为非抗虫品种，待测棉D为中抗品种，待测棉E为低抗品种。
[0023]待测棉A、B实际均为中棉所45，为转基因抗虫棉高抗品种，待测棉C实际为中棉所49，为非转基因抗虫棉，待测棉D为中棉所45(90% )+中棉所(10% )混合样品，待测棉E为中棉所45(70%) +中棉所(30%)混合样品，待测棉花品种均由中国农业科学院棉花研究所提供。因此，本发明的试验结果与实际相符。
【权利要求】
1.一种转基因抗虫棉抗虫性快速检测方法，其特征在于将待测转基因抗虫棉种子经过催芽后，播种于培养瓶中，培养20天后，将棉铃虫I龄幼虫接种于棉花植株上，然后观测棉铃虫幼虫死亡率,评价转基因抗虫棉的抗虫性。
2.如权利要求1所述的检测方法，特征是该方法包括: (1)每品种待测棉花取种子多粒，然后催芽； (2)配置琼脂营养液，倒入培养瓶中，备用； (3)取露白的棉花种子置于培养瓶中，放置于光照培养箱中； (4)培养一段时间后,接种棉铃虫幼虫于培养瓶中，继续在光照培养箱中培养； (5)几天后，统计所述培养瓶中棉铃虫的存活数量，计算死亡率，并判别该种棉花的抗虫性。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征是该方法包括: (1)每品种待测棉花取脱绒非包衣种子120粒，用10%(v/v) NaClO对种子消毒20分钟，然后用清水清洗种子5遍，放入3个培养皿中，每个培养皿中放入40粒，然后加水，在培养箱中25 °C暗培养3天；
(2)配置琼脂营养液，按照1000ml水溶解硝酸铵(NH4NO3)lg、磷酸二氢钾(KH2PO4) 8g、琼脂粉3g的比例，配置琼脂营养液，待融化后的琼脂营养液温度降至50°C左右时，倒入透明培养瓶中(内径8cm，高15cm)，每个培养瓶中倒入250ml琼脂培养液，待琼脂培养液凝固后盖上培养瓶的盖子； (3)3天后，挑选大小一致的棉花种子，置于培养瓶中，每瓶放置3粒种子，盖上盖子，放入光照培养箱中，光暗比为14: 10，温度比为28: 22; (4)5天后，选择长势一致的棉花幼苗，每个培养瓶间苗至I株； (5)20天后，每个培养瓶中接5头I日龄棉铃虫幼虫，并继续在光照培养箱中培养，光暗比为14: 10，温度比为28: 22; (6)3天后，统计培养瓶中棉铃虫的存活率，计算死亡率。
【文档编号】A01G31/00GK103907518SQ201410044659
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年1月28日 优先权日:2014年1月28日
【发明者】赵建宁, 杨殿林, 修伟明, 李刚, 刘红梅, 王慧 申请人:农业部环境保护科研监测所