一种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥及其制备方法和应用，所述药肥含有以下重量份的组分：HR生防菌素菌剂55～85份、聚谷氨酸10～30份、植物细胞坚固素5～15份；所述HR生防菌素菌剂中含有枯草芽孢杆菌-w3，有效活菌数为7.0～9.0×109cfu/g。本发明所述药肥对水稻稻瘟病、纹枯病等有很好的生物防治效果；同时对水稻有显著的促生作用，能增加水稻的有效穗数，提高结实率和千粒重，能显著提高蔬菜产量和改善品质。
【专利说明】一种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥及其制备方法和 应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物药肥领域，具体地说，涉及一种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶 性药肥及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 稻癌病（Pyriculariagrisea)是世界各水稻产区广泛分布的重要病害。在我国 南北广大稻区均有发生，长期以来，我国大多数稻区主要使用稻瘟灵（isoprothiolane)、三 环唑（tricylazole)等杀菌剂防治，大面积长期使用杀菌剂易导致稻癌病菌产生抗药性， 并造成环境污染和生态平衡的破坏。因此，植物病害的生物防治被认为是具有发展潜力的 重要防治方法。国内外许多学者从土壤和水稻各组织中分离筛选拮抗菌株防治稻瘟病，而 从资源丰富，与作物具有相似生长环境的杂草中分尚的却很少。
【发明内容】
[0003] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种含有强拮抗稻瘟病菌 株的水溶性药肥及其制备方法和应用。
[0004] 为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
[0005] -种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥，所述药肥含有以下重量份的组分：HR 生防菌素菌剂55?85份、聚谷氨酸10?30份、植物细胞坚固素5?15份；
[0006] 其中，所述HR生防菌素菌剂中含有枯草芽孢杆菌_w3,有效活菌数为7. 0? 9. 0X109cfu/g。
[0007] 其中，聚谷氨酸（Y-PGA)又叫纳豆菌胶或多聚谷氨酸，英文名：POLY-L-GLUTAMIC ACID2' 000-15' 000,它是一种水溶性，生物降解，不含毒性，使用微生物发酵法制得的生 物高分子。Y-PGA聚谷氨酸是一种有粘性的物质，在"纳豆"一发酵豆中被首次发现。纳 豆的成分是：水分61. 8 %、粗蛋白19. 26%、粗脂肪8. 17 %、碳水化合物6.09的％、粗纤 维2. 2%、灰分1.86%。Y-PGA聚谷氨酸是一种特殊的阴离子自然聚合物，是以a-胺基 (a-amino)和羧基（Y-caboxyl)之间经酰胺键结（amidelinkage)所构成的同型聚 酰胺（homo-polyamide)y-PGA的分子量从5万到2百万道尔顿不等。y-PGA是极佳的植 物增产营养素和植物表面活性剂，Y -PGA具有的超强亲水性与保水能力、抗病及抗逆境能 力，能将孢子迅速有效地粘附在植物体表，能整合植物营养、土壤中的水活成份，可增强抵 抗由水、土传播的植物病原所引起的症状，促进增产，提高品质。
[0008] 进一步地，所述枯草芽孢杆菌_w3是从稻癌病感病水稻田的稗子植株中分尚、筛 选、培育而成的。
[0009] 进一步地，所述HR生防菌素菌剂是由枯草芽孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源 表面活性剂和膨润土按5?7:0. 5?1. 5:0. 5?1. 5:1?3的重量比例混合配制而成。
[0010] 其中，所述酶活物质是由蛋白粉和活性酶按300?100:1的质量比例组成，所述活 性酶是从芸豆青荚中提取的活性酶。
[0011] 其中，所述植物源表面活性剂，是采用芝麻枯饼粉碎后，用3倍重量的清水浸泡 72h所得的上清液，经过滤后所得的浸提物。
[0012] 进一步地，所述植物细胞坚固素的主要成分为粉粒径为30?40纳米的Si02。其 为棕黄色粉末，具有纯度高、粒径小、分布均匀、比表面大、高表面活性等特点，24小时吸收 率达90%以上，在水稻生长需硅高峰期能够快速补充硅素。作物吸收硅后，有利于促进光合 作用和有机物积累，增加茎杆的机械强度，抑制叶片的水分蒸腾作用，并在植株体内和茎叶 表面形成一种较坚硬的硅化细胞，显著提高作物的抗虫抗病、抗倒伏、抗旱、抗低温等抗逆 能力，减少各种病虫害的发生，改善农产品品质，增加产量。
[0013] 本领域技术人员可以通过选择合适的辅料制备出本领域常规的药肥剂型，为了更 好的发挥杀菌效果，本发明优选所述药肥的剂型为水剂、颗粒剂或粉状剂。
[0014] 本发明还提供了前述药肥的制备方法，具体为：
[0015] 1、枯草芽孢杆菌-W3的分离与筛选：
[0016] 采集稻癌病感病水稻田的稗子（Echinochloacrusgalli)植株。
[0017] 将取回的稗子洗净称取2g，并剪断成长约2?3mm片段，用无菌水漂洗3?5次 后，将叶、茎和根分别置于盛有18mL无菌水的100mL三角瓶中，在摇床上以115r/min振荡 lOmin，即成KT1菌悬液。
[0018]然后用无菌水稀释成1(T2,1(T3,1(T4,1(T5,1(T6,10-7,1(T8的菌悬液，分别取1(T2， 10_3,10_4,10_5的菌悬液涂布于高氏一号培养基（可溶性淀粉20g，NaCl0. 5g，KN03lg，K2HP04 ? 3H20 0? 5g，MgS04. 7H20 0? 5g，FeS04 ? 7H20 0? 01g，琼脂 15 ?25g，水 1000ml，pH 7. 4?7. 6)和1(T5,1(T6,1(T7,1(T8的菌悬液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上（牛肉膏3. 0g， 蛋白胨10. 0g，NaCl5. 0g，琼脂15-25g，水1000ml，pH7. 4-7. 6)，每稀释度重复3次，置于 25?30°C恒温箱中培养2?4d，待菌落长出后，挑取形态、色泽、大小不同的单菌落在PDA 平板上重新培养纯化以作为参试菌株。
[0019] 采用抑孢子萌发法进行菌株初筛。将稻瘟病菌接种到酵母淀粉斜面培养基上，待 菌丝长满后，加入1. 5mL的灭菌水并轻轻刮菌丝，取菌悬液接种到盛有产孢培养基（RCA， 玉米粉稻杆琼脂培养基：玉米粉1〇〇?150g，稻杆粉100?150,琼脂15?20g，蒸馏水 lOOOmL)的培养皿上，涂布均匀后放置在28°C恒温箱中培养，待平板上菌丝长满后（约 7d)，在无菌条件下刮除平板上菌丝，后置于光照下培养36h(室温25?30°C)，等到大量产 孢（约3?4d)后，每皿用5mL蒸馏水洗下孢子，用无菌水配成浓度为低倍镜（16X10)下 每视野约60?100个分生孢子，制备成稻瘟病菌分生孢子悬浮液；同时将于28°C下摇床振 荡培养5d后的参试菌株培养物于8 000r/min离心8?10min，然后吸取上清液置于4°C冰 箱保存待测定。将参试菌株培养物上清液和稻瘟病菌分生孢子悬浮液各1滴于载玻片上， 对照用稻瘟病菌分生孢子悬浮液加1滴无菌水，置培养皿内（滤纸保湿）于28°C恒温箱内 避光培养，24h后观察结果。重复3次。
[0020] 采用平板对峙法进一步拮抗菌株复筛。在PDA平板中心用打孔器（直径5_)接 种已培养好的稻瘟病菌丝块，放置于28°C恒温箱内培养20h后，在平板的4个角点（距中心 2cm)接种拮抗菌株，于28 °C恒温箱中培养4?6d后观察，并测量各拮抗菌株菌落边缘与稻 瘟病菌落边缘之间的抑菌距离，筛选出拮抗作用明显且生长较快的菌株进行进一步的筛选 试验，筛选出一株高抗稻瘟病的枯草芽孢杆菌菌株，命名为枯草芽孢杆菌-W3。
[0021] 2、枯草芽孢杆菌-W3孢子粉的制备：枯草芽孢杆菌-W3菌株经发酵培养后，将发酵 液浓缩干燥制备成孢子粉；
[0022] 3、将制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉与酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土按 5?7:0. 5?1. 5:0. 5?1. 5:1?3的重量比例混合配制得到HR生防菌素菌剂；
[0023] 4、按重量比将HR生防菌素菌剂、聚谷氨酸和植物细胞坚固素充分搅拌混匀，即得 含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
[0024] 进一步地，所述枯草芽孢杆菌-W3孢子粉的制备方法为：
[0025] 1)斜面培养：将枯草芽孢杆菌-W3菌株在无菌条件下接种于斜面培养基上，在 29 ± 1 °C条件下培养36?48h;
[0026] 2)摇床培养：将步骤1)培养得到的菌种接种于液体培养基，在pH6. 5?7. 0、温度 为30±2°C条件下，140?160r/min摇床培养36?48h;
[0027] 3)发酵罐培养：将步骤2)培养得到的菌种接种于发酵罐培养基，在pH7.5?8.0、 罐压0. 5kg、温度为30±2°C、通风量1:0. 8?1. 1条件下，至菌数大于1. 0?1. 2X101(ymL 时下罐，得到发酵液；
[0028] 4)将发酵液经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌-W3孢子粉。
[0029] 本发明还提供了前述药肥在防治稻瘟病病害中的应用。尤其是应用于防治由稻 梨孢属真菌、立枯丝核菌、镰刀菌、灰葡萄孢菌、黑根霉等病原菌引起的植物病害，包括稻瘟 病、水稻纹枯病、灰霉病等。
[0030] 作为优选，所述药肥单独使用，用量为15kg/hm2。
[0031] 本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥可在多种作物地上部喷施，也可进行 土壤消毒或者浸种处理。本发明所述的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥其中的HR生防 菌素菌剂能迅速粘附在植物表面定植生长并形成一层"生防膜"，以防止植物表面病原菌的 侵染，并在与病原菌互作和重寄生过程中产生抗生素和植物生长等物质，能显著预防、拮抗 或直接杀死农作物多种病害。其中加入的植物细胞坚固素具有坚固植物细胞璧组织，增强 植物表皮直接抵抗病原菌及虫害的侵入能力，促进农作物健康生长，实现少用或不用农药 用，减少环境污染，从而提高产量，改善品质。
[0032] 本发明的有益效果在于：
[0033] 1、本发明的枯草芽孢杆菌-W3通过叶面喷施能迅速在植物地上部分定植生长并 形成"生防膜"，直接对稻瘟病病菌产生的阻隔、拮抗及杀菌作用更强；枯草芽孢杆菌-W3自 生产生的衍生物，能增强该发明产品的蛋白酶活性，从而进一步提高拮抗农作物病原菌的 能力，起到生防促生作用。
[0034] 2、本发明产品有效活菌制剂的制备方法先进科学，简便可行，其孢子数含量高，存 活时间长。加入酶活物质、Y-PGA和植物源表面活性剂能使孢子粘附在植物表面迅速定植 生长。
[0035] 3、本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶肥技术处在国际领先前沿。优势作用在于 能粘附在植物叶面定植并迅速生长，抢占植物体表面位点，形成一个"生防膜"。在与病原 菌互作的过程中形成重寄生作用，分泌胞外酶溶解病原菌的细胞壁，穿透寄主菌丝，吸取营 养，进而将病原菌杀死。同时还分泌一部分抗生素和植物生长调节物质，促进作物健康生 长，增强植物的抗病能力。
[0036] 4、本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶肥是粉状或颗粒状或液体状剂型，完全能 溶于水。施用方法简便实用，适于设施农业或机械化操作，除叶面喷施外，也可做土壤消毒 处理，或者做浸种处理。
[0037] 5、本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥，除了直接提供作物所需营养外， 可以用来预防由稻梨孢属真菌、立枯丝核菌、镰刀菌、灰葡萄孢菌、黑根霉等病原菌引起的 植物病害，其主要有效成分为枯草芽孢杆菌-W3,在生产上应用效果好：用本发明的含强拮 抗稻瘟病菌株的水溶肥对种植水稻进行处理，通过不同生育期的农艺性状、经济性状、产 量和病害发展情况的考察，结果表明，本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶肥对水稻稻瘟 病、纹枯病等有很好的生物防治效果；同时对水稻有显著的促生作用，能增加水稻的有效穗 数，提高结实率和千粒重，能显著提高蔬菜产量和改善品质。
【具体实施方式】
[0038] 以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。
[0039] 实施例和实验例中相关成分：
[0040]酶活物质由蛋白粉与活性酶按300?100:1. 5?0. 5的质量比例组成。所用蛋白 粉含蛋白质50，水分％< 9.0，脂肪％< 2.0,细度100目筛上物< 1% ;活性酶中的纤 维素酶活> 42u/g，蛋白酶活> 55u/g。活性酶是用常规分离纯化法从芸豆青荚中提取：首 先将芸豆上等好的青荚进行植物组织细胞的破碎。采用磷酸缓冲液（Ph值5. 5?6. 5)按 照料液比0. 5?1. 5 :3?7混合于器皿中，得到的混合液进行过滤（过滤3?4次），除掉 固体杂质，得到酶的粗提取液。然后对得到的粗提取液55?58°C水浴加热，10分钟后取出 器皿，静置3?7分钟，器皿底部沉淀出芸豆青荚中含有固体杂质蛋白质，取上清液于另一 器皿中，用硫酸铵进行沉淀（pH值5. 5?6. 0)。最后用磷酸缓冲液（pH值5. 5?6. 5)对沉 淀溶解得到的酶液进行分离纯化。
[0041] 植物源表面活性剂制备方法为：将芝麻枯饼粉碎后，用3?5倍重量的清水浸泡 68?72h所得的上清液，经过滤后所得的浸提物。
[0042] 实施例1含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥
[0043] HR生防菌素菌剂中的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉的制备：
[0044] 1、斜面培养：将枯草芽孢杆菌-W3菌株在无菌条件下接种于斜面培养基上：葡萄 糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、水1000mL、琼脂15g，在30°C条件下培养48h;
[0045] 2、摇床培养：将步骤1培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基：玉米粉13g， 葡萄糖 5g，豆饼粉 20g，鱼粉 5g，CaC03 6g，（NH4)2S04lg，K2HP04 0.3g，MgS04 7H20 0.2g， MnS04 ?H20 0? 2g，水 1000ml，在pH6. 5、温度为 30°C条件下，160r/min摇床培养 36h;
[0046] 3、发酵罐培养：将步骤2培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基：玉米粉 26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2. 5kg、蛋白胨1. 7kg、加水至600kg，在 pH8. 0、罐压0. 5kg、温度为30°C、通风量1:0. 8条件下，培养56h后，菌数大于1. 0X1010/ mL，80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；
[0047] 4、将步骤3中得到的枯草芽孢杆菌-W3发酵液浓缩干燥制备成孢子粉。
[0048] 将上述制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土 按6:1:1:2的重量比例混合配制得到HR生防菌素菌剂。该HR生防菌素菌剂中含有效菌总 量彡 8. 0X109cfu/g。
[0049] 将所得HR生防菌素菌剂70份、Y-PGA20份、植物细胞坚固素10份组成充分搅拌 混匀，制备得到含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
[0050] 实施例2含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥
[0051] 与实施例1相比，区别在于本实施例含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥的组成 为：HR生防菌素菌剂55份、y-PGA30份、植物细胞坚固素15份。
[0052] 其中，HR生防菌素菌剂中的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉的制备：
[0053] 1、斜面培养：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在 29°C条件下培养48h;
[0054] 2、摇床培养：将上述步骤1培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在 pH6. 5、温度为29°C条件下，160r/min摇床培养36h;
[0055] 3、发酵罐培养：将上述步骤2培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在 pH8. 0、罐压0. 5kg、温度为30°C、通风量1:0. 8条件下，培养56h后，菌数大于1. 0XKT/mL， 80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；
[0056] 4、将步骤3中得到的枯草芽孢杆菌-W3发酵液浓缩干燥制备成孢子粉。
[0057] 各步骤的培养基同实施例1。
[0058] 将上述制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土 按5:1. 5:0. 5:3的重量比例混合配制得到HR生防菌素菌剂。该HR生防菌素菌剂中含有效 菌总量彡 7. 0X109cfu/g。
[0059] 将所得HR生防菌素菌剂55份、Y-PGA30份、植物细胞坚固素15份，充分混合，搅 拌混匀，制得本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
[0060] 实施例3含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥
[0061]与实施例1相比，区别在于本实施例含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥的组成 为：HR生防菌素菌剂85份、y-PGA10份、植物细胞坚固素5份。
[0062] 其中，HR生防菌素菌剂中的枯草芽孢杆菌-W3由以下步骤制得：
[0063] 1、斜面培养：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在 30°C条件下培养48h;
[0064]2、摇床培养：将上述步骤1培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在 pH6. 5、温度为29°C条件下，160r/min摇床培养48h;
[0065] 3、发酵罐培养：将上述步骤②培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在 pH7. 5、罐压0. 5kg、温度为30°C、通风量1:0. 8条件下，培养56h后，菌数大于1. 0XKT/mL， 80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；
[0066] 4、将步骤3中得到的枯草芽孢杆菌-W3发酵液浓缩干燥制备成孢子粉。
[0067] 各步骤的培养基同实施例1。
[0068] 将上述制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土 按7:0. 5:1.5:1的重量比例混合配制得到HR生防菌素菌剂。该HR生防菌素菌剂中含有效 菌总量彡 9. 0X109cfu/g。
[0069] 将所得HR生防菌素菌剂85份、Y-PGA10份、植物细胞坚固素5份，混合充分，搅 拌混匀，制得本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
[0070] 实施例4含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥
[0071] 与实施例3相比，区别仅在于本实施例含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥的组成 为：HR生防菌素菌剂78份、y-PGA15份、植物细胞坚固素7份。
[0072] 其中，上述HR生防菌素菌剂由以下步骤制得：
[0073] 1、斜面培养：将枯草芽孢杆菌13菌株在无菌条件下接种于斜面培养基上，在 30°C条件下培养48h;
[0074] 2、摇床培养：将上述步骤1培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基，在 pH6. 5、温度为29°C条件下，160r/min摇床培养42h;
[0075] 3、发酵罐培养：将上述步骤2培养的菌种在无菌条件下接种于发酵罐培养基，在 口118.0、罐压0.51^、温度为291：、通风量1 :1条件下，培养5611后，菌数大于1.0\10171^， 80%菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；
[0076] 4、将步骤3中得到的枯草芽孢杆菌-W3发酵液浓缩干燥制备成孢子粉。
[0077] 各步骤培养基同实施例1。
[0078] 将上述制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土 按6. 5:1. 2:0. 8:1. 5的重量比例混合配制得到HR生防菌素菌剂。该HR生防菌素菌剂中含 有效菌总量彡8. 5X109cfu/g。
[0079] 将所得HR生防菌素菌剂78份、Y-PGA15份、植物细胞坚固素7份，混合充分，搅 拌混匀，制得本发明的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
[0080] 为了进一步验证本发明所述的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥的优越性能，发 明人对此展开了一系列研究试验。
[0081] 实验例1含强拮抗稻瘟病菌株水溶性药肥防治稻瘟病效果试验
[0082]1试验目的
[0083] 为验证本发明实施例1的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥对水稻稻瘟病的防 治效果和最佳施用量，特设置本试验。
[0084] 2试验地基本情况
[0085] 2. 1试验地安排在湖南省郴州市苏仙区白露塘镇金田村，面积3. 5亩。地处低洼 地，常年积水，为水稻稻瘟病常发区。土壤为鸭屎泥粘重土，有机质含量3. 2%，pH值6. 5， 肥水条件一般。
[0086] 2. 2试验水稻品种为金优889水稻（湘审稻2004007)适宜湘南稻瘟病轻发区作早 稻种植，全生育期113d，于4月3日播种，4月28日移栽大田。移栽时底施碳酸氢铵40kg、 过磷酸f丐35kg。于6月23日施药。
[0087] 3供试药剂
[0088] 3. 1试验材料为本发明实施例1的含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥；对照药剂 为75%三环唑可湿性粉剂，浙江龙湾化工有限公司；
[0089] 3. 2喷雾器为3WBD-18A3型背负式手动喷雾器，台州市路桥区达远机械配件厂生 产。
[0090] 4、试验设计与安排
[0091] 4. 1试验设置5个处理，4次重复。处理1?3均用本发明实施例1的含强拮抗稻 瘟病菌株的水溶性药肥，施用量分别为7500g/hm2、15000g/hm2、22500g/hm2,兑水675kg/hm2 喷雾；处理4为75%三环唑可湿性粉剂，施药剂量为412.5§/111112，兑水6751^/11111 2;处理5对 照为清水675kg/hm2。各小区随机区组排列，小区面积33. 3m2,各小区之间筑有小埂。
[0092] 4. 2施用时间和次数：手动喷雾器喷雾，以混合液均匀喷湿叶片且欲滴未滴为度。 两次喷施分别于6月29日、7月8日进行，施用期间正值水稻始穗期和齐穗期。施用剂量为 675kg/hm2。6月10日用辛硫磷颗粒剂全面防治二化螟。
[0093] 5调查、记录和计算方法
[0094] 5. 1调查时间和次数：共调查了 3次，6月29日进行二次施用后防效调查。
[0095] 5. 2调查方法每个小区按对角线5点取样，每点调查50株，每株调查剑叶及剑叶 以下两片叶，统计各级病叶数。对调查的病叶进行分级。0级：无病。1级：叶片病斑少于5 个，长度小于1厘米。3级：叶片有病斑6?10个，部分病斑长度大于1厘米。5级：叶片 有病斑11?25个，部分病斑连成片，占叶面积的10%?25%。7级：叶片有病斑26个以 上，病斑连成片，占叶面积的26%?50%。9级：病斑连成片，占叶面积的50%以上或全叶 枯死。
[0096] 5. 3药效计算方法
[0097] 病情指数=E[各级病叶（穗）数X相对级数值]X100/调查总叶（穗）数X9
[0098]防治效果（％ ) = [1-(CK0XPT1/CK1XPT0)]X100
[0099] 上式中，CKO、CK1分别为空白对照区施用前、后病情指数，PTO、PT1分别为处理区 施用前、后病情指数。
[0100] 6结果与分析
[0101] 见表 1。
[0102] 表1含强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥防治稻瘟病效果（两次施用后）
【权利要求】
1. 一种含有强拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥，其特征在于，所述药肥含有以下重量份 的组分：HR生防菌素菌剂55?85份、聚谷氨酸10?30份、植物细胞坚固素5?15份； 所述HR生防菌素菌剂中含有枯草芽孢杆菌-?3,有效活菌数为7. 0?9. OX 109cfu/g。
2. 根据权利要求1所述的药肥，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌i3是从稻瘟病感病水 稻田的稗子植株中分尚、筛选、培育而成的。
3. 根据权利要求1或2所述的药肥，其特征在于，所述HR生防菌素菌剂是由枯草芽 孢杆菌-W3孢子粉、酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土按5?7:0. 5?1. 5:0. 5? 1. 5:1?3的重量比例混合配制而成。
4. 根据权利要求3所述的药肥，其特征在于，所述酶活物质是由蛋白粉和活性酶按 300?100:1. 5?0. 5的质量比例组成，所述活性酶是从芸豆青荚中提取的活性酶。
5. 根据权利要求3所述的药肥，其特征在于，所述植物源表面活性剂是由芝麻枯饼粉 碎后，用水浸泡得上清液，经过滤后所得的浸提物。
6. 根据权利要求3所述的药肥，其特征在于，所述植物细胞坚固素的主要成分为粉粒 径为30?40纳米的Si02。
7. 根据权利要求1?6任一项所述的药肥，其特征在于，所述药肥的剂型为水剂、颗粒 剂或粉状剂。
8. 权利要求1?7任一项所述药肥的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体为： 1) 枯草芽孢杆菌_W3的分尚与筛选： 取稻瘟病感病水稻田的稗子植株，制备菌悬液； 稀释菌悬液，涂布培养基培养菌落，挑取形态、色泽、大小不同的单菌落在PDA平板上 重新培养纯化以作为参试菌株； 经抑孢子萌发法和平板对峙法筛选出高抗稻瘟病的枯草芽孢杆菌-W3 ; 2) 枯草芽孢杆菌-W3孢子粉的制备：枯草芽孢杆菌-W3菌株经发酵培养后，将发酵液 浓缩干燥制备成孢子粉； 3) 将制得的枯草芽孢杆菌-W3孢子粉与酶活物质、植物源表面活性剂和膨润土按比例 混合配制得到HR生防菌素菌剂； 4) 将HR生防菌素菌剂、聚谷氨酸和植物细胞坚固素按重量份充分搅拌混匀，即得含强 拮抗稻瘟病菌株的水溶性药肥。
9. 权利要求1?7任一项所述药肥在防治稻瘟病病害中的应用。
10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药肥单独使用，用量为12?18kg/ hm2。
【文档编号】C05G3/00GK104355815SQ201410599105
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年10月30日 优先权日:2014年10月30日
【发明者】胡九洲, 孟三宏, 刘海涛, 唐毓杰 申请人:湖南原生生物科技股份有限公司