本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种蛹虫草的生产方法。
背景技术：
蛹虫草又名北冬虫夏草、北虫草，属于真菌门子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属，与冬虫夏草同属不同种，其化学成份和功效非常相似，其中含有虫草素、虫草多糖、虫草酸、腺苷等成份，具有增强免疫、调节内分泌、护肝保肺、增强性功能等营养保健功效和多种药用功效，可以作为冬虫夏草的替代品。
虫草素(Cordycepin)是蛹虫草产生的一种重要次生代谢产物，作为蛹虫草重要的生物活性成分，其化学结构为3′-脱氧腺苷，是由Cunningham首次从蛹虫草中发现的。由于虫草素具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等功效，市场需求越来越大，价格十分昂贵。目前，虫草素的化学合成存在诸多弊端，虫草素等核苷类物质的主要来源还是蛹虫草培养物，因此蛹虫草培养方法优化一直是蛹虫草研究中的热点。
虫草多糖是虫草体内含量最丰富、最重要的生物活性物质之一。实验证明，虫草多糖可提高人体免疫功能，升高白细胞，临床已用于治疗恶性肿瘤，大量医学实验证实，虫草多糖可活化巨噬细胞刺激抗体产生，提高人体免疫能力，改善呼吸系统，可使肾上腺重量、血浆皮质醇、醛固酮及肾上腺内胆固醇含量增加，有促进肾上腺的作用，抑制肿瘤生长，并具有抗肿瘤、抗辐射、降血糖和脂蛋白、止咳、化痰、润肺和延缓衰老等药理作用，此外,虫草多糖还能抗心律失常，抗心肌缺血，扩张外周血管，降压，降血脂，抑制血小板聚集。目前虫草多糖来源途径大致有以下几种：①从天然虫草子实体中提取；②从人工培养虫草子实体中提取；③从发酵培养的菌丝体和发酵液中提取，但是通过这几种办法取得的虫草多糖含量较低。
虫草酸(Cordycepic acid)是冬虫夏草和蛹虫草主要活性成分之一，它的化学分子式C7H12O6，为1,3,4,5-四羟基环已酸，即D-甘露糖醇。虫草酸能抑制各种病菌的成长，可预防与治疗脑血栓、脑出血、心肌梗塞、长期衰竭；虫草酸含量的高低是衡量虫草质量的主要标准之一，一般认为虫草酸含量高的虫草的药用价值高。
由于冬虫夏草对于生长环境的特殊要求和严格的寄生性等特点，使得野生冬虫夏草资源极其稀少，产量极为有限，同时由于其采收不易显得野生冬虫夏草十分珍贵，导致冬虫夏草价格昂贵，在冬虫夏草供不应求的情况下，与冬虫夏草齐名的蛹虫草也越来越受到人们的关注，因此，蛹虫草的开发应用具有极大的潜在市场，但是由于野生的蛹虫草中各营养成分较低，野生的蛹虫草也满足不了市场的需求，因此人工培养蛹虫草是解决野生虫草来源不足的良好途径，专利公开号为CN 103539498 A的中国专利申请公开了一种蛹虫草的生产方法，但是该生产方法的培养条件较为复杂，因此，寻找一种操作简单并且能够培养出品质较好的蛹虫草的方法成为目前亟待解决的问题。
技术实现要素：
鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种蛹虫草的生产方法，利用本方法生产的蛹虫草营养成分较高。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种蛹虫草的生产方法，包括如下步骤：
S1：菌种的培养：
选用野生蛹虫草，选其长势旺盛的菌株，纯化，分离，得到一代菌种；将该一代菌种接种入培养基中进行培养，形成液体菌种；其中所述培养基的配方如下：土豆200g，葡萄糖15g，玉米粉10g，蛋白胨20g，磷酸二氢钾3g，NaCl5g，水1000g；
S2：活体接菌：
将筛选出的蚕虫灭菌后，移入无菌室，并将其接入所述步骤S1形成的液体菌种中，观察蚕虫感染情况，待蚕虫全部感染后，将其移入培养室进行培养后，将虫体挖出，烘干，备用；
S3：灭火接菌
将步骤S2所得的虫体，等量装入多个玻璃瓶中，高温灭菌，移入无菌室，冷却至室温，再次接种入步骤S1所述的液体菌种中，放入培养室培养，长出所述蛹虫草，挖出，烘干，得到蛹虫草。
进一步地，其中在步骤S1中，所述菌种的培养具体包括：选用野生蛹虫草，取长势旺盛的野生菌株，用手术刀对其头部2mm处进行纵切以得到直径为1mm的内部组织，分装到含有液体培养液的试管中，待其菌株生长6-8天后，用接种针取其头部菌丝，放入试管中以完成纯化及分离，得到一代纯白蛹虫草菌株；将该一代纯白蛹虫草菌株接种入培养基中进行培养，形成液体菌种；其中所述长势旺盛的野生菌株为头部直径为2mm-4mm、直立、总长为4-7cm的菌株。
进一步地，其中在步骤S1中，所述一代纯白蛹虫草菌株的培养条件为：无菌，恒温25℃，空气湿度65％。
进一步地，其中在步骤S1中，所述培养基的制备步骤为：将土豆切成条，放入水中煮沸，过滤取其汁，然后将上述取得的土豆汁放入培养皿中，依次在培养皿中加入配方量的葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氢钾以及NaCl，混合均匀，以制成所述液体培养基；优选地，将所述土豆切成高度为3cm，长度和宽度均为2mm的条。
进一步地，其中在步骤S2中，所述活体接菌具体包括：将筛选出的蚕虫灭菌后，将该蚕虫于无菌室接入上述步骤S1形成的液体菌种中观察2-5天，待所有虫体长出乳白色菌丝时，蚕虫全部感染；之后将其移入培养室进行培养2-4个月后，将虫体挖出，烘干，备用。
进一步地，其中在步骤S2中，所述筛选得到的蚕虫为：1个月虫龄、长度5-7cm、活动灵活且生命力旺盛的蚕虫。
进一步地，其中在步骤S2中，所述全部感染的蚕虫的培养条件为：无菌，恒温25℃，空气湿度65％；所述烘干是均是在烘干机中进行的，烘干温度为80-60℃，烘干时间为24小时。
进一步地，其中在步骤S2中，所选蚕虫为桑蚕幼虫或玉米食心虫。
进一步地，其中在步骤S3中，所述灭火接菌具体包括：将步骤S2所得的虫体，等量装入多个玻璃瓶中，将该些玻璃瓶置于手提高压灭菌锅中进行灭菌，灭菌温度为120℃，时间为10-30min，之后移入无菌室，冷却至室温，再次接种入步骤S1所述的液体菌种中，置于培养室培养1-3个月，长出所述蛹虫草，待其长度为2-4cm时挖出，烘干，得到蛹虫草。
进一步地，其中在步骤S3中，所述高温灭菌的蚕虫的培养条件为：无菌，恒温25℃，空气湿度65％；所述烘干是在烘干机中进行的，烘干温度为80-60℃，烘干时间为24小时。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明所述的蛹虫草的生产方法，生产出来的蛹虫草较野生的蛹虫草、野生冬虫夏草具有有较高的虫草素、虫草多糖以及腺苷等营养成分；
2、本发明的培养基成分容易得到，配制方便，成本低廉，实际应用操作简单，易于推广。
具体实施方式
本发明提供了一种蛹虫草的生产方法，下面以具体实验案例为例来说明具体实施方式，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明中，未作相关说明的情况下，如本领域所公知的，为了避免杂菌污染，所进行的各种操作均在无菌的条件下进行，所用的各种工具和材料均为已经灭菌消毒；
本发明所述的蛹虫草的生产方法所用到的液体培养基，其制作方法为：取200g土豆切成细条(高度为3cm，长度和宽度均为2mm)，加入1000ml的水中，放入锅中煮沸15分钟，然后过滤取其汁，然后将上述取得的土豆汁放入培养皿中，依次在培养皿中加入15g葡萄糖、10g玉米粉、20g蛋白胨、3g磷酸二氢钾以及5g NaCl，混合均匀制成所述液体培养基，其中，玉米粉、土豆为市售产品，要求无结块无变质；土豆出芽变绿的不能使用；蛋白胨为生化试剂；葡萄糖、磷酸二氢钾、NaCl为化学纯以上级试剂；水为自来水等可饮用水；
本发明所述的野生蛹虫草选自东北长白山地区。
已完成纯化及分离，得到一代纯白蛹虫草菌株；将该一代纯白蛹虫草菌株接种入培养基中进行培养，形成液体菌种；其中所述长势旺盛的野生菌株为头部直径2mm-4mm、直立、总长为4-7cm的菌株。
实施例1
选取野生蛹虫草，选其头部直径为3mm、直立、总长约7cm，长势旺盛的野生菌株，在其头部2mm处，用手术刀纵切取直径1mm的内部组织，分装到含有10ml液体培养液的试管中，待其菌株生长7天后，用接种针取其头部菌丝，放入试管中以完成纯化及分离，得到一代纯白蛹虫草菌株；取两个上述一代纯白蛹虫草菌株，接入液体培养基中，进行培养，培养的条件为恒温25℃，空气湿度65％，形成液体菌种；同时选取选取150g，1个月虫龄、长度6cm、活动灵活且生命力旺盛的玉米食心虫作为母种，在无菌室灭菌后，接入上述液体菌种中，观察感染情况，4天后玉米食心虫虫体上全部长出乳白色菌丝(全部感染)，然后将感染后的培养基移入培养室，培养室恒温25℃，湿度65％，进行培养，培养4个月后将玉米食心虫的虫体挖出，在烘干机中进行烘干，烘干温度为70℃，烘干时间为24小时；然后将烘干后的玉米食心虫的虫体分成等量的10份，分别装入10个玻璃瓶中，在手提高压灭菌锅中125℃进行灭菌，20min后移入无菌室，然后将灭菌后的虫体从玻璃瓶中取出接入所述液体菌种中，放入培养室进行培养，培养室恒温25℃，空气湿度65％，3个月后长出3cm的蛹虫草，然后将该蛹虫草挖出，在在烘干机中进行烘干，烘干温度为80℃，烘干时间为24小时，烘干之后在超微粉碎机中进行粉碎，其粉碎的粒度为40mm，粉碎后即可做保健品或者入药。
实施例2
选取野生蛹虫草，选其头部直径为2.5mm、直立、总长约6cm，长势旺盛的野生菌株，在其头部2mm处，用手术刀纵切取直径1mm的内部组织，分装到含有10ml液体培养液的试管中，待其菌株生长8天后，用接种针取其头部菌丝，放入试管中以完成纯化及分离，得到一代纯白蛹虫草菌株；取上述1个一代纯白蛹虫草菌株，接入上述液体培养基中，进行培养，培养的条件为恒温25℃，空气湿度65％，形成液体菌种；同时选取100g，1个月虫龄、长度5cm、活动灵活且生命力旺盛的桑蚕幼虫作为母种，在无菌室灭菌后，接入上述液体菌种中，观察感染情况，3天后桑蚕幼虫虫体上全部长出乳白色菌丝(全部感染)，然后将感染后的培养基移入培养室，培养室恒温25℃，湿度65％，进行培养，培养3个月后将桑蚕幼虫的虫体挖出，在烘干机中进行烘干，烘干温度为70℃，烘干时间为24小时；然后将烘干后的桑蚕幼虫的虫体分成等量的8份，分别装入8个玻璃瓶中，在手提高压灭菌锅中125℃进行灭菌，30min后移入无菌室，然后将灭菌后的虫体从玻璃瓶中取出接入所述液体菌种中，放入培养室进行培养，培养室恒温25℃，空气湿度65％，2个月后长出4cm的蛹虫草，然后将该蛹虫草挖出，在烘干机中进行烘干，烘干温度为60℃，烘干时间为24小时，烘干之后在超微粉碎机中进行粉碎，其粉碎的粒度为50mm，粉碎后即可做保健品或者入药。
表1 实施例1及实施例2生产的蛹虫草中各成分的检测结果
表1的检测结果均来自于中科院的检测报告，其中虫草素采用高效液相色谱法、虫草多糖采用苯酚-浓硫酸法(紫外比色法)、虫草酸采用NASH(紫外比色法)、腺苷采用高效液相色谱法检测。
表2 本实施例1生产的蛹虫草与不同地区野生蛹虫草及冬虫夏草中各营养成分的对比
从表2可以看出，本实施例1所生产的蛹虫草中虫草素、虫草多糖以及腺苷的含量均高于广东野生蛹虫草、广东野生冬虫夏草及西藏野生冬虫夏草中虫草素、虫草多糖及腺苷的含量；本实施例1所生产的蛹虫草中的虫草酸的含量高于广东野生蛹虫草中虫草酸的含量，但是低于广东野生冬虫夏草、西藏野生冬虫夏草中虫草酸的含量。
最后应说明的是：以上所述的各实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或全部技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。