本发明属于植物组织培养
技术领域：
，具体涉及一种蒙古韭组培抑菌剂、蒙古韭组织培养基和蒙古韭组培方法。
背景技术：
：蒙古韭(alliummongolicumregel)属百合科葱属根茎组，别名为沙葱，为多年生草本旱生植物，分布于陕西、甘肃、宁夏、内蒙古、新疆和青海等6省(区)。蒙古韭富含人和动物所必需的微量元素、维生素和氨基酸等各种营养成分，不仅嫩叶、嫩花等器官营养丰富，风味独特，凉拌、炒食或腌制皆可食用，也是一种优等的饲用植物，适宜牛、羊、马和骆驼食用且均能增膘。此外，蒙古韭可入药，能开胃、消食和杀虫，主治消化不良、不思饮食、秃疮和青腿病等多种疾病，具有除瘴气排恶毒等重要的药理作用，被誉为“大漠野菜”、“沙原佳蔬”、“菜中灵芝”。因此，蒙古韭是一种营养价值和药用价值极高的野生绿色蔬菜，具有进一步开发利用的价值，产业生产的市场前景十分广阔。植物组织培养技术作为现代生物技术的重要领域之一，在农业生产领域和工厂化育苗方面应用广泛，对于植物优良种质资源保存、优良品种的快速繁殖等方面也发挥着重要的作用。在植物组织培养过程的各技术环节中，控制污染是影响植物生长的关键技术。影响污染的因素多种多样，如消毒时间以及消毒方法、培养基和器皿灭菌、操作人员、工作环境的要求和超净工作台的工作质量等都与污染密切相关，因此，使得污染问题十分复杂，也很难防治，成为限制组培产业化的重要原因之一。植物组培过程中的污染，又主要表现为培养基的污染，培养基中丰富的营养物质能够为细菌、真菌提供适宜的滋生环境。现有植物组织培养的培养基灭菌方法主要采用高压蒸汽灭菌方法，这种方法有灭菌彻底和不易污染的优点。但是，高压蒸汽灭菌存在以下缺点：设备较贵、消耗能源多，以及灭菌时间长；在高温蒸汽灭菌过程中，培养基内会发生一些化学反应，培养基的成分会伴随着发生一些变化，如在121℃、20min条件下，59％的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏；培养基的灭菌数量有限，生产成本较高等。目前，植物组培污染防治方面致力于研究能够有效抑菌且不影响培养基活性、操作简便的抑菌方法，在培养基中添加抗菌剂是降低细菌污染的有效途径，能够大大减少操作过程中，特别是内生菌带来的污染。常用抗生素、抗菌素、防腐剂在植物组培污染的防治方面有一定的作用，但现有的抗菌剂在抑制植物组培污染的同时，容易产生抑制组培植物生长、引发环境污染、引起组培微生物耐药性以及危害人畜安全等方面的问题。例如植物中抗生素的使用易产生抗药性，一旦停止使用，污染率又显著上升；另外，抗生素的长效使用容易对植物的生理生化特性产生影响，造成植物中抗生素的残留，影响植物的食用和药用价值。另一方面，抗菌剂针对不同植物的组培灭菌效果上存在很大差异。中国专利文献cn106035080a公开了一种沙葱再生苗和沙葱愈伤组织的获取方法，通过组织培养技术对蒙古韭进行繁殖，提高了对蒙古韭的发掘和应用力度。但上述文献中公开的组织培养技术仍为传统的植物组织培养，培养基以及培养器皿需要高压灭菌，并且整个操作过程需要在无菌环境下完成，导致整个植物组织培养过程灭菌成本高、操作繁琐，不利于实现蒙古韭的工业化育苗。技术实现要素：因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中蒙古韭组织培养过程中对无菌环境要求苛刻，灭菌成本高、植物组织培养过程操作繁琐，无法实现蒙古韭的工业化育苗；从而提供一种能够高效抑菌、安全环保，同时对蒙古韭生长有促进作用的蒙古韭组培抑菌剂。本发明提供了一种蒙古韭组培抑菌剂，所述蒙古韭组培抑菌剂由包括以下重量份的原料提取而成：砂韭44-50重量份、寻骨风8-14重量份和乌蕨8-20重量份。所述的蒙古韭组培抑菌剂，所述原料包括：砂韭48重量份、寻骨风10重量份和乌蕨14重量份。本发明提供了一种上述的蒙古韭组培抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：(1)按照选定重量份数分别称取砂韭、寻骨风和乌蕨，在45℃温度下烘干，然后将烘干后的植物粉碎，得到植物干粉；(2)向步骤(1)得到的粉末中加入蒸馏水,在58℃水浴回流提取三次，每次三小时，然后将三次提取得到的提取液合并；(3)将步骤(2)中合并后的提取液进行真空抽滤，抽滤后的滤液进行浓缩，得到水提浓缩液，即得所述的蒙古韭组培抑菌剂。本发明提供了一种蒙古韭组织培养基，所述蒙古韭组织培养基中添加所述的蒙古韭组培抑菌剂。所述的蒙古韭组织培养基，所述蒙古韭组织培养基为诱导培养基、增殖培养基或生根培养基。所述的蒙古韭组织培养基，所述诱导培养基为ms培养基中含有iaa、6-ba、蔗糖和蒙古韭组培抑菌剂；每升所述ms培养基中，所述iaa含量为0.3mg，所述6-ba的含量为2.5mg，所述蔗糖的含量为25g，所述蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g。所述的蒙古韭组织培养基，所述增殖培养基为2/3ms培养基中含有naa、6-ba、蔗糖和蒙古韭组培抑菌剂；每升所述2/3ms培养基中，所述naa的含量为0.8mg，所述6-ba的含量为0.7mg，所述蔗糖的含量为25g，所述蒙古韭组培抑菌剂的浓度为40g。所述的蒙古韭组织培养基，所述生根培养基为1/2ms培养基含有iba、naa、蔗糖和蒙古韭组培抑菌剂；在每升所述1/2ms培养基中，所述iba的含量为0.6mg，所述naa的含量为0.7mg，所述蔗糖的含量为25g，所述蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g。所述的蒙古韭组织培养基，所述蒙古韭组织培养基的ph为5.8-6.0。本发明提供了一种应用上述的蒙古韭组织培养基的蒙古韭组培方法，包括以下步骤：1)选择蒙古韭的鳞茎盘作为外植体，将鳞茎盘切割为0.6cm3的小块，每个小块上带有鳞茎芽，然后将带有鳞茎芽的外植体在体积浓度为75％乙醇溶液中消毒30秒后，用无菌水冲洗3次，然后将所述外植体放入蒙古韭组培抑菌剂的稀释液中浸泡60min，所述的蒙古韭组培抑菌剂的稀释液以所述的蒙古韭组培抑菌剂与水体积比为1:4混合稀释，再用无菌水冲洗3次，备用；2)将消毒后的外植体转移至所述诱导培养基中，控制温度为20-24℃，光强1500lx，每天光照10-12h，每个所述鳞茎芽培养8-10d后长出8-10个丛生芽；3)将所述丛生芽切割成0.5cm后转入所述增殖培养基中，以后每隔15-20d继代培养1次，继代培养过程中将苗高3-5cm的幼苗转移至所述生根培养基中；4)所述幼苗在所述生根培养基中培养20-30d时，每株幼苗长出3-5个侧根，将长有3-5个侧根的幼苗用于炼苗与移栽培养。本发明相对现有技术具有如下优点：1、本发明提供的蒙古韭组培抑菌剂由砂韭、寻骨风和乌蕨提取而成，利用砂韭、寻骨风和乌蕨的抑菌活性，使得由上述植物制成的抑菌剂能够在植物组织培养过程中实现广谱的抑菌、杀菌。同时，微生物对上述植物中的抑菌活性物质能够产生的耐药性极小，有利于蒙古韭组培抑菌剂的长期、高效抑菌；另一方面，蒙古韭组培抑菌剂由天然植物制成，在使用过程中不易出现毒副作用、具有极高的安全可靠性，使用后的蒙古韭组培抑菌剂能够自然降解，不易出现残留，是一种环境友好型抑菌剂。所得到蒙古韭组培抑菌剂不仅能够广谱、高效抑菌，还能显著促进蒙古韭的生长，增加株高、促进根长，和增加根的条数。2、本发明提供了一种蒙古韭组培抑菌剂的制备方法，在有效提取砂韭、寻骨风和乌蕨中抑菌活性成分的同时，避免引入有机污染物；能够用于制备抑菌活性高、抑菌稳定性好的广谱蒙古韭组培抑菌剂。3、本发明提供的蒙古韭组织培养基，添加了上述的蒙古韭组培抑菌剂，培养基不需要高压蒸汽灭菌，避免了高温高压过程对培养基中营养元素造成的损耗。使用上述蒙古韭组织培养基，使蒙古韭得组织培养脱离严苛的无菌环境，避免了传统组织培养中的内源菌污染、以及在操作过程中由于操作不当造成的污染。蒙古韭组织培养基能够实现在自然、开放的环境中对蒙古韭进行组织培养，简化了组织培养的操作过程、降低了蒙古韭组织培养的成本，有利于实现蒙古韭的工业化育苗。4、本发明提供的蒙古韭的组织诱导方法，选择蒙古韭的带有鳞茎芽的鱗茎盘作为外植体，利用鳞茎芽的分生能力能够缩短诱导出芽时间，且芽诱导率高；利用鳞茎盘作为外植体，能够使外植体直接分化成丛芽，将愈伤组织诱导与诱导后分化的两阶段融合为一步完成，简化了组织培养过程，缩短了蒙古韭组织培养时间，并且能够避免愈伤诱导过程中可能导致的基因突变，增加了育苗的遗传稳定性。5、本发明提供的蒙古韭的组织诱导方法，所使用的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，一方面通过添加蒙古韭组培抑菌剂使培养基具有广谱的高效抑菌活性，降低了组织培养过程中的污染率，实现了开放环境下的芽的诱导与生根培养，从而降低了蒙古韭组织培养的成本；另一方面，本发明使用的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，对添加激素的种类、浓度和配比进行优化，增高了蒙古韭组织培养过程中的芽诱导率和生根率，且具有出芽嫩绿整齐、生根好、根系发达和增加植株高度等优点；培养基中添加的蒙古韭组培抑菌剂不仅能够有效抑菌，还可以作为天然的有机营养物，促进生根出芽和植株的健壮生长。因此，通过本发明提供的蒙古韭的组织诱导方法，能够实现成本低、周期短、繁殖率高，以及植株生长健壮的开放式蒙古韭组织培养，有利于实现蒙古韭的工业化育苗。具体实施方式以下通过具体实施例来说明本发明的实施方式，除非另外说明，本发明中所公开的实验方法均采用本
技术领域：
常规技术，实施例中所用到的试剂和原料均可由市场购得。实施例1本实施例提供一种蒙古韭的组织培养方法，具体包括以下步骤：1、蒙古韭组培抑菌剂的制备(1)称取砂韭120g、寻骨风25g和乌蕨35g，放入烘箱在45℃温度下烘干，然后将烘干后的植物粉碎，得到植物干粉；(2)向步骤(1)得到的粉末中加入3000ml的蒸馏水,在58℃水浴回流提取三次，每次三小时，然后将三次提取得到的提取液合并；(3)将步骤(2)中合并后的提取液进行真空抽滤，抽滤后的滤液于旋转蒸发仪上浓缩，当滤液体积缩小到150ml时停止浓缩，得到蒙古韭组培抑菌剂。2、蒙古韭组织培养基的制备(1)诱导培养基的制备向ms培养基(ms培养基组分如表1所示)中添加iaa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂，使每升ms培养基中iaa的含量为0.3mg，6-ba的含量为2.5mg，蔗糖的的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(2)增殖培养基的制备向2/3ms培养基中添加naa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升2/3ms培养基中naa的含量为0.8mg，6-ba的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(3)生根培养基的制备向1/2ms培养基中添加iba、naa、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升1/2ms培养基中iba的含量为0.6mg，naa的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。表1ms培养基组分3、蒙古韭的组织培养，组织培养过程中应用步骤2中制备的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基(1)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝2:3的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂,将组织培养中使用的器具用无菌水冲洗3遍，然后置于体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡120min，在用无菌水冲洗3遍，用于后续组培实验；(2)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝3:1的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂,备用；(3)选择蒙古韭的鳞茎盘作为外植体，将鳞茎盘切割为0.6cm3的小块，每个小块上带有鳞茎芽，然后将带有鳞茎芽的外植体小块在75％乙醇中消毒30秒后，用无菌水冲洗3次，然后将外植体放入体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡60min，再用无菌水冲洗3次，备用；(4)将消毒后的外植体转移至诱导培养基中，控制温度为20-24℃，光强1500lx，每天光照12h，每个鳞茎芽培养8d后长出8-10个丛生芽；(5)将丛生芽切割成0.5cm后转入增殖培养基中，以后每隔18d继代1次，继代培养过程中将苗高3-5cm的幼苗转移至生根培养基中；(6)生根培养基中培养25d时，每株幼苗长出3-5个侧根，将长有3-5个侧根的幼苗用于炼苗与移栽培养。实施例2本实施例提供一种蒙古韭的组织培养方法，具体包括以下步骤：1、蒙古韭组培抑菌剂的制备(1)称取砂韭110g、寻骨风20g和乌蕨50g，放入烘箱在45℃温度下烘干，然后将烘干后的植物粉碎，得到植物干粉；(2)向步骤(1)得到的粉末中加入3000ml的蒸馏水,在58℃水浴回流提取三次，每次三小时，然后将三次提取得到的提取液合并；(3)将步骤(2)中合并后的提取液进行真空抽滤，抽滤后的滤液于旋转蒸发仪上浓缩，当滤液体积缩小到150ml时停止浓缩，得到蒙古韭组培抑菌剂。2、蒙古韭组织培养基的制备(1)诱导培养基的制备向ms培养基中添加iaa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂，使每升ms培养基中iaa的含量为0.3mg，6-ba的含量为2.5mg，蔗糖的的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(2)增殖培养基的制备向2/3ms培养基中添加naa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升2/3ms培养基中naa的含量为0.8mg，6-ba的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(3)生根培养基的制备向1/2ms培养基中添加iba、naa、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升1/2ms培养基中iba的含量为0.6mg，naa的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。3、蒙古韭的组织培养，组织培养过程中应用步骤2中制备的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基(1)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝2:3的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂,将组织培养中使用的器具用无菌水冲洗3遍，然后置于体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡120min，在用无菌水冲洗3遍，用于后续组培实验；(2)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝3:1的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂,备用；(3)选择蒙古韭的鳞茎盘作为外植体，将鳞茎盘切割为0.6cm3的小块，每个小块上带有鳞茎芽，然后将带有鳞茎芽的外植体小块在75％乙醇中消毒30s后，用无菌水冲洗3次，然后将外植体放入体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡60min，再用无菌水冲洗3次，备用；(4)将消毒后的外植体转移至诱导培养基中，控制温度为20-24℃，光强1500lx，每天光照10-12h，每个鳞茎芽培养10d后长出8-10个丛生芽；(5)将丛生芽切割成0.5cm后转入增殖培养基中，以后每隔15d继代1次，继代培养过程中将苗高3-5cm的幼苗转移至生根培养基中；(6)生根培养基中培养20d时，每株幼苗长出3-5个侧根，将长有3-5个侧根的幼苗用于炼苗与移栽培养。实施例3本实施例提供一种蒙古韭的组织培养方法，具体包括以下步骤：1、蒙古韭组培抑菌剂的制备(1)称取砂韭125g、寻骨风35g和乌蕨20g，放入烘箱在45℃温度下烘干，然后将烘干后的植物粉碎，得到植物干粉；(2)向步骤(1)得到的粉末中加入3000ml的蒸馏水,在58℃水浴回流提取三次，每次三小时，然后将三次提取得到的提取液合并；(3)将步骤(2)中合并后的提取液进行真空抽滤，抽滤后的滤液于旋转蒸发仪上浓缩，当滤液体积缩小到150ml时停止浓缩，得到蒙古韭组培抑菌剂。2、蒙古韭组织培养基的制备(1)诱导培养基的制备向ms培养基中添加iaa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂，使每升ms培养基中iaa的含量为0.3mg，6-ba的含量为2.5mg，蔗糖的的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(2)增殖培养基的制备向2/3ms培养基中添加naa、6-ba、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升2/3ms培养基中naa的含量为0.8mg，6-ba的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。(3)生根培养基的制备向1/2ms培养基中添加iba、naa、蔗糖、琼脂和蒙古韭组培抑菌剂；使每升1/2ms培养基中iba的含量为0.6mg，naa的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g，蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g；调节ph为5.8-6.0，用于后续组织培养。3、蒙古韭的组织培养，组织培养过程中应用步骤2中制备的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基(1)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝2:3的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂,将组织培养中使用的器具用无菌水冲洗3遍，然后置于体积比为60％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡120min，在用无菌水冲洗3遍，用于后续组培实验；(2)将步骤1中制备的蒙古韭组培抑菌剂按照水：蒙古韭组培抑菌剂＝3:1的体积比，向蒙古韭组培抑菌剂中加入无菌水，制备体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂,备用；(3)选择蒙古韭的鳞茎盘作为外植体，将鳞茎盘切割为0.6cm3的小块，每个小块上带有鳞茎芽，然后将带有鳞茎芽的外植体小块在75％乙醇中消毒30s后，用无菌水冲洗3次，然后将外植体放入体积比为25％的蒙古韭组培抑菌剂中浸泡60min，再用无菌水冲洗3次，备用；(4)将消毒后的外植体转移至诱导培养基中，控制温度为20-24℃，光强1500lx，每天光照10-12h，每个鳞茎芽培养9d后长出8-10个丛生芽；(5)将丛生芽切割成0.5cm后转入增殖培养基中，以后每隔20d继代1次，继代培养过程中将苗高3-5cm的幼苗转移至生根培养基中；(6)生根培养基中培养30d时，每株幼苗长出3-5个侧根，将长有3-5个侧根的幼苗用于炼苗与移栽培养。对比例1本实施例提供一种蒙古韭的组织培养方法，具体包括以下步骤：1、蒙古韭组织培养基的制备(1)诱导培养基的制备向ms培养基中添加iaa、6-ba、蔗糖和琼脂，使每升ms培养基中iaa的含量为0.3mg，6-ba的含量为2.5mg，蔗糖的的含量为25g，琼脂的含量为7g；调节ph为5.8-6.0，在121℃下灭菌20min备用。(2)增殖培养基的制备向2/3ms培养基中添加naa、6-ba、蔗糖和琼脂；使每升2/3ms培养基中naa的含量为0.8mg，6-ba的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g；调节ph为5.8-6.0，在121℃下灭菌20min备用。(3)生根培养基的制备向1/2ms培养基中添加iba、naa、蔗糖和琼脂；使每升1/2ms培养基中iba的含量为0.6mg，naa的含量为0.7mg，蔗糖的含量为25g，琼脂的含量为7g；调节ph为5.8-6.0，在121℃下灭菌20min备用。3、在无菌环境下进行蒙古韭的组织培养，组织培养过程中应用步骤1中制备的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基(1)选择蒙古韭的鳞茎盘作为外植体，将鳞茎盘切割为0.6cm3的小块，每个小块上带有鳞茎芽，将外植体用流水冲洗15min，然后用75％乙醇消毒10min；再用0.1％hgcl2对种子深度灭菌10min，最后用无菌水冲洗3次，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；(2)将消毒后的外植体转移至诱导培养基中，控制温度为20-24℃，光强1500lx，每天光照10-12h，每个鳞茎芽培养8d后长出8-10个丛生芽；(3)将丛生芽切割成0.5cm后转入增殖培养基中，以后每隔18d继代1次，继代培养过程中将苗高3-5cm的幼苗转移至生根培养基中；(4)生根培养基中培养25d时，每株幼苗长出3-5个侧根，将长有3-5个侧根的幼苗用于炼苗与移栽培养。对比例2本实施例提供的一种蒙古韭的组织培养方法与对比例1的区别仅在于本实施例中以180g的寻骨风为原料提取制得蒙古韭组培抑菌剂，蒙古韭组织培养基中添加上述蒙古韭组培抑菌剂(每升培养基中蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g)，其他步骤均相同。对比例3本实施例提供的一种蒙古韭的组织培养方法与对比例1的区别仅在于本实施例中以180g的乌蕨为原料提取制得蒙古韭组培抑菌剂，蒙古韭组织培养基中添加上述蒙古韭组培抑菌剂(每升培养基中蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g)，其他步骤均相同。对比例4本实施例提供的一种蒙古韭的组织培养方法与对比例1的区别仅在于本实施例中以180g的砂韭为原料提取制得蒙古韭组培抑菌剂，蒙古韭组织培养基中添加上述蒙古韭组培抑菌剂(每升培养基中蒙古韭组培抑菌剂的含量为40g)，其他步骤均相同。实验例11、不同蒙古韭组培抑菌剂浓度对培养基污染的影响(1)将实施例1-3、对比例2-4中制备的蒙古韭组培抑菌剂作为原液，然后将六种原液分别按照10倍稀释、20倍稀释、30倍稀释、40倍稀释和60倍稀释，将不同浓度的原液和稀释后的提取液各加3ml到平皿中与约10ml的营养琼脂培养基(蛋白胨10g/l，牛肉膏粉3g/l，氯化钠5g/l，琼脂15g/l，最终ph7.3-7.5)混合，制成抑菌平板。供试病菌(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的混合菌)均预先在营养琼脂培养基(蛋白胨10g/l，牛肉膏粉3g/l，氯化钠5g/l，琼脂15g/l，最终ph7.3-7.5)中培养，用孔径为0.5cm的打孔器在菌落边缘切取生长一致的菌块作为接种体。将接种体移入抑菌平板中央。以无菌蒸馏水作为对照，置25℃恒温培养。用十字交叉法测量菌落直径，并校正，计算抑菌百分率。抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径)×100％。不同蒙古韭组培抑菌剂浓度对植物供试细菌生长的抑制作用测试结果见表1，由表2可知，30倍稀释的蒙古韭组培抑菌剂抑菌率达80％以上，具有较高的抑菌活性。表2不同蒙古韭组培抑菌剂浓度的抑菌率实施例1实施例2实施例3对比例2对比例3对比例4抑菌率/原液100％95％97％5.1％10％43％抑菌率/10倍稀释93.2％90.1％91.8％3.7％8.5％35.2％抑菌率/20倍稀释88.4％85.2％86.3％2.8％6.2％24.8％抑菌率/30倍稀释86.8％83.5％84.3％2.2％5.5％18.6％抑菌率/40倍稀释60.3％68.1％65.2％1.3％4.1％15.5％抑菌率/60倍稀释30.2％22.5％28.6％01.2％3.1％(2)以步骤(1)中所示的抑菌率的测定方法，分别检测实施例1-3、对比例2-4中制备的蒙古韭组培抑菌剂30倍稀释后对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和假丝酵母的抑菌活性，抑菌率结果如表3所示。表3蒙古韭组培抑菌剂对不同细菌和真菌的抑菌率由表3可知，实施例1-实施例3中所制备的蒙古韭组培抑菌剂，在30倍稀释时，能够有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和假丝酵母多种不同的细菌与真菌的生长，因此，所制备的蒙古韭组培抑菌剂具有广谱的抑菌活性。2、观测通过实施例1-实施例3和对比例1-4所提供的不同的组织培养基中蒙古韭的芽诱导情况、生根情况与植株生长情况，结果如表4和表5所示。表4不同蒙古韭组织培养基培养下的芽诱导情况表5不同蒙古韭组织培养基培养下的生根情况生根率根数根长/cm根生长情况植株高度/cm实施例1100％5.25.8健壮5.8实施例292％4.26.1健壮5.5实施例388％4.55.5一般5.3对比例170％3.25.0一般5.2对比例270.8％3.25.0一般5.2对比例372％3.25.0一般5.2对比例475％3.45.1一般5.3由表4和表5可知，添加本发明的蒙古韭组培抑菌剂，不仅能够避免高温高压灭菌，使蒙古韭的组织培养在开放环境下进行，降低了蒙古韭组织培养的成本并且简化了蒙古韭的培养过程，使蒙古韭能够在开放的环境下进行组织培养；另一方面，通过添加蒙古韭组培抑菌剂，提高了蒙古韭的出芽率和生根率，提高了诱导芽的生长状况，芽色绿且生长快，生根的数量、速度、根系生长的健壮度与植株的高度都有所提高，并且由实施例1的蒙古韭组织培养方法所得的蒙古韭在出芽、生根和植株生长方面都具有最优的长势。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12