本发明涉及果树种植技术领域，具体涉及一种炭团菌发酵液提取物的提取方法及其在芒果病害防治上的应用。
背景技术
炭团菌在真菌分类系统中，隶属于子囊菌亚门(ascomycotina)、核菌纲(pyrenomycetes)球壳目(sphaeriales)、炭角菌科(xylaiaccac)、炭团菌属(hypoxylon)。目前，有关炭团菌属的研究主要集中在两方面，一是由炭团菌引起的病害，二是对该属内几种海洋真菌代谢产物的研究与应用。
芒果病害主要有：芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病和芒果灰斑病，芒果虫害主要有：芒果横纹尾夜蛾(俗称梢螟或钻心虫)、芒果扁喙叶蝉(芒果短头叶蝉)、柑桔小实蝇、芒果脊胸天牛，芒果瘿蚊，切叶象甲，蚜虫和介壳虫。现有的研究中，发现炭团菌的发酵底物提取物具有一定的抑菌活性，但是对炭团菌提取物的作用和应用较少。现有的芒果病虫害防治主要采用化学防治，对天然无残留的灭菌防虫的研究较少。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术中对炭团菌研究利用率低，而芒果的病害防治主要采用化学农药，具有农药残留，有副作用的技术问题，提供一种炭团菌发酵液提取物的提取方法及其在芒果病害防治上的应用。
为解决上述问题，本发明采取如下技术方案：
一种炭团菌发酵液提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)炭团菌的培养：将炭团菌置于培养基中，于25～28℃下培养5～6d得到培养液，所述培养基配方为马铃薯2g，大豆蛋白5g、樟子松纤维6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml；
(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用质量之比为10:5:2的乙醇、丙醇、乙二醇混合液萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取30～40min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为40～60℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
本发明的目的还在于提供一种将所述炭团菌发酵液提取物在芒果病害防治上的应用方法，具体应用方法为将所述炭团菌发酵液提取物制备成试剂定期喷洒于芒果；所述的试剂含有质量份的如下组分组成：炭团菌发酵液提取物80～100份、氢氧化铜1～3份、葡萄糖2～5份、双氧水1～6份、非离子表面活性剂2～6份、阳离子表面活性剂4～8份、二氧化钛0.1～0.3份、月桂酸1～3份。
优选的，所述的非离子表面活性剂为多元醇型。
优选的，所述非离子表面活性剂为失水山梨醇酯、蔗糖酯的一种或两种。
优选的，所述的阳离子表面活性剂为季铵盐阳离子表面活性剂。
进一步的，所述试剂由如下方法制备得到：将炭团菌发酵液提取物与阴离子表面活性剂、阳离子表面活性，剂混合后采用超声分散10～20min后添加二氧化钛、月桂酸、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水，再采用超声分散和机械搅拌的共同作用下混合搅拌80～90min即得所述试剂。
本发明与现有技术相比较具有以下有益效果：
(1)本发明制备得到的炭团菌发酵液提取物中含有较强的杀菌抑菌能力，对芒果的多种致病菌具有杀灭作用，可将其应用于芒果的病虫防害上，可杀死侵染芒果的病原菌和害虫，芒果基本不发生病害。
(2)本发明制备得到将的炭团菌发酵液提取物制成试剂喷洒于芒果，对芒果进行病害防治，该试剂中，非离子表面活性剂中失水山梨醇酯、蔗糖酯可提供羟基，季铵盐阳离子表面活性剂可供正电荷，非离子表面活性剂和季铵盐阳离子表面活性剂与炭团菌发酵液提取物、月桂酸、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水混合后可形成稳定乳液，季铵盐阳离子表面活性剂水溶性好，既耐酸又耐碱且大多数具有杀菌作用，其与炭团菌发酵液提取物配合可杀死大部分芒果致病病原菌，二氧化铜、二氧化钛、双氧水在阳光中紫外线的辐照下，可增强炭团菌发酵液提取物中的杀死病原菌的能力、杀菌效果好，对芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病、芒果灰斑病具有较强的防治作用，同时对侵染芒果的害虫，如芒果横纹尾夜蛾(、芒果扁喙叶蝉、柑桔小实蝇、芒果脊胸天牛，芒果瘿蚊，切叶象甲，蚜虫和介壳虫也均有不同程度的毒杀作用。
具体实施方式
下面结合实施例和试验对本发明作进一步说明。
实施例1
一种炭团菌发酵液提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)炭团菌的培养：将炭团菌置于培养基中，于28℃下培养5d得到培养液，所述培养基配方为马铃薯2g，大豆蛋白5g、樟子松纤维6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml；
(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用质量之比为10:5:2的乙醇、丙醇、乙二醇混合液萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取40min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为40℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
实施例2
一种炭团菌发酵液提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)炭团菌的培养：将炭团菌置于培养基中，于25℃下培养6d得到培养液，所述培养基配方为马铃薯2g，大豆蛋白5g、樟子松纤维6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml；
(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用质量之比为10:5:2的乙醇、丙醇、乙二醇混合液萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取30min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为60℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
实施例3
一种炭团菌发酵液提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)炭团菌的培养：将炭团菌置于培养基中，于26℃下培养6d得到培养液，所述培养基配方为马铃薯2g，大豆蛋白5g、樟子松纤维6g、葡萄糖12g，kh2po4、mgso4、水100ml；
(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用质量之比为10:5:2的乙醇、丙醇、乙二醇混合液萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取35min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为50℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
应用例1
将实施例1提取得到的炭团菌发酵液提取物应用芒果病害防治，具体的应用方法为：将炭团菌发酵液提取物制成试剂定期喷洒于芒果；所述的试剂含有质量份的如下组分组成：炭团菌发酵液提取物100份、氢氧化铜1份、葡萄糖5份、双氧水1份、非离子表面活性剂6份、阳离子表面活性剂4份、二氧化钛0.3份、月桂酸1份。所述的非离子表面活性剂为失水山梨醇酯和蔗糖酯，所述的阳离子表面活性剂为季铵盐阳离子表面活性剂。
所述试剂由如下方法制备得到：将炭团菌发酵液提取物与阴离子表面活性剂、阳离子表面活性，剂混合后采用超声分散20min后添加二氧化钛、月桂酸、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水，再采用超声分散和机械搅拌的共同作用下混合搅拌80min即得所述试剂。
应用例2
将实施例2提取得到的炭团菌发酵液提取物应用芒果病害防治，具体的应用方法为：将炭团菌发酵液提取物制成试剂定期喷洒于芒果；所述的试剂含有质量份的如下组分组成：炭团菌发酵液提取物80份、氢氧化铜3份、葡萄糖2份、双氧水6份、非离子表面活性剂2份、阳离子表面活性剂8份、二氧化钛0.1份、月桂酸3份。所述的非离子表面活性剂蔗糖酯，所述的阳离子表面活性剂为季铵盐阳离子表面活性剂。
所述试剂由如下方法制备得到：将炭团菌发酵液提取物与阴离子表面活性剂、阳离子表面活性，剂混合后采用超声分散10min后添加二氧化钛、月桂酸、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水，再采用超声分散和机械搅拌的共同作用下混合搅拌90min即得所述试剂。
应用例3
将实施例3提取得到的炭团菌发酵液提取物应用芒果病害防治，具体的应用方法为：将炭团菌发酵液提取物制成试剂定期喷洒于芒果；所述的试剂含有质量份的如下组分组成：炭团菌发酵液提取物90份、氢氧化铜2份、葡萄糖3份、双氧水5份、非离子表面活性剂5份、阳离子表面活性剂7份、二氧化钛0.2份、月桂酸2份。所述的非离子表面活性剂为失水山梨醇酯，所述的阳离子表面活性剂为季铵盐阳离子表面活性剂。
所述试剂由如下方法制备得到：将炭团菌发酵液提取物与阴离子表面活性剂、阳离子表面活性，剂混合后采用超声分散15min后添加二氧化钛、月桂酸、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水，再采用超声分散和机械搅拌的共同作用下混合搅拌85min即得所述试剂。
为了说明本发明的提取得到的炭团菌发酵液提取物在芒果病害虫防治的技术效果，设置如下对比例。
对比例1
对比例1的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对比例1的试剂中不含有二氧化钛。
对比例2
对比例2的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对比例2的试剂中不含有氢氧化铜和双氧水。
对比例3
对比例3的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对比例3的试剂中不含有月桂酸和葡萄糖。
对比例4
对比例4的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对比例4的试剂中含有的炭团菌发酵液提取物的提取方法中，步骤(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用无水乙醇萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取40min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为40℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
对比例5
对比例5的与应用例1的应用方法基本相同，区别在于，对比例5的试剂中含有的炭团菌发酵液提取物的提取方法中，步骤(2)醇提取：采用纱布将培养液过滤除菌后，采用氯仿萃取得到初级萃取物，将初级萃取物置于超临界萃取斧中进行超临界萃取，以无水乙醇为夹带剂萃取30min得到所述炭团菌发酵液提取物；所述超临界二氧化碳萃取温度为60℃，萃取压力为70kpa，二氧化碳流速为25l/min。
为了说明本发明的技术效果，如下实验；
依照实施例1～实施例3以及对比例1～对比例5提供的应用方法，将炭团菌发酵液提取物应用于芒果病害防治上，每个月喷洒一次含有炭团菌发酵液提取物的试剂，种植过程中统计芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病、芒果灰斑病的发病率，记录在表1中。
表1
由表1可知，实施例1相比于对比例1～对比例3的芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病、芒果灰斑病患病率都低，说明本发明采用炭团菌发酵液提取物、氢氧化铜、葡萄糖、双氧水、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、二氧化钛、月桂酸相互配合组成的试剂防治芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病、芒果灰斑病具有很好的效果，实施例1相比于对比例4、对比例5的芒果炭疽病、流胶枝枯病、细菌性黑斑病、芒果灰斑病患病率低，说明的炭团菌发酵液提取物方法能够提取得到有效的杀菌活成分，相比其他提取方法得到的炭团菌发酵液提取物杀菌防病效果好。
应用例1～应用例3的芒果横纹尾夜蛾、芒果扁喙叶蝉、柑桔小实蝇、芒果脊胸天牛，芒果瘿蚊，切叶象甲，蚜虫和介壳虫的毒杀效果分别为：毒杀58％的芒果横纹尾夜蛾、毒杀69％的芒果扁喙叶蝉、毒杀46％的柑桔小实蝇、毒杀23％的芒果脊胸天牛，毒杀41％的芒果瘿蚊，毒杀58％的切叶象甲，毒杀100％的蚜虫和介壳虫。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。