本发明涉及微生物农药
技术领域：
，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂及其制备方法。
背景技术：
：解淀粉芽孢杆菌k-8能够同时抑制多种作物病原菌，如番茄青枯病病原菌、黄瓜角斑病病原菌、猕猴桃溃疡病病原菌、大白菜软腐病病原菌等细菌性病害以及西瓜枯萎病病原菌、水稻纹枯病病原菌和苹果腐烂病病原菌等真菌性病害。现有技术中解淀粉芽孢杆菌k-8公开了固态菌剂，制备过程包括将菌体悬浮液和载体混合、喷雾干燥。虽然粉剂使用方便且制备成本较低，但由于其容易飘移导致环境污染。悬浮剂，是在助剂(润湿分散剂、增稠剂、结构调节剂和消泡剂等)作用下，将不溶于水或难溶于水的原药分散到水中形均匀稳定的分散体系，避免了对环境的污染。但是，水悬液剂贮藏稳定性差一直是困扰生产的一大难题。技术实现要素：本发明的目的是提供一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，具有良好的防效，且在室温下稳定性好。本发明的目的采用如下技术方案实现。一种解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×108～1×1010cfu，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：亚甲基双萘磺酸钠1.2％～1.6％、吐温801.8％～2.3％、op-101.5％～2.1％、羧甲基纤维素钠0.01％～0.03％、对羟基苯甲酸甲酯0.015％～0.025％、苯甲酸钠0.12％～0.18％、正辛醇0.2％～0.4％、甘油5％～7％、黄原胶0.22％～0.28％，余量为水。优选的技术方案中，每克悬浮剂含有解淀粉芽孢杆菌1×109，所述悬浮剂按照重量百分含量还含有如下成分：nno1.4％、吐温802.1％、op-101.8％、对羟基苯甲酸甲酯0.02％、羧甲基纤维素钠0.02％、苯甲酸钠0.15％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。优选的技术方案中，所述解淀粉芽孢杆菌是采用如下方法制备的：将解淀粉芽孢杆菌接种发酵培养基培养，获得发酵液；将发酵液离心取沉淀。优选的技术方案中，所述发酵培养基含有：葡萄糖5～10g/l，糖蜜10～30g/l，蚕蛹粉5～10g/l，玉米浆5～20g/l，氯化钠10～20g/l，碳酸钙1～10g/l，硫酸镁0.1～1g/l，硫酸锰0.01～0.1g/l，氯化亚铁0.02～0.08g/l，ph7.0～7.5；采用发酵培养基培养解淀粉芽孢杆菌k-8过程中通气量和温度控制如下：0h～8h：气液比为(0.4～0.6):1，温度25℃～28℃；8h～24h：气液比为(0.9～1.1):1，温度28℃～30℃；24h以后：气液比为(0.7～0.9):1，温度30℃～32℃。本发明还提供所述解淀粉芽孢杆菌悬浮剂的制备方法，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌、nno、吐温80、op-10、羧甲基纤维素钠、对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠、正辛醇、甘油、黄原胶和水混合均匀，均质乳化，得到解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。本发明解淀粉芽孢杆菌悬浮剂，具有良好的防效，且在室温下稳定性好，放置12个月，活菌数几乎不变。具体实施方式解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)k-8公开于专利号为zl2013100706246，保藏号为cgmccno.6486，缩写为解淀粉芽孢杆菌k-8。实施例1制备解淀粉芽孢杆菌悬浮剂(1)制备解淀粉芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌k-8的活化：从解淀粉芽孢杆菌k-8的冷冻干燥管中，用无菌接种针挑取部分菌粉至lb摇瓶中(250ml摇瓶，lb液体培养基装液量50ml)，在30℃、150r/min下培养24h后，lb培养基变浑浊。取菌液至lb固体培养基中划线培养30h。一级种子液的制备：挑取lb固体培养基上的单菌落接种于一级种子摇瓶中，摇瓶体积为250ml，lb液态培养基的装液量50ml。将一级种子摇瓶在30℃、150r/min下培养24h，得到一级种子液。二级种子液的制备：种子罐中的培养基配方(g/l)为：葡萄糖25、蔗糖25、蛋白粉10、酵母粉15、磷酸二氢钾0.5、硫酸锰0.05，溶剂为水。将一级种子液接入二级种子罐中，接种量为3％(v/v)，培养条件为：通气比1：1，搅拌转速为200r/min，培养温度30℃，罐压0.01mpa，培养时间为20h。培养结束时得到二级种子液，其活菌含量为1.8×108cfu/ml。发酵培养：将解淀粉芽孢杆菌k-8的二级种子液，按照接种量为2％(v/v)接入发酵罐中培养。发酵罐中的培养基及培养条件分别如下。培养基：葡萄糖5g/l、糖蜜20g/l，蚕蛹粉5g/l、玉米浆15g/l，氯化钠15g/l，碳酸钙5g/l，硫酸镁0.5g/l，硫酸锰0.05g/l，氯化亚铁0.04g/l，ph7.3。培养条件：罐压0.01mpa；0h-8h：气液比为0.5:1，温度28℃；8h-24h：气液比为1:1，温度30℃；24h以后：气液比为0.8:1，温度32℃。搅拌转速：150r/min。发酵时间28h时，镜检，芽孢率达到97％，此时的活菌含量为6.9×109cfu/ml。因此，在发酵28h收获发酵液，离心，取沉淀，即得到解淀粉芽孢杆菌k-8，用于配制解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。(2)配制解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a，每克悬浮剂a含有解淀粉芽孢杆菌1*109cfu，悬浮剂a按照重量百分含量还含有如下成分：nno(亚甲基双萘磺酸钠)1.4％、吐温802.1％、op-10(烷基酚聚氧乙烯醚)1.8％、羧甲基纤维素钠0.02％、对羟基苯甲酸甲酯0.02％、苯甲酸钠0.15％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a的制备方法如下：：将解淀粉芽孢杆菌、nno、吐温80、op-10、羧甲基纤维素钠、对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶和水混合均匀，均质乳化，得到解淀粉芽孢杆菌悬浮剂。对解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a进行下列检测。按照农药悬浮率测定方法gb/t14825-2006测定悬浮剂的悬浮率。按照gb/t1601-1993检测ph。按照农药悬浮剂产品标准规范倾倒性测定方法hg/2467.5-2003测定。采用平板菌落计数法检测活菌数。冷贮稳定性测定方法参照gb/t19137-2003，热贮稳定性测定方法参照gb/t19136-2003表1解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a的稳定性状态活菌数悬浮率ph热贮前1*109cfu/g97.8％7.8热贮后0.98*109cfu/g94.5％7.7冷贮前1*109cfu/g97.8％7.8冷贮后0.99*109cfu/g97.2％7.8注：表1中热贮前、冷贮前均是指悬浮剂刚配制好的时候。从表1可见，刚配制好的解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a悬浮率为97.8％，ph7.8，且倾倒性好，在热贮或冷贮后，上述性质几乎没有变化。(3)解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a在田间对植物病害的防治效果将解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a在江苏、安徽、江西、山东、陕西等地，分别对烟草青枯病、番茄青枯病、西瓜枯萎病等病害作物，进行田间药效实验。具体方法如下：将解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a稀释800倍，然后采用灌根的方法进行防治(在移栽时和发病初期用药)，解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a总用药量为3.2l/亩。观察并统计作物的发病率或病指。具体结果见表2。空白中，以清水替代解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a的稀释液。表2田间试验结果由表2可见，解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a对烟草青枯病、番茄青枯病、西瓜枯萎病有较好的防效。实施例2悬浮剂的常温贮存寿命考察解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a(实施例1)、对照悬浮剂1、对照悬浮剂1和对照悬浮剂2的常温贮存寿命。对照悬浮剂1：每克对照悬浮剂1含有解淀粉芽孢杆菌1*109cfu，对照悬浮剂1按照重量百分含量还含有如下成分：nno1.4％、吐温802.1％、op-101.8％、羧甲基纤维素钠0.02％、对羟基苯甲酸甲酯0.05％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。对照悬浮剂2：每克对照悬浮剂2含有解淀粉芽孢杆菌1*109cfu，对照悬浮剂2按照重量百分含量还含有如下成分：nno1.4％、吐温802.1％、op-101.8％、羧甲基纤维素钠0.02％、苯甲酸钠0.4％、正辛醇0.3％、甘油6％、黄原胶0.25％，余量为水。对照悬浮剂3：每克对照悬浮剂2含有解淀粉芽孢杆菌1*109cfu，对照悬浮剂2按照重量百分含量还含有如下成分：农乳342.5％、d-4252％、op-101.5％、黄原胶0.15％，尿素0.15％，对羟基苯甲酸甲酯0.06％，甘油5％，正辛醇0.2％，余量为水。将解淀粉芽孢杆菌悬浮剂a(实施例1)、对照悬浮剂1、对照悬浮剂2和对照悬浮剂3常温避光条件下保存18个月，其间每月取样检测各悬浮剂的活菌数。结果如表3。表3各悬浮剂常温储藏过程中活菌数的变化储藏月数悬浮剂a对照悬浮剂1对照悬浮剂2对照悬浮剂311.0×109cfu/g0.95×109cfu/g0.90×109cfu/g0.91×109cfu/g20.99×109cfu/g0.89×109cfu/g0.84×109cfu/g0.87×109cfu/g31.0×109cfu/g0.85×109cfu/g霉变0.84×109cfu/g41.0×109cfu/g0.81×109cfu/g-0.79×109cfu/g50.99×109cfu/g0.76×109cfu/g-0.71×109cfu/g60.98×109cfu/g0.70×109cfu/g-0.69×109cfu/g70.98×109cfu/g0.63×109cfu/g-0.64×109cfu/g80.99×109cfu/g0.58×109cfu/g-0.57×109cfu/g90.97×109cfu/g0.51×109cfu/g-0.48×109cfu/g100.98×109cfu/g---110.99×109cfu/g---120.97×109cfu/g---另外，还考察过将对照悬浮剂1中对羟基苯甲酸甲酯浓度变为0.01％、0.03％，活菌数要低于对羟基苯甲酸甲酯为0.05％的配方。若将对照悬浮剂2中苯甲酸钠调整为0.2％、0.3％、0.5％时，活菌数要低于苯甲酸钠为0.4％时的配方，且不足一个月就霉变。当前第1页12