ilkworm larvae infected with a dual recombinant Bombyxmori nuclear polyhedrosis virus,Biotechnology(NY) 10(1992)910 - 912.
[0131] 12. F. Gil, M. Perez-Filgueira, M. G. Barderas, C. Pastor-Vargas, C. Alonso, F. Vivanco, J. M. Escribano, Targeting antigens to an invariant epitope of the MHC Class IID民 molecule potentiates the immune response to subunit vaccines. Virus Res.巧010).
[0132] 13. S. Ma化avan, V. T. Gautvik, E. Rokkones, 0· K. Olstad, B. N. Kareem, S. Maeda, K. M.Gautvik, High-level production of human parathyroid hormone inBombyx mori larvae and BmN cells using recombinant baculovirus,Genel67 (1995)33 - 39.
[0133] 14. S. Sumathy, V. B. Palhan, K. P. Gopinathan, Expression of human growthhormone in silkworm larvae through recombinant Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus，Protein Expr.Purif. 7 (1996)262 - 268.
[0134] 15. X. Shi，J.Qin，J.Zhu，D.Zhu, Expression of biologically active humangranulocyte-macrophage colony-stimulating factor in the silkworm化ombyxmori), Biotechnol. Appl. Biochem. 24 (Pt 3)(1996)245 - 249.
[0135] 16. M. Q. Pham, S. Naggie, M. Wier, H. J. Cha, W. E. Bentley, Human interleukin-2production in insect (^Trichoplusi过 ni) 1 过rv过e: effects 过nd partial control ofproteolysis，Biotechnol. Bioeng. 62(1999) 175 - 182.
[0136] 17. J. B. Katz, A. L. Shafer, K. A. Eernisse, Construction and insect larval expression ofrecombinant vesicular stomatitis nucleocapsid protein and its use incompetitiveELISA,J.Virol.Methods54 (1995) 145 - 157.
[0137] 18.D.M.Perez-FiIgueira,F.Gonzalez-Camacho,C.Gallardo,P. 民esino-Talavan,E.Blanco,E.Gomez-Casado,C.Alonso,J.M.Escribano,Optimization andvalidationofrecombinantserologicaltestsforAfricanswinefever diagnosisbasedondetectionofthep30proteinproducedinTrichoplusiani larvae,J.Clin.Microbiol. 44 (2006) 3114 - 3121.
[0138] 19.S.Gomez-Sebastian,D.M.Perez-Filgueira,E.Gomez-Casado,M.C.Nunez,I. Sanchez-民amos,E.Tabares,J.M.Escribano,DIVAdiagnosticofAujeszky'sdisease usinganinsect-derivedvirusglycoproteinE,J.Virol.Methods153 (2008)29 - 35.
[0139] 20.F.Todoli,M.Perez-FiIgueira,I.Galindo,S.Gomez-Sebastian,J. M.Escribano,A.民odriguez-Cortes,J.Alberola,Seroreactivityagainstraw insect-derivedrecombinantKMPII,TRYP,andLACKLeishmaniainfantumproteins ininfecteddogs,Vet.Parasitol. 164 (2009) 154 - 161.
[0140] 21.Hill-PerkinsMS,PosseeRD.Abaculovirusexpressionvectorderived fromthebasicproteinpromoterofAutographacalifornicanuclearpolyhedrosis virus.JGenVirol. 1990, 7UPt4) :971-6.
[0141] 22.Passarelli,A.L. ,andL.K.Miller.Threebaculovirusgenes involvedinlateandverylategeneexpression:ie-l，ie-n，andlef-2. J.Virol. 1993,67:2149 - 2158
[0142] 23.民odems,S.M.，S.S.Pullen,andP.D.Friesen.DNA-dependent transregulationbylElofAutographacalifornicanuclearpolyhedrosis virus:lEldomainsrequiredfortransactivationandDNAbinding. J.Virol. 1997,71:9270 - 9277.
[0143] 24.LinX，ChenY,YiY,ZhangZ:Baculovirusimmediatelyearly1，amediator forhomologousregionsenhancerfunctionintrans.VirolJ2010,7:32.
[0144] 25.OkanoK,MikhailovVS,MaedaS:ColocalizationofbaculovirusIE-1and twoDNA-bindingproteins,DBPandLEF-3,toviralreplicationfactories.Journal ofvirologyl999, 73(1):110-119.
【主权项】
1. 一种昆虫，其含有能够高于内源水平地表达充当转录调控因子的蛋白IE-UIE-0和 /或其片段的核酸序列，其中所述核酸选自： (a) 含有SEQIDNO: 1-5中任一项所示的核苷酸序列的核酸； (b) 与SEQIDN0:l-5中任一项所示的核苷酸序列的序列一致性为至少70%、优选 为至少75 %、更优选为至少80 %、更优选为至少85 %、更优选为至少90 %、最优选为至少 95%，并编码能够在重组杆状病毒中充当转录调控因子的蛋白的核酸序列； (c) 编码含有如SEQIDN0:6-9中任一项所示的氨基酸序列的氨基酸的核酸序列；以 及 (d) 编码了与SEQIDN0:6-9中任一项所示的氨基酸序列的序列一致性为至少70%、 优选为至少75 %、更优选为至少80 %、更优选为至少85 %、更优选为至少90 %、最优选为至 少95%并能够在重组杆状病毒中充当转录调控因子的氨基酸序列的核酸序列。2. 根据权利要求1所述的昆虫，其特征在于，还包括至少一个充当增强子区域并可操 作地连接至任何适用于驱动重组蛋白表达的启动子的重组同源区域（hr)。3. 根据权利要求2所述的昆虫，其特征在于，所述重组同源区域（hr)是如SEQID N0:27(hrl)所示的序列。4. 根据权利要求2或3所述的昆虫，其特征在于，可操作地连接至所述重组同源区域 (hr)上的所述启动子选自如下核酸： (a) 含有如SEQIDNO: 10-16中任一项所示的核苷酸序列的核酸；和 (b) 能够在重组杆状病毒中充当启动子且与SEQIDNO: 10-16中任一项所示的核苷酸 序列的序列一致性为至少70 %、优选为至少75 %、更优选为至少80 %、更优选为至少85 %、 更优选为至少90 %、最优选为至少95 %的核酸序列。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的昆虫，其特征在于，包含了含有重组启动子、编码 转录调控因子的序列、选自SEQIDNO: 17-26的增强子区域的组合的核酸序列。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的昆虫，其特征在于，进一步包括编码重组蛋白的 核酸序列，其中所述核酸序列可操作地连接选自第1-5项中的核酸序列。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的昆虫，其特征在于，其中所述昆虫属于鳞翅类 Lepidoptera〇8. 根据权利要求1-7中任一项所述的昆虫，其特征在于，其中所述昆虫选自： Trichoplusiani、Spodopterafrugiperda、Spodopteraexigua、Ascalaphaodorata、 Bombyxmori、Rachiplusiani和Stigmeneacrea。9. 根据权利要求1-8中任一项所述的昆虫，其特征在于，所述核酸序列通过重组杆状 病毒，优选为AcMNPV或BmNPV，引入该昆虫。10. 用于产生重组蛋白的方法，包括使用权利要求1-9中任一项所述的昆虫并通过常 规方法对重组蛋白进行提取和纯化。11. 根据权利要求10所述的用于生产重组蛋白的方法，其特征在于，所述重组蛋白选 自：亚单位单体疫苗、亚单位多聚体疫苗、病毒样颗粒、治疗蛋白、抗体、酶、细胞因子、凝血 因子、抗凝剂、受体、荷尔蒙或诊断性蛋白试剂。12. 用于含有如权利要求1-6任一项所述核酸序列的昆虫的饲育、喂养或注射培养基。
【专利摘要】提供了能够改进重组蛋白在昆虫中的表达的试剂和方法。更具体而言，将重组DNA元件引入昆虫幼虫，能够提高重组蛋白的表达，促进所述蛋白的正确折叠，以及提高昆虫感染后的存活率。所述重组DNA元件可以通过例如包含所述元件的重组杆状病毒来引入昆虫幼虫。该重组DNA元件包括编码转录调节因子(例如IE-0和IE-1)的核酸、转录增强子元件(例如同源区域(hr))和启动子。
【IPC分类】A01K67/033, C12N15/85, C12N15/866
【公开号】CN105392362
【申请号】CN201280075275
【发明人】西尔维娅·戈麦斯-塞巴斯蒂安, 哈维尔·洛佩兹-维道尔, 约瑟-安琪儿·马丁内斯-埃斯克里巴诺
【申请人】替代基因表达公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2012年6月12日
【公告号】US20150240260