将200μ1液体培养基转移至YME琼脂平板并在28°C下培养4天W 增强平板表面的完全菌落覆盖。
[0062] 将Botirtiscinerea从甘油储液（100μ1)直接涂布至YME琼脂并随后在28°C下 培养9天。将所有其它所选择的真菌从甘油储液（200μ1)直接涂布至YME琼脂并随后在 28°C下培养4天。
[0063] 根据实施例1中所述的程序进行生物检测，其中变化是：所有变量W五倍被检测。 根据对照样品的真菌菌落生长，将平板在28°C下储存7天或11天。培养之后，根据实施例 1中所述的方法测量真菌菌落的半径。
[0064] 结果显示：在所有被检测的样品中，与对照样品相比，朝向产生那他霉素的菌株 (Str巧tomycesnatalensis&Str巧tomyceschattanoogensis)的真菌生长被抑制。根据所 测试的菌株，平均抑制从2%到78%不等（参见表2)。因此，运些结果清楚显示：产生那他 霉素的Streptomyces菌株具有抑制不同物种真菌植物病原体的潜能。
[00化]与S.chattanoogensis相比，S.natalensis菌株显不出真菌半径发展的更大降 低。此外，S.natalensis菌株DS73870 和DS73871 明显胜过S.natalensisATCC-27448 菌株（=模式菌株）。根据所检测的真菌菌株，S.natalensisATCC-27448的平均抑制在 26%-53%之间不等，而5.11日1日1611313 0573870和0573871的平均抑制在59%-78%之间 不等（参见表2)。
[0066] 连施俩I 3
[0067]产生那他霉素的Str巧tomyces natalensis菌株DS73871&DS73870抵抗 Verticillium a化o-atrum的抗真菌活性
[0068] 在另一个实验中，检测产生那他霉素的Str巧tomycesnatalensisDS73871和 StreptomycesnatalensisDS73870抵抗Verticilliumalb〇-at;rum(CBS321. 91)的抗真菌 活性。
[0069]Vedicilliuma化o-atrum与黄萎病有关。运种±传真菌可导致多种作物（主要 在较冷气候区域）严重的收获损失。
[0070] 根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是：所有变量W五倍被检测。为了产生 真菌栓塞，将Vedicilliumalb〇-atrum(CBS321. 91)从甘油储液（200μ1)直接涂布至YME 琼脂并随后在28°C下培养4天。
[0071] 朝向产生那他霉素的Str巧tomycesnatalensis菌株DS73871和DS73870的 Ve;rticilliuma化o-atrum的真菌半径在第11天时分别减小44%和45%。25天之后，对 于菌株0573871和0573870，抑制区甚至分别进一步减小至76%和71%(参见表3)。
[0072]运些结果清楚显示：S.natalensisDS73870 和DS73871 具有抑制Vedicillium 曰Ibo-曰trum白勺會
[0073] 连施俩I4
[0074]产生那他霉素的StreptomycesnatalensisDS73871 和DS73870 抵抗Cercospora zeae-maydis的抗真菌活性
[00巧]在另一个实验中，检测产生那他霉素的Str巧tomycesnatalensis菌株DS73871 和DS73870 抵抗Cercosporazeae-maydis(CBS117757)的抗真菌活性。Cercospora zeae-maydis导致"灰色叶斑病"，其是玉蜀泰上最重要的叶部疾病之一。
[0076] 根据实施例1中所述的方法进行实验，唯一例外是：将用于"生物检测"的培养皿 (包含细菌和霉菌栓塞二者）在28°C下培养28天而非7天。
[0077] 结果（参见表4)清楚显示了S.natalensis菌株DS73870和DS73871对 Cercosporazeae-maydis生长的抑制效果。对于S.natalensisDS73871 和S.natalensis DS73870,朝向细菌菌株的真菌菌落的半径分别减少84%和63%。
[0078] 连施俩I5
[0079] 与其它Str巧tomycessp.相比，产生那他霉素的Str巧tomycesnatalensis DS73871&DS73870 抵抗Colletotrichumgloeosporioides的抗真菌活性
[0080] 该实施例描述了产生那他霉素的菌株Streptomycesnatalensis DS73871&DS73870 和一些不产生那他霉素的Str巧tomycessp.仅griseus,S. griseoviridis和S.rochei)抵抗真菌植物病原体Colletotrichumgloeosporioides 的抗真菌活性的比较。所分析的不产生那他霉素的菌株获取自下列公共保藏： S.griseus(NRRLB1354)、S.griseoviridis(NRRL2427)和S.rochei(CBS939. 68)。
[0081] 根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是：所有变量W五倍被检测且预培养 时间（培养液）从3天增加至4天W使所有菌株完全生长。在28°C下培养6天后，测定对 Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272. 51)的菌落半径的真菌抑制。
[0082] 结果可在表5中找到。在所有样品中，与对照相比（无Streptomycessp.)，朝向相 对的Streptomyces物种的C.gloeosporioides的真菌半径明显减小。此外，与不产生那他 霉素的Streptomyces物种（在 7%-33%之间）相比，Str巧tomycesnatalensisDS73871 和DS73870二者均显示出更强的抑制效果（分别为56%和54% )。
[0083]连施俩I6
[0084]与其它Streptomycessp.相比，产生那他霉素的Streptomycesnatalensis DS73871&DS73870 抵抗F'usariumoxysporumf.sp.lycopersici的抗真菌活性 柳8日]在另一个实验中，比较产生那他霉素的Str巧tomycesnatalensis菌株DS73871&DS73870与不产生那他霉素的Streptomyces物种Snoursei和S.griseus的抵抗 Fusariumoxysporumf.sp.lycopersici的抗真菌活性。 W86]文献中充分描述了所有3种被选择的Str巧tomyces物种产生抗真菌组 分的能力。所分析的不产生那他霉素的菌株获取自下列公共保藏：Streptomyces noursei (CBS240. 57)和S. griseus(NRRLB1354)。
[0087] 根据实施例1中所述的方法进行实验，条件是：所有变量W五倍被检测且预培养 时间（培养液）从3天增加至4天W使所有菌株完全生长。在28°C下培养7天后，测定 F'usarium oxysporum f. sp. lycopersici(CBS414. 90)菌落半径的真菌抑制。
[0088]F'usarium0巧sporumf.sp.lycopersici(CBS414. 90)的菌落生长可在表 6 中找 至Ij。当针对Streptomyces物种挑战时，平均抑制区明显减小（在11% -60%之间）。然 而，与不产生那他霉素的Streptomyces物种（对于S.griseus和S.noursei,分别为11 % 和32% )相比，产生那他霉素的Streptomyces物种的真菌抑制明显更强（对于DS73870和 0573871，分别为60%和54%)。
[0089]连施俩I7
[0090] 与纯净的那他霉素相比，产生那他霉素的Streptomyces natalensis ATCC27448 抵抗Colletotrichum gloeosporioides的抗真菌活性
[0091] 在另一个实验中，在YME琼脂平板上培养产生那他霉素的菌株Streptomyces natalensis ATCC 27448 W测定琼脂培养基中的那他霉素浓度。在下一步中，将 Str巧tomyces natalensis菌株与一定浓度范围的纯净那他霉素（溶解在甲醇中）抵抗 Colletotrichum gloeosporioides的生物活性进行比较。
[0092] 将包含StreptomycesnatalensisATCC27448培养基的冻结小瓶转移至含20ml 酵母麦芽提取培养液（YME)的100ml带有挡板的锥形瓶中。将锥形瓶在培养摇床中在 28°C、180rpm下培养4天。将200μ1完全生长的培养液转移（一式两份地）至精确包含 20mlYME琼脂灯ΜΕΑ)的90mm培养皿。随后，利用无菌涂布器将接种物分散在培养基表面。 将平板在28°C下培养4天W增强完全的菌落覆盖。培养后，将平板冻干（Alpha2-4LD冻干 机，化rist)。将每个琼脂平板的冻干内容物转移至容量瓶中并用预热的MilliQ(50°C)填 充至终体积为500ml。揽拌该溶液持续约30分钟、离屯、（8分钟，21000rcf)并随后检测上 清液的那他霉素浓度。通过使用众所周知的基于文献的方法（HPLC-UV)来测定那他霉素浓 度并反算在培养基平板中的平均浓度。
[0093] 在下一步中，采用上述流程，在YMEA(每个90mm培养皿中20ml培养基）上繁殖完 全生长的Streptomyces natalensis ATCC 27448培养物。利用如实施例1中所述的生物检 测]，该培养物被用于针对Colletotrichum gloeospo;rioides(CBS272. 51)的生物检测。除 了经Streptomyces natalensis ATCC 27448接种的样品之外，通过使用未接种的琼脂栓塞 来获取对照样品。
[0094] 平行地，生产含不同浓度的纯净那他霉素的YMEA平板。因此，通过将那他霉素 (分析级，DSMFoodSpecialties,Delft,荷兰）溶解在甲醇（Merck,用于液相色谱的梯度 级，>99.9%)中来制备那他霉素储液。随后，Wl:19的比率将那他霉素储液加入到液 体YME琼脂中（45°C，通过降低含水量从而针对甲醇加入进行校正）并在培养基中彻底混 合。琼脂中的最终那他霉素浓度分别为：500、375、250、175、100、75、50、25、10和化9111那他 霉素。化pm的那他霉素YMEA平板仅包含5% (重量/重量）甲醇。将液体YEMA转移至培 养皿（每个90mm培养皿中20ml培养基，ΚΞ倍进行）。凝固后，YEM平板被用于如实施例 1中所述的针对Colletotrichumgloeosporioides(CBS272. 51)的生物检测。在同一天内 处理所有样品。
[00巧]在28°C下培养7天后，测定Colletotrichum gloeosporioides (CBS272. 51)的真 菌半径和抑制区（参见实施例1中所述的方法）。
[0096] 在琼脂培养基中预培养期间由Str巧tomycesnatalensisATCC27448产生的那 他霉素的平均浓度被测定为低于lOppm(但不是化pm)。通过将lOppm纯净的那他霉素直 接溶解在琼脂栓塞中，Colletotrichumgloeosporioides的抑制区没有由Sheptomyces natalensisATCC27448琼