脂栓塞产生的抑制区大（参见表7)。在高得多的浓度等级（约 375ppm)下，匹配到相似的抑制区。 阳〇巧]连施俩I8
[0098] 利用Str巧tomycesnatalensisDS73870和DS73871的种子处理对人为地用 化izoctoniasolani感染的生长在±壤中的窝宦的影响
[0099] 将从9日龄的MEA培养基琼脂平板（解育溫度为24°C)获得的化izoctonia solanUCBS323.84)溶解在水中。将真菌接种物巧〇1111八±壤）在全部±壤（90%泥炭、 10%沙）中彻底混合。在播种前2天，用经接种的±壤填充苗盘。每个苗盘包含约7. 5升 上壤。
[0100] 将来自Str巧tomycesnatalensis菌株DS73870 和DS73871 的冻结小瓶（甘 油储液）转移至含20ml酵母麦芽提取培养液（YME)的100ml带有挡板的锥形瓶中。将 锥形瓶在培养摇床（G24环境培养振荡器，New化unswickScientificCo.)中在28°C、 18化pm下培养4天。随后，对于每种菌株，将2ml培养的培养液转移至含200mlYME培养 液的500ml带有挡板的锥形瓶中。将培养基在28°C、ISOrpm下培养另外3天（轨道解育器 Inr200-010V,Gallenkamp)。测量到的培养基的细菌载量为6. 31ogC即/ml(DS73870)和 7.91ogC即/ml(DS73871)。最后，在冷却条件下，将样品运送至用在于溫室条件下的挑战研 究的实验室设施并在24小时内处理。 阳101] 在溫室实验室设施中，将包含S.natalensisDS73870和DS73871的培养基在水中 稀释4倍。然后，将所需量的窝宦种子（品种：Weston)浸泡在经稀释的S.natalensis接种 物中（1份种子和19份经稀释的传递介质）并连续摇动1小时（在120rpm、室溫下）。浸泡 之后，将种子空气干燥（1小时），然后直接种植在上壤中深约1cm处。除了经S.natalensis 处理的样品之外，在相同条件下处理未接种的对照种子，例外是：将它们浸泡在无菌的（未 接种的）传递介质中。
[0102] 每种处理重复检验4次。每次重复由含96粒种子的1个苗盘组成。根据EPP0指 南PP1/148 (2)、PP1/135(3)和PP1/152(4)进行试验。将处理维持在受控制的溫室条件 下并W设定的时间间隔诱水。播种后，每周评估种子、幼苗或植物的：萌发率、作物活力和疾 病严重度持续最长1个月。 阳1〇3] 表8(萌发率和作物活力）和表9(植物疾病严重度）总结了结果。化izoctonia solani对植物生命力的负面影响极其高，但运种影响通过加入到窝宦种子中的 S. natalensis菌株的活性被降低。
[0104] 表8中的结果显示：与利用无菌培养基的处理（对照）相比，当利用Streptomyces natalensis DS73870或DS73871菌株处理种子时，未受影响植物的数目增加。此外，与经S. natalensis处理的样品相比，对照样品中未萌发或者萌发后死亡（被归类为未出现） 的窝宦植物的量要高得多。另外，对于用S.natalensis DS73870或DS73871进行种子处 理的植物，植物的"作物活力"明显提高。此外，与对照相比，用S.natalensis DS73870或 DS73871进行种子处理的植物的植物疾病严重度被降低（参见表9)。
[01化]总之，通过向种子施用产生那他霉素的S. natalensis菌株，受真菌植物病原体影 响的作物的植物生长和生命力二者能够被增强。 阳106]表1:在YME琼脂平板上在28 °C下培养7天后，针对一些Streptomyces natalensis菌株检测的不同植物病原体的真菌半径 阳107]
阳10引
[0109]表2 :在ΥΜΕ琼脂平板上在28°C下培养7天或11天后，针对一些产生那他霉素的Streptomyces物种的菌株检测的不同植物病原体的真菌半径 阳110]
阳112]
[0113] 表3 :在ΥΜΕ琼脂平板上在28 °C下培养11天和25天后，针对Streptomyces natalensisDS73870 和DS73871 检测的Verticilliuma化〇-at;rum(CBS321.91)的真菌半 径 阳114]
阳116] 表4 :在ΥΜΕ琼脂平板上在28°C下培养28天后，针对Streptomycesnatalensis DS73870 和DS73871 检测的Cercosporazeae-maydis(CBS117757)的真菌半径 阳117]
[0118] 表5 :在YME琼脂平板上在28°C下培养6天后，针对一些StreptomycesSP.检测 的Colletotrichumgloeospo;rioides(CBS272. 51)的真菌半径 阳119]
阳12U 表6 :在ΥΜΕ琼脂平板上在28°C下培养7天后，针对一些Str巧tomyces sp.检测 的F'usarium oxysporum f. sp. lycopersici (CBS414. 90)的真菌半径 阳1。]
阳123] 表7 :琼脂栓塞生物检测。针对S.natalensisATCC27448和不同比 率的溶解在甲醇巧％重量/重量）中的纯净那他霉素检测的Colletotrichum gloeosporioides(CBS272. 51)的真菌半径。在28°C下培养7天后，在YME琼脂平板上产生 的结果。 阳124]
阳1巧]
阳1%] *溶解在含5%重量/重量甲醇的ΥΜΕΑ中，给出的浓度是琼脂栓塞的浓度
[0127] 表8:利用Str巧tomyces natalensis DS73870和DS73871的种子处理对人为地 用化izoctonia solani感染的生长在±壤中的窝宦的萌发率和作物活力的影响。 阳12引
阳 129]
[0130] *从播种日（第0天）开始测量 阳131] **未萌发或者萌发后死亡
[0132]表9 :利用Str巧tomycesnatalensisDS73870和DS73871的种子处理对人为地 用化izoctoniasolani感染的生长在±壤中的窝宦的植物疾病严重度的影响。
[0134] *从播种日（第0天）开始测量
[0135] **未萌发或者萌发后死亡
[01%] 参考义献
[0137] Qien GQ, Lu FP and Du LX (2008)，Natamycin production by Str邱tomyces gilvosporeus based on statistical optimization. J. Agric. Food Chem. 56:5057-5061.
[0138] Farid M, El-Enshasy HA, El-Diwany AI and El-Sayed, EA口000)，Optimization of the cultivation medium for natamycin production by Streptomyces natalensis. J. Basic Microbiol. 40:157-166.
[0139] El-Enshasy HA, Farid MA and El-Sayed, EA(2000)，Influence of inoculum type and cultivation conditions on natamycin production by Streptomyces natalensis. J. Basic Microbiol. 40:333-342.
[0140] He YL Wu JG, Lu FP and Du LX (2002) Fed-batdi fermentation to improve化Θ yield of natamycin. Med. Biotechnol. 9:224-226.
[0141] Liang JG, Xu Z化Liu TF, Lin HP and Cen PL(2008)，Effects of cultivation conditions on the production of natamycin with Streptomyces gilvosporeus LK-196. Enzyme Microb. Technol. 42:145-150.
[0142] Martin JF and McDaniel LE (1977)，Production of polyene macrolide antibiotics. Advances in Appl. Microbiol. 21:1-52.
[0143]
[0144]与被保藏的微生物相关的说明
[0145] (PCT Rule 13bis) 阳146]
[01^与被保藏的微生物相关的说明
阳150] (PCT Rule 13bis)
[0151]
[0152]表PCT/R0/134(1992 年 7 月）
【主权项】
1. 一种用于增强植物生长、作物产量或二者的方法，所述方法包括以下步骤：将至少 一种产生那他霉素的细菌菌株施用至种子、将要种植种子的基质或二者。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述菌株以包含农业上可接受的载体的组合物的 形式被施用。3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述组合物包含10LlO^fu/g载体。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述产生那他霉素的细菌菌株选 自Streptomyces natalensis菌株、Streptomyces gilvosporeus菌株和Streptomyces chattanoogensis菌株。5. 组合物，其包含产生那他霉素的细菌菌株和农业上可接受的载体。6. 种子，其包含至少一种产生那他霉素的细菌菌株或根据权利要求5的组合物。7. 根据权利要求6所述的种子，其中所述种子用至少一种产生那他霉素的细菌菌株或 根据权利要求5所述的组合物包被。8. 将要种植种子的基质，其包含根据权利要求5的组合物。9. 一种制备根据权利要求7的经包被种子的方法，所述方法包括以下步骤： a)提供种子， b)将包含至少一种产生那他霉素的细菌菌株或根据权利要求5的组合物的包衣添加 至所述种子。10. -种使植物生长的方法，所述方法包括以下步骤： a)将至少一种产生那他霉素的细菌菌株施用至种子、将要种植种子的基质或二者，和 b)使植物由所述种子生长。11. 一种生产作物的方法，所述方法包括以下步骤： a)将至少一种产生那他霉素的细菌菌株施用至种子、将要种植种子的基质或二者， b)将种子种植在基质中， c)使植物由所述种子生长以生产作物，和 d)收获所述作物。12. 产生那他霉素的细菌菌株作为生物杀真菌剂的用途。13. 产生那他霉素的细菌菌株作为植物生长强化剂和/或作物产量强化剂的用途。
【专利摘要】本发明涉及用于增强植物生长和作物产量的组合物。此外，本发明涉及这些组合物的生产和这些组合物的用途。CBS 13796520140520
【IPC分类】A01N63/00
【公开号】CN105431045
【申请号】CN201480030771
【发明人】露诗·艾美莉亚·威廉敏娜·唐纳斯, 曼杰·库马尔
【申请人】帝斯曼知识产权资产管理有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2014年5月28日
【公告号】EP3003048A1, US20160100586, WO2014191449A1