一种应用海洋寡糖提高刺参附着变态率的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种提高海洋水产动物幼虫附着变态率的方法，具体涉及一种应用海 洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，属于水产动物养殖和育苗技术领域。
【背景技术】
[0002] 随着人们生活水平的提高，人们对水产品的需求日益增长，这就要求加快水产养 殖业的健康发展，而育苗问题却是目前水产养殖业中的重要环节。刺参作为北方水产养殖 的重要产品，具有很高的营养保健和医用价值。近10余年来，随着全球海参自然资源日趋 枯竭与国内海参消费持续增长，国内刺参养殖呈现迅猛发展的态势，这促使了工厂化育苗 技术的产生、发展和成熟。刺参幼虫发育到一定阶段，具有附着变态的能力，遇到合适的附 着基，完成附着变态反应。在人工刺参育苗生产中，幼虫在附着变态阶段对外界环境因子的 变化比较敏感，容易引起幼虫大量死亡。幼虫附着变态成功与否往往决定着出苗量和育苗 的成败。因此提高幼虫的附着变态率，减少幼苗死亡成为人工育苗中一个亟待解决的问题。 壳寡糖是源于海洋虾蟹壳提取的一种氨基寡聚糖，具有抑制肠道有害菌生长、促进有益菌 增殖、抗氧化、促进吸收等多项生理功能，有望在刺参育苗阶段加以应用。
【发明内容】
[0003] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种操作简单，可有效提高刺参 幼虫附着变态率的方法。
[0004] 为实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0005] -种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，包括以下步骤：
[0006] ( -）、准备壳寡糖培养液：将壳寡糖溶于海水中配成浓度0. 001-1. 0克/升的工 作液，以未添加壳寡糖的海水为对照，每组至少设置三个平行处理；
[0007] (二）、壳寡糖培养液中诱导幼虫：用200目筛絹取发育到樽形幼虫时期的刺参幼 虫，放到步骤（一）的培养液中通氧气培养，诱导培养时间为8-24小时；
[0008] (三）、普通海水继续培养：将经步骤（二）诱导后的刺参幼虫用200目筛絹捞出， 放到设置有聚乙烯附着板的海水中继续培养；
[0009] (四）观察计数和计算附着变态率：经壳寡糖培养液诱导和普通海水继续培养后， 统计聚乙烯附着板上刺参幼苗摄食后所留空斑的数目，附着变态率=(附着变态幼虫数/ 总幼虫数）X100%，附着变态提高率=试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变 态率平均值。
[0010] 上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤（一）中，壳寡糖聚合度 在2~30之间，脱乙酰度在90%以上，平均分子量在300~6000Da之间。
[0011] 上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤（二）中，幼虫培养密度 为150-300个/L，壳寡糖诱导刺参幼苗培养时间为8-24小时。
[0012] 上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤（三）中，幼虫的培养密 度为150-300个/L，每升海水中至少放置表面积至少为0. 2平方米的（优选0. 2-0. 5)聚乙 烯附着板。
[0013] 上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤（三）中，饵料为鼠尾藻、 海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥中的一种一种或二种以上。
[0014] 本发明的有益之处在于：壳寡糖属于海洋虾蟹壳来源的动物寡糖，使用安全无毒， 整个诱导处理过程操作简便，易于实现，提高刺参苗种的出苗率，减少刺参幼苗在附着变态 中的死亡，有效增加了刺参育苗的经济效益。
【具体实施方式】
[0015] 下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施 例。
[0016] 实施例1-4
[0017] -、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度 设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中， 设置三个平行处理。
[0018] 二、培养液中诱导幼虫：用200目筛絹取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步 骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为8小时。
[0019] 三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛絹捞出，放到设置有 两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾 藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
[0020] 四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养40小时后观察计数，统计聚乙烯附着板 上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率=(附着变态幼虫数/总幼虫数）X100%， 附着变态提高率=试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
[0021] 不同浓度的壳寡糖诱导幼虫8小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表1。
[0022] 表1不同浓度壳寡糖诱导8小时对刺参附着变态率的影响
[0023]
[0025] 实施例5-8
[0026] -、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度 设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中， 设置三个平行处理。
[0027] 二、培养液中诱导幼虫：用200目筛絹取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步 骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为16小时。
[0028] 三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛絹捞出，放到设置有 两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾 藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
[0029] 四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养32小时后观察计数，统计聚乙烯附着板 上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率=(附着变态幼虫数/总幼虫数）X100%， 附着变态提高率=试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
[0030] 不同浓度壳寡糖诱导幼虫16小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表2。
[0031] 表2不同浓度壳寡糖诱导16小时对刺参附着变态率的影响
[0032]
[0033] 实施例 9-12
[0034] 一、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度 设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中， 设置三个平行处理。
[0035] 二、培养液中诱导幼虫：用200目筛絹取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步 骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为24小时。
[0036] 三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛絹捞出，放到设置有 两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾 藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
[0037] 四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养24小时后观察计数，统计聚乙烯附着板 上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率=(附着变态幼虫数/总幼虫数）X100%， 附着变态提高率=试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
[0038] 不同浓度壳寡糖诱导幼虫24小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表3。
[0039] 表3不同浓度壳寡糖诱导24小时对刺参附着变态率的影响
[0040]
[0041] 由实施例1-12的统计数据可知，以不同浓度的壳寡糖工作液诱导刺参樽形幼虫， 幼参的附着变态率有了不同程度的提高，尤其是浓度为〇. 1克/升的壳寡糖诱导刺参幼虫 24小时，对幼虫附着变态率的影响最为明显，附着变态率提高了 13.6%。同时，本发明采用 的壳寡糖来源于海洋虾蟹壳，无毒副作用，不会对刺参幼虫产生不良的影响，降低了人工诱 导刺参幼虫附着变态的成本，减少刺参幼虫在附着变态过程中的死亡，提高刺参幼苗的出 苗率，增加刺参育苗的经济收益。
【主权项】
1. 一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，其特征在于，包括以下步骤： (一） 、准备壳寡糖培养液：将壳寡糖溶于海水中配成浓度0. 001-1. 0克/升的工作液； (二） 、壳寡糖培养液中诱导幼虫：取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤（一） 的培养液中通氧气培养，诱导培养时间为8-24小时； (三） 、普通海水继续培养：将经步骤（二）诱导后的刺参幼虫捞出，放到设置有聚乙烯 附着板的普通海水中继续培养。2. 按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤（一）中，壳 寡糖聚合度在2~30之间，脱乙酰度在90%以上，平均分子量在300~6000Da之间。3. 按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤（二）中，幼 虫培养密度：150-300个/L。4. 按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤（三）中，幼 虫的培养密度：150-300个/L，每升海水中至少放置表面积为0. 2平方米的（优选0. 2-0. 5) 聚乙烯附着板。5. 按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤（三）中，饵 料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥中的一种或二种以上。
【专利摘要】本发明涉及一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，其特征在于，包括以下步骤：准备刺参幼虫培养液、培养液中诱导刺参幼虫、普通海水中继续培养、观察计数及计算刺参幼虫附着变态率，上述培养液包括：不同浓度的壳寡糖工作液、未添加壳寡糖的对照海水；上述壳寡糖工作液浓度为0.001-1.0克/升，诱导培养持续时间为8-24小时。本发明的有益之处在于：壳寡糖属于海洋虾蟹壳来源的动物寡糖，使用安全无毒，整个诱导处理过程操作简便，易于实现，提高刺参苗种的出苗率，减少刺参幼苗在附着变态中的死亡，有效增加了刺参育苗的经济收益。
【IPC分类】A01K61/00
【公开号】CN105613362
【申请号】CN201410715299
【发明人】尹恒, 许青松, 程立坤, 李曙光, 王文霞
【申请人】中国科学院大连化学物理研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年12月1日