专利名称：人血管内皮生长因子与颗粒酶b融合蛋白的纯化及应用的制作方法
技术领域：
生物医药基因工程抗血管生成药物细胞免疫室机体抗肿瘤、抗病毒免疫的主要形式。颗粒酶B(granzyme B，GraB)是细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞发挥细胞毒作用的主要效应分子，具有诱导靶细胞凋亡及裂解作用。杀伤细胞识别靶细胞后，释放其特有的杀伤颗粒，其中含有GraB。GraB在穿孔素的协助下进入靶细胞内，通过多条途径诱导靶细胞凋亡。一方面，它激活凋亡蛋白CPP32酶原成为有活性的CASPASE 3，启动一系列蛋白酶级联水解反应；另一方面，它直接进入细胞核内，激活多聚ADP核糖多聚酶(PARP)，凋亡核酸酶复合体CAD/ICAD等使细胞基因组DNA断裂；此外，它还激活其他的caspase，诱导细胞凋亡。
发明内容
用基因重组技术对血管内皮生长因子(VEGF)2-5外显子与颗粒酶B(GraB)基因进行重组，使VEGF2-5与GraB连接形成融合基因，原核分泌型表达系统表达重组VEGF-GraB融合蛋白，金属亲和层析法纯化重组蛋白，获得具有通过VEGF2-5与VEGFR的特异性结合，引导GraB靶向性地作用于新生血管内皮细胞的基因重组特异性抗血管生成药物。
重组VEGF-GraB融合蛋白模拟了生理性的细胞免疫机制，不必活化免疫细胞而直接提高机体的细胞免疫水平。它直接抑制和破坏新生的血管，只要有VEGFR存在，就能被重组蛋白识别，作用效率高。通过破坏新生的血管，能在肿瘤组织周边形成一层隔离带，抑制肿瘤的生长和转移。
权利要求
1.一种抗血管生成新药，将血管内皮生长因子(VEGF)2-5外显子与颗粒酶B(GraB)基因进行重组融合，用原核或真核细胞表达系统表达重组VEGF-GraB融合蛋白，获得特异性抗血管生成基因工程药物。
2.对血管内皮生长因子(VEGF)2-5外显子与颗粒酶B(GraB)基因进行部分增减后，表达并纯化融合蛋白及其应用技术。
3.让颗粒酶B(GraB)与其他基因进行重组融合，用原核或真核细胞表达系统表达重组融合蛋白的技术。
4.重组GraB蛋白在其他治疗方法的应用技术。
全文摘要
采用基因重组技术对血管内皮生长因子(VEGF)
文档编号C12N15/63GK1465702SQ0212458
公开日2004年1月7日 申请日期2002年6月21日 优先权日2002年6月21日
发明者曾位森 申请人:曾位森