专利名称：多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法
(一)、所属领域本发明涉及的是一种微生物固态发酵技术，特别是采用多株菌种混合培养固态发酵生产多维多酶高蛋白饲料的方法。
(二)、背景技术玉米、麸皮、酒糟、饼粕、作物秸秆以及粮食是常用的饲料。这些饲料常常是经过简单得粉碎、蒸煮等加工后直接同于喂养各种动物。这样不仅饲料中的有效成分利用率较低，造成了大量的浪费。而且动物长期食用这样的饲料，会造成营养不良、免疫力低下。减缓动物的生长速度或者是降低产蛋率。
(三)、发明内容本发明的目的在于提供一种可以增加饲料中的有效成份含量，提高饲料的有效利用率，提高饲养动物的有效产出率，减少饲养动物的发病率的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物制剂的方法。
本发明的目的是这样实现的先制备好种子培养基；将白地霉、产朊假丝酵母、扣囊拟内孢霉、谷氨酸棒杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、短乳杆菌菌种分别接种到种子培养基中，在30-35℃温度，有通风的条件下培养15-18小时；将培养成熟的各种子接种到由粮食或者是油料加工的副产品构成的固态发酵培养基中，其接种量是每种菌种各10％，在33±0.5℃的温度有通风的条件下发酵70-80小时；发酵物在不高于85℃的温度下进行快速干燥。本发明还可以包括可以这样一些特征1、所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的取玉米面20g，加水至100ml，用NaOH调PH至6.8，加热至90℃，按10u/克玉米面的比例加入α-淀粉酶，继续保温25-35分钟，冷却至30℃。2、所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的取豆粕10g，加入2.0g的葡萄糖、0.1g的KH2PO4、0.05g的MgSO4，加水至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。3、所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的按葡萄糖5.0％、(NH4)2SO40.4％、玉米浆1.2％、KH2PO40.05％、K2HPO40.05％、MgSO40.04％、VB50ug/100ml、VH50ug/100ml和余量的水的比例混合至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。4、所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的按葡萄糖10g、尿素1.0g、玉米浆1.0g、KH2PO40.1g、MgSO40.05g和余量的水的比例混合至100ml，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。5、所述的固态发酵培养基是采用这样的方法来制备的按玉米面400g、麸皮400g、豆粕140g、(NH4)2SO420g、尿素40g的比例将各原料混合，在121℃温度下灭菌处理25-35分钟，冷却。6、所述的在有通风的条件下发酵是指在前18小时进行间歇通风；18-24小时每小时通风3次、每次5分钟；24-48小时加大通风量和通风次数；48-60小时减小通风量和通风次数；60小时后停止通风。
本发明通过多菌种固态发酵的方法，可以将玉米、麸皮、酒糟、饼粕、作物秸秆以及粮食转化成多维多酶高蛋白微生物饲料。是一条废物综合利用、提高产品附加值的最佳途径。通过本发明的方法处理后饲料中含有大量的微生物活细胞、微生物酶类、维生素及其他生物活性物质。这些物质对动物的消化吸收、生长发育、机体免疫，增加动物肠道内有益菌群，改善肠道微生态等都具有明显的作用。经本发明的方法处理后产品中的蛋白质含量可提高15％以上，必须氨基酸可以增加1倍以上，第一限制性氨基酸-赖氨酸提高1.5-2.0倍。产品中还含有丰富的维生素和大量的微生物酶类。其中包括纤维素酶、果胶酶、植酸酶、脂肪酶、β-淀粉酶、糖化酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、木聚糖酶等。将本发明的方法制得的产品添加到动物饲料中，给动物喂养这种饲料，可以增加动物的抗病能力，促进动物快速生长，降低料肉比，提高动物肉的质量，提高奶牛的产奶量和鸡的产蛋量。采用本发明的方法生产的饲料，可以生产无抗奶等健康安全的食品。产品集活菌体、微生物酶、多种维生素、多种氨基酸于一体，营养丰富且平衡。本发明还是解决蛋白资源不足的重要途径。通过微生物发酵、大量的菌体细胞繁殖，同时合成了大量的菌体蛋白和有益的代谢产物，这些菌体蛋白都是优质的饲料蛋白。本发明的主要原料是麸皮、玉米面、稻糠、酒糟、秸秆及粮食加工副产物，价廉易得，经发酵后大大提高其营养价值和经济价值。
(四)、具体实施方案下面举例对本发明做更详细的描述首先制备种子培养基，种子培养基有以下四种制备方法1、取玉米面20g，加水至100ml，用NaOH调PH至6.8，加热至90℃，按10u/克玉米面的比例加入α-淀粉酶，继续保温25-35分钟，冷却至30℃，制的第一种种子培养基，以下简称为M1。2、取豆粕10g，加入占豆粕重量2％的葡萄糖、0.1％的KH2PO4、0.05％的MgSO4，加水至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第二种种子培养基，以下简称为M2。3、按葡萄糖5.0％、(NH4)2SO40.4％、玉米浆1.2％、KH2PO40.05％、K2HPO40.05％、 MgSO40.04％、VB50ug/100ml、VH50ug/100ml和余量的水的比例混合至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第三种种子培养基，以下简称为M3。4、按葡萄糖10g、尿素1.0g、玉米浆1.0g、KH2PO40.1g、MgSO40.05g和余量的水的比例混合至100ml，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第四种种子培养基，以下简称为M4。本发明所选用的菌种包括白地霉(Geotrichum candidum Link)简称G61、产朊假丝酵母(Comdidautrilis)简称Cu81、扣囊拟内孢莓(Endomycopsis fibuligera)简称E45、谷氨酸棒杆菌(Corynebecterium sp)简称As702、枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)简称Bs64、黑曲霉(Aspergillus niger)简称An07、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)简称LB02。将这些菌种分别接入上述一种培养基中，在30-35℃温度，通风的条件下培养15-18小时。将培养成熟的各种子接种到固态发酵培养基中，其接种量是各10％，在33±0.5℃的温度有通风的条件下发酵70-80小时。固态发酵培养基是采用这样的方法来制备的按玉米面400g、麸皮400g、豆粕140g、(NH4)2SO420g、尿素40g的比例将各原料混合，在121℃温度下灭菌处理25-35分钟，冷却。发酵物在不高于85℃的温度下进行快速干燥；将干燥物添加到饲料基料中，然后进行造粒，制成颗粒饲料。具体添加量根据猪、鸡、鸭、牛、羊、马、鱼、虾、宠物、貂等动物的营养需求而有所调整。
实施例二。首先按以下四种制备方法制备好种子培养基1、取玉米面20g，加水至100ml，用NaOH调PH至6.8，加热至90℃，按10u/克玉米面的比例加入α-淀粉酶，继续保温25-35分钟，冷却至30℃，制的第一种种子培养基，以下简称为M1。2、取豆粕10g，加入占豆粕重量2％的葡萄糖、0.1％的KH2PO4、0.05％的MgSO4，加水至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第二种种子培养基，以下简称为M2。3、按葡萄糖5.0％、(NH4)2SO40.4％、玉米浆1.2％、KH2PO40.05％、K2HPO40.05％、MgSO40.04％、VB50ug/100ml、VH50ug/100ml和余量的水的比例混合至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第三种种子培养基，以下简称为M3。4、按葡萄糖10g、尿素1.0g、玉米浆1.0g、KH2PO40.1g、MgSO40.05g和余量的水的比例混合至100ml，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃，制的第四种种子培养基，以下简称为M4。
选择G61、Cu81、E45、As702、Bs64、An07、LB02为发酵菌种。
将发酵菌种分别接入种子培养基中，具体可以是将G61、Cu81、E45分别接入M4或者是M1中，An07接入M4中，在30-32℃温度，通入无菌空气，通风比为1∶0.2-0.3，培养16小时；将Bs64、LB02、As702分别接入M2、M3中通气培养，培养温度为35℃、培养时间为16小时。
将培养成熟的各种子接种到固态发酵培养基中，其接种量是各10％，在33±0.5℃的温度有通风的条件下发酵70-80小时。固态发酵培养基是采用以下两种方法中的任何一种来制备的1、按玉米面400g、麸皮400g、豆粕140g、(NH4)2SO420g、尿素40g的比例将各原料混合，在121℃温度下灭菌处理25-35分钟，冷却。2、秸秆400g、玉米面300g、麸皮240g、(NH4)2SO420g、尿素40g的比例将各原料混合，在121℃温度下灭菌处理25-35分钟，冷却。发酵物在不高于85℃的温度下进行快速干燥；将干燥物添加到饲料基料中，进行造粒。具体添加量根据猪、鸡、鸭、牛、羊、马、鱼、虾、宠物、貂等动物的营养需求而有所调整。
权利要求
1.一种多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是先制备好种子培养基；将白地霉、产朊假丝酵母、扣囊拟内孢霉、谷氨酸棒杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、短乳杆菌菌种分别接种到种子培养基中，在30-35℃温度，有通风的条件下培养15-18小时；将培养成熟的各种子接种到由粮食或者是油料加工的副产品构成的固态发酵培养基中，其接种量是每种菌种各10％，在33±0.5℃的温度有通风的条件下发酵70-80小时；发酵物在不高于85℃的温度下进行快速干燥。
2.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的取玉米面20g，加水至100ml，用NaOH调PH至6.8，加热至90℃，按10u/克玉米面的比例加入α-淀粉酶，继续保温25-35分钟，冷却至30℃。
3.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的取豆粕10g，加入2.0g葡萄糖、0.1g的KH2PO4、0.05g的MgSO4，加水至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。
4.据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的按葡萄糖5.0％、(NH4)2SO40.4％、玉米浆1.2％、KH2PO40.05％、K2HPO40.05％、MgSO40.04％、VB50ug/100ml、VH50ug/100ml和余量的水的比例混合至100ml，调PH至7.0-7.2，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。
5.据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的种子培养基是采用这样的方法来制备的按葡萄糖10g、尿素1.0g、玉米浆1.0g、KH2PO40.1g、MgSO40.05g和余量的水的比例混合至100ml，在121℃温度下灭菌处理10-15分钟，冷却至30℃。
6.据权利要求1-5任何一项所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的固态发酵培养基是采用这样的方法来制备的按玉米面400g、麸皮400g、豆粕140g、(NH4)2SO420g、尿素40g的比例将各原料混合，在121℃温度下灭菌处理25-35分钟，冷却。
7.据权利要求1-5任何一项所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的在有通风的条件下发酵是指在前18小时进行间歇通风；18-24小时每小时通风3次、每次5分钟；24-48小时加大通风量和通风次数；48-60小时减小通风量和通风次数；60小时后停止通风。
8.据权利要求6任何一项所述的多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，其特征是所述的在有通风的条件下发酵是指在前18小时进行间歇通风；18-24小时每小时通风3次、每次5分钟；24-48小时加大通风量和通风次数；48-60小时减小通风量和通风次数；60小时后停止通风。
全文摘要
本发明涉及的是一种多菌种固态发酵生产多维多酶高蛋白微生物菌剂的方法，先制备好种子培养基；将白地霉、产朊假丝酵母、扣囊拟内孢霉、谷氨酸棒杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、短乳杆菌菌种分别接种到种子培养基中，在30－35℃温度，有通风的条件下培养15－18小时；将培养成熟的各种子接种到由粮食或者是油料加工的副产品构成的固态发酵培养基中，其接种量是每种菌种各10％，在33±0.5℃的温度有通风的条件下发酵70－80小时；发酵物在不高于85℃的温度下进行快速干燥。本发明通过多菌种固态发酵的方法，可以将玉米、麸皮、酒糟、饼粕、作物秸秆以及粮食转化成多维多酶高蛋白微生物饲料。使饲料中含有大量的微生物活细胞、微生物酶类、维生素及其他生物活性物质。
文档编号C12N1/14GK1552233SQ03133400
公开日2004年12月8日 申请日期2003年5月26日 优先权日2003年5月26日
发明者梁金钟, 张智, 赵云财, 吕伟民, 麻名汉, 范洪臣, 陈成, 徐速 申请人:哈尔滨中冠生物工程有限公司