专利名称：一种增强免疫力的保健酒及其制备方法
技术领域：
本发明属于保健品的技术领域，更具体地说，本发明涉及一种增强免疫力的保健酒。
背景技术：
白酒历史源远流长，成为人们生活中不可缺少的一种饮品。随着历史的发展，时代的进步，人们生活水平不断提高，观念也在不断更新，要求饮酒时，不仅能享受到饮酒的快乐，而且要保证身体的健康。珍爱生命，关注健康成为人们的普遍共识。生活中人们之所以容易受外界细菌侵入而生病，主要原因是本身免疫力功能低下造成的，科学合理的增强饮食能够有效地提高自身免疫功能，预防疾病发生。在现有技术中，在具有保健效果的保健酒中，多为由多种中药在纯白酒中浸泡而成，虽然能达到其保健效果，但是其颜色、口味发生了很大变化，酒体协调性差，失去原有白酒独有的风格。
发明内容
本发明为了解决保健酒在达到增强免疫力的同时失去原有酒的颜色、口味和风格的问题，提出了一种以西洋参、甲壳素、麦冬、白酒为原料的保健酒。
具体技术内容如下。
一种增强免疫力的保健酒，由以下重量份的原料制成西洋参8～12份，甲壳素25～35份，麦冬3～7份，白酒450～550份。
本发明的保健酒优选由以下重量份的原料制成西洋参10份，甲壳素30份，麦冬5份，白酒480份。
所述的白酒的度数优选为30～60。
本发明的保健酒的一种制备方法，包括以下步骤(1)将西洋参和麦冬粉碎，过20目的筛子；(2)在西洋参和麦冬中加入西洋参和麦冬重量之和的4～6倍重量的质量百分比浓度为50％的乙醇，在95℃的温度下回流1～3小时，用400目的过滤机以3000rpm的转速过滤，得到提取液，再重复提取和过滤2次，合并提取液；(3)将合并的提取液减压浓缩至相对密度为1.35时，得到浸膏；(4)将浸膏、甲壳素和白酒混合配制，得到所述的保健酒。
所述的白酒可以从红星酿酒总厂买到。所述的甲壳素来源于广州凯利生物制剂制品厂，等级为优质品级。
功效成分及含量每100ml含有50～70mg总皂甙。
使用方法及用量每日1次，每次50ml。
适宜人群为免疫力低下者，不适宜人群为少年儿童。
保质期为2年。
本发明的保健酒具有增强免疫力的效果。
西洋参(panaxquinguefolium)为名贵补药，主要产于美国、加拿大，我国移种称为种洋参，处方名为西洋参、花旗参、种洋参。主要功效成分为(R0Rb1Rb3RcRdReRfRg1Rg2Rg3Rh1Rao)等。药理试验表明人参皂甙具有抗脂质过氧化，明显增加脑内M胆碱受体的数目。改善记忆，促进蛋白质合成，调节免疫等多种重要生物学功能。
麦冬(ophiopogon japoninicus)含有多种甾体皂甙等功效成分。药理试验显示麦冬具有以下功能升高白细胞，延长抗体存在时间，提高免疫功能和核酸合成率，促进抗体、补体，干扰素、溶菌酶等免疫物质产生。
甲壳素(chtin)是来自甲壳类动物的天然高分子多聚糖，主要从海洋生物蟹和虾的壳中提取，甲壳素脱乙酰基后能溶于水称为壳聚糖(chitosan)，它可以降低血液中胆固醇，调节体液最佳酸碱度在pH为7.4，活化人体细胞，对细胞具有诱导和修复作用，增强机体免疫作用。
本发明的保健酒委托湖南省疾病预防控制中心进行了检验，证实具有以下功能和特点。
本发明的保健酒具有增强免疫力功能。
1材料和方法1.1样品本发明实施例1的保健酒，为透明液体，人口服推荐剂量为50ml/人/天，提供5倍浓缩液供试验用，折合人口服推荐剂量为10ml(浓缩液)/人/天。
1.2实验动物与分组清洁级昆明种雄性小鼠120只，体重为18g-22g，由中南大学实验动物学部提供，批准证号为湖南省医动字第20-011号。每40只分为1组，共三组。免疫I组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行脏体比值测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫III组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定。
1.3实验环境条件温度23℃-26℃，湿度56％-68％，实验动物房合格证号为026号。
1.4剂量选择及样品处理据人体口服推荐量，相当于每日0.167mL/kg·bw设本发明保健酒低、中、高剂量分别为0.83mL/kg·bw、5.00mL/kg·bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。取样品加蒸馏水配制所需浓度，对照组予以等体积的蒸馏水，分别给予受试动物灌胃，每天灌胃一次，灌胃体积为0.2mL/10g·bw，连续30天。
1.5主要仪器与试剂动物台称、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、液体闪烁仪、酶标仪、显微镜等。
无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板，96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。
绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank’s液(PH7.2-7.4)、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、1％冰醋酸，1mol/L的HCL溶液，酸性异丙醇(96mL异丙醇加1mol/L的HCL溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(PH7.2-7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、其琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸纳、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、1％的NP40、印度墨汁、0.1％的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等。
1.6实验方法1.6.1脏器/体重比值测定称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。
1.6.2迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射2％(v/v)SRBC(0.2M1/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20ul/每鼠)，于注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。
1.6.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’s液洗3次，每次离心10分钟(1000rpm)。然后将细胞悬浮于2mL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×106个/mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加50uLConA液(相当于5ug/mL)，另一孔作为对照，置5％二氧化碳，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50Ul/孔，继续结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后将此液体用酶标仪测定，波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光度值表示。
1.6.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(200r/min)10min，将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。将免疫后4天的小鼠处死，取脾，轻轻撕碎，用Hanks液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5mL Hanks液中。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加入用SA液配制的10％SRBC50ul(v/v)/20ul脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA液稀释的补体(1∶10)加入到玻片凹槽内，继续温育1.5h后计数溶血空斑数。
1.6.5半数溶血值(HC50)的测定取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积RBC0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为200倍，取1mL置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1∶10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min，取上清1mL，加都氏试剂3mL。同时取10％(v/v用SA缓冲液配制)压积SRBC0.25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算半数溶血值(HC50)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数1.6.6小鼠碳廓清实验小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉从取血20ul，加入到2mLNa2CO3溶液中摇匀。以Na2CO3溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾，称重，计算吞噬指数a。
1.6.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积的鸡红细胞(2000rpm，10min)悬液1mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，取腹腔巨噬细胞洗液1mL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇∶丙酮(1∶1)固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。
1.6.8NK细胞活性的测定(同位素3H-TdR测定法)取传代后24h生长良好的YAC-1细胞(存活率＞95％)按1×106/mLYAC-1细胞悬液加3H-TdR10μCi进行标记，于37℃5％二氧化碳培养箱中培养2h，每30min振荡1次，标记后的细胞用培养液洗涤3次，重悬于培养液中，使细胞浓度为1×105个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s洗涤3次，每次1000rpm离心10min，再用2mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液悬浮，用台酚兰染色计数(活细胞数应在95％以上)，调整细胞浓度为1×107个/mL。在96孔板中每孔加100uL标记的靶细胞，试验孔加100uL效应细胞，空白对照孔加100uL培养液，最大释放孔加100uLTriton X-100。每个样品设3个复孔，置5％二氧化碳，37℃培养4h。用多头细胞取集器取集于玻璃纤维滤纸上，用液闪仪测定每分钟脉冲数(cpm)。
NK细胞活性＝(1-实验孔cpm/(空白对照孔cpm-最大释放孔cpm))×100％1.7实验数据统计用Excel/Spss软件进行统计分析。
2结果1.1本发明的保健酒对小鼠体重的影响由表1-4可见，各剂量组实验初、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长对照相比，无显著性差异(P＞0.05)。
表1各组小鼠的初始体重(x±s)
表2各组小鼠的中期体重(x±s)
表3各组小鼠的结束体重
表4各组小鼠的体重增长(x±s)
2.2本发明的保健酒对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响表5本发明的保健酒对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，对小鼠的脾脏/体重和胸腺/体重比值无显著影响。
2.3本发明的保健酒对小鼠细胞免疫功能的影响2.3.1本发明的保健酒对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响表6本发明的保健酒对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响(x±s)
由表6可知，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，剂量组小鼠足跖肿胀度与对照组比较有增高趋势，中、高剂量组与对照组比较，差异具有显著性。
2.3.2本发明的保健酒对小鼠ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，各剂量组对小鼠淋巴细胞转化能力未见明显影响。
表7本发明的保健酒对小鼠淋巴细胞转化能力实验的影响(x±s)
2.4本发明的保健酒对体液免疫的影响2.4.1本发明的保健酒对小鼠抗体生成细胞数的影响表8本发明的保健酒对小鼠抗体生成细胞数的影响
由表8可知，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较有增高趋势，高剂量组与对照组比较，差异具有显著性。
2.4.2本发明的保健酒对小鼠半数溶血值(HC50)的影响表9本发明的保健酒对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(x±s)
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，剂量组小鼠半数溶血值与对照组比较有增高趋势，中、高剂量组与对照组比较，差异具有显著性。
2.5本发明的保健酒对小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响2.5.1本发明的保健酒对小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的影响表10本发明的保健酒对小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的影响(x±s)
由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，剂量组小鼠吞噬指数与对照组比较有增高趋势中、高剂量组小鼠吞噬指数显著高于对照组，差异有显著性。
2.5.2保健酒对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响表11-1保健酒对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响(x±s)
表11-2保健酒对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响(x±s)
由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30，各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力未见明显影响。
2.6本发明的保健酒对小鼠NK细胞活性的影响表12保健酒对小鼠NK细胞活性的影响
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的保健酒30天，各剂量组对小鼠NK细胞活性未见明显影响。
3结论经口给予小鼠0.83mL/kg·bw、1.67mL/kg·bw、5.00mL/kg·bw剂量的保健酒30天，能提高小鼠的迟发型变态反应、半数溶血值、抗体生成细胞数、单核一巨噬细胞碳廓清的能力。对小鼠体重增长、胸腺体重比值、脾脏体重比值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力、小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、NK细胞的活性均无明显影响。提示该样品具有增强免疫力功能。
本发明的保健酒具有安全无毒的特点。
本发明的保健酒按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行安全性毒理学评价，结果如下1 急性经口LD50结果对雌、雄小鼠的急性经口LD50均大于21500mg/kg·bw，属无毒物。
2 三项遗传毒性试验结果三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)结果均为阴性。
3 30天喂养结果以4.2mL/kg·bw、8.3mL/kg·bw、16.7mL/kg·bw剂量的保健酒给大鼠灌胃30天，试验期间，各剂量组大鼠体重增长、事务利用率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。雌、雄鼠血生化指标、血常规指标及肝/体、脾/体、肾/体、雄鼠睾/体比值与对照比较差异均无显著性(P＞0.05)。肝、脾、肾、胃、十二指肠、睾丸(卵巢)组织病理检查无明显损害。提示送检样品30天喂养对大鼠各项观察指标未产生明显毒副作用。
具体实施例方式
下面以实施例的方式进一步解释本发明，但本发明不局限于实施例。
实施例1(1)将10kg西洋参和5kg麦冬粉碎，过20目的筛子；(2)在西洋参和麦冬中加入200kg的质量百分比浓度为50％的乙醇，在95℃的温度下回流2小时，用400目的三足框式离心过滤机以3000rpm的转速过滤，得到提取液，再重复提取和过滤2次，合并提取液；(3)将合并的提取液减压浓缩至相对密度为1.35(50℃)时，得到浸膏；(4)将步骤(3)得到的浸膏、30kg甲壳素和483kg的白酒混合配制，得到所述的保健酒。白酒为承德九龙实业股份有限公司的九龙醉牌36度的浓香型白酒。甲壳素为广州凯利生物制剂制品厂产品。
实施例2(1)将8kg西洋参和7kg麦冬粉碎，过20目的筛子；(2)在西洋参和麦冬中加入180kg的质量百分比浓度为50％的乙醇，在95℃的温度下回流2小时，用400目的三足框式离心过滤机以3000rpm的转速过滤，得到提取液，再重复提取和过滤2次，合并提取液；(3)将合并的提取液减压浓缩至相对密度为1.35(50℃)时，得到浸膏；(4)将步骤(3)得到的浸膏、35kg甲壳素和540kg的白酒混合配制，得到所述的保健酒。白酒为承德九龙实业股份有限公司的九龙醉牌38度的浓香型白酒。甲壳素为广州凯利生物制剂制品厂产品。
实施例3(1)将12kg西洋参和4kg麦冬粉碎，过20目的筛子；(2)在西洋参和麦冬中加入220kg的质量百分比浓度为50％的乙醇，在95℃的温度下回流1.5小时，用400目的三足框式离心过滤机以3000rpm的转速过滤，得到提取液，再重复提取和过滤2次，合并提取液；
(3)将合并的提取液减压浓缩至相对密度为1.35(50℃)时，得到浸膏；(4)将步骤(3)得到的浸膏、30kg甲壳素和470kg的白酒混合配制，得到所述的保健酒。白酒为承德九龙实业股份有限公司的九龙醉牌36度的浓香型白酒。甲壳素为广州凯利生物制剂制品厂产品。
权利要求
1.一种增强免疫力的保健酒，其特征在于它由以下重量份的原料制成西洋参8～12份，甲壳素25～35份，麦冬3～7份，白酒450～550份。
2.根据权利要求1所述的保健酒，其特征在于它由以下重量份的原料制成西洋参10份，甲壳素30份，麦冬5份，白酒480份。
3.根据权利要求1或2所述的保健酒，其特征在于所述的白酒的度数为30～60。
4.一种权利要求1所述的保健酒的制备方法，其特征在于它包括以下步骤(1)将西洋参和麦冬粉碎，过20目的筛子；(2)在西洋参和麦冬中加入西洋参和麦冬重量之和的4～6倍重量的质量百分比浓度为50％的乙醇，在95℃的温度下回流1～3小时，用400目的过滤机以3000rpm的转速过滤，得到提取液，再重复提取和过滤2次，合并提取液；(3)将合并的提取液减压浓缩至相对密度为1.35时，得到浸膏；(4)将浸膏、甲壳素和白酒混合配制，得到所述的保健酒。
全文摘要
一种增强免疫力的保健酒属于保健品技术领域，以西洋参、麦冬、甲壳素和白酒为原料制成，解决了现有保健酒失去原有颜色、口味和风格的问题，具有增强免疫力的功效，保留了原有白酒的色、香、味和风格。
文档编号C12G3/04GK1616062SQ200410080510
公开日2005年5月18日 申请日期2004年9月30日 优先权日2004年9月30日
发明者张 林 申请人:张 林