专利名称：一种促进细菌快速增殖的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种促进细菌快速增殖的培养基，特别涉及一种在常规培养基中加入能够促进细菌快速增殖的电气石或电气石处理水。
背景技术：
微生物的培养和生产，一般配以含碳、氮、钙、磷、钾、硫、镁等必需的常量和微量元素的有机物质和无机物质及一定量的水，在一定条件下培养。用这种的方法培养微生物存在着菌细胞数量少，酶活力低等缺点。此外，一些微生物的分离、培养与鉴定，往往需要较长时间，如肠道致病菌的分离培养，一般需培养18小时以上，才能形成1mm以上的菌落；广泛应用于种植业、水产、能源的光合细菌的生长周期高达7天。随着微生物在医药、环保、农业、生物能源等方面的广阔应用，人们对微生物资源重要性的认识，微生物的培养技术受到了广泛的重视。促细菌生长物质是一类通过直接或间接作用于细菌生长代谢过程而加速细菌生长繁殖速度或为细菌生长繁殖所必需的物质的总称。对其进行有效利用和机理研究具有实际意义。在微生物检验方面，它可以加快传统培养对细菌的分离鉴定，并使样品中菌数快速达到基因探针、ELISA、单抗等现代技术的需要，缩短检测时间；在生物工程方面，可提高载体菌的生长繁殖速度，增加表达产物的产量；另外，还可用于双歧杆菌、光合细菌等经济菌类的大量生产以满足各种需要。目前国内外关于促细菌生长物质的研究主要包括应用如稀土、中草药。然而，研究发现不同含量不同种类的中草药、稀土对不同菌株生长具有不同影响。鉴于促细菌生长物质在细菌检验、生物工程及生产方面的应用价值，加大此方面的研究力度是很必要的。
近年来研究表明，水分子团簇变小，水的溶解力、渗透力、代谢力、扩散力、乳化力均有所增强，从而具有一定的“活化”作用，在一定程度上可以增强生物体的新陈代谢、血脂代谢、酶活性以及免疫功能。电气石是一种以含硼为特征的铝、钠、铁、钙、镁的环状硅酸盐晶体矿物，我国具有非常丰富的电气石资源。由于电气石存在的永久性自发电极，在其表面厚度十几微米范围内存在107～104V/m的高场强，对水的结构和活性产生极大的影响；电气石能够自发的调节溶液pH值趋向弱碱性，对水溶液的pH具有缓冲作用；电气石能发射远红外线，常温下发射远红外波长4～14um，亦能够有效地提高水的活性、增强水的功能。
参考文献[1]朱章玉，俞吉安，林志新，等.光合细菌的研究及其应用[M].上海交通大学出版社，1991，15-21[2]陈绍铭，郑福寿.水生生物学实验法[M].北京海洋出版社，198580-85[3]中国微生物菌种保藏管理委员会.中国菌种目录[M].北京轻工业出版社，1983，404.
发明内容
本发明的目的是提供一种能促进细菌快速增殖的培养基。
一种能促进细菌快速增殖的培养基在常规培养基中加入促进细菌快速增殖的强化培养物，所述的强化培养物为电气石或电气石处理水。
所述的促进细菌快速增殖的培养基中，以重量百分数计电气石在常规培养基中的添加量为0.1～10％。
所述的电气石处理水，是按电气石与水的质量比不低于0.5∶100的比例将电气石放入水中，至少放置30分钟后过滤所得的滤液。本发明中电气石水制备过程可以采用静置，也可采用振荡或搅拌。
本发明在常规培养基中加入具有促进细菌快速增殖功能的电气石或电气石处理水，一方面，利用电气石具有的永久性自发电极和发射远红外线等功能，改变了水分子簇结构，减少水分子簇中的分子个数，增加水的生物膜透过率，增强生物体的新陈代谢功能，增强细胞活力，达到改善生物体机能的效果；另一方面，电气石是一种生态智能型材料，能够自发的调节溶液pH值趋向弱碱性，对水溶液的pH具有缓冲作用，而恒定的酸碱平衡是保持细菌正常代谢的重要条件。因此，本发明将电气石具有的改变水分子团簇结构和对水溶液的pH缓冲作用有机的结合起来，提供了一种功能性细菌培养基的配制方法。
本发明作为一种促进细菌快速增殖的培养基，与常规培养基相比有着明显的促进细菌生长，缩短培养时间的效果。用该培养基培养沼泽红假单胞菌表明，沼泽红假单胞菌对数生长期提前3-7小时，且稳定期长；鉴别培养基培养沙门氏菌、痢疾菌培养10小时生长的菌落可达1mm或1mm以上，相当于常规培养基上18小时生长的菌落，缩短了1/3时间，临床上标本标出率亦不低于常规方法；以改良罗氏培养基为基础的快速促进细菌增殖的培养基，对结核杆菌的培养效果明显高于改良罗氏培养基。
具体实施例方式
本发明在常规培养基中加入具有促进细菌快速增殖电气石或电气石处理水，使得该培养基具有了促进细菌快速增殖的功效。
所述的常规培养基是指基于使用者的使用目的及其自有的细菌培养装置而选用的培养基，其成分和含量由所确定的细菌品种及使用目的所确定。
所述的电气石，是一种以含硼为特征的铝、钠、铁、钙、镁的环状硅酸盐晶体矿物，其化学结构通式[1]可表示为XY3Z6Si6O18(BO3)3W4，式中X＝Na、Ca、K或空位，Y＝Mg2+、Fe2+、Mn2+、Al、Fe3+、Mn3+、Li，Z＝Al、Fe3+、Cr3+、Mg，W＝OH、F、O；三方晶系，C3v5-R3m，晶体结构由[Si6O18]复三方环、[BO3]三角和[Y-O5(OH)]三重八面体组成，电气石含量不低于40％，平均粒径为0.1～10um，主要分布在我国的新疆、云南、广西、内蒙古、山西等地。
本发明结合以下实例作进一步的说明。
实施例1参照文献[1]配制光合细菌RCVBN培养基，按0.1％的比例将粒径为10um的电气石加入配制好的光合细菌RCVBN培养基，灭菌，即为促进光合细菌快速增殖的培养基。
在该促进光合细菌快速增殖的培养基中接种沼泽红假单胞菌，以常规光合细菌RCVBN培养基为对照，培养沼泽红假单胞菌。与对照组相比，促进光合细菌快速增殖的培养基对红假单胞菌的细胞形态具有明显的影响，细胞尺寸明显大于对照组；OD值的测定结果也表明促进光合细菌快速增殖的培养基中的沼泽红假单胞菌对数生长期提前3-7小时，且稳定期长。
实施例2准确称取100g粒径为0.1um的电气石投入1000ml蒸馏水中，搅拌30分钟后，离心，取上清液过滤除菌后即为电气石处理水。该电气石处理水替代蒸馏水按照文献[1]配制光合细菌RCVBN培养基，即为促进光合细菌快速增殖的培养基。
在该促进光合细菌快速增殖的培养基中接种沼泽红假单胞菌，以常规光合细菌RCVBN培养基为对照，培养沼泽红假单胞菌，测定沼泽红假单胞菌的脱氢酶活力。结果显示用常规培养基培养的细菌的细胞脱氢酶活力最适pH值为8，pH值增加或减少均使脱氢酶活力降低；而用促进光合细菌快速增殖的培养基培养的细菌的细胞脱氢酶活力受pH值的影响较小，在pH值为5～11范围内脱氢酶的pH稳定性很好，显示了促进光合细菌快速增殖的培养基对沼泽红假单胞菌细胞具有较宽广的pH值稳定范围；促进光合细菌快速增殖的培养基培养的沼泽红假单胞菌脱氢酶活力有明显提高，与常规培养基相比，使细胞脱氢酶活力提高34～69％。
实施例3准确称取100g粒径为2.0um的电气石投入1000ml蒸馏水中，静置1小时后，离心，取上清液过滤除菌后即为电气石处理水。该电气石处理水替代蒸馏水根据文献[2]配置亚硝化细菌培养基和硝化培养基各1000ml，分别加入50g粒径为2.0um的电气石，即为促进硝化细菌快速增殖的培养基。
用该促进硝化细菌快速增殖培养基对亚硝化单胞菌(N itrosospira sp.)硝化杆菌(N itrobacter sp.)，富集培养七周时，应用最大可能计数法(MPN法)测试结果为本发明培养基亚硝化细菌为4.5×107个/ml，普通硝化细菌培养基亚硝化细菌为3.6×106个/ml；本发明培养基硝化细菌为1.5×108个/ml，普通硝化细菌培养基亚硝化细菌为1.1×107个/ml。这些数据表明使用促进硝化细菌快速增殖培养基培养的亚硝化细菌和硝化细菌的数量分别是普通硝化细菌培养基的12.5倍和15倍。
实施例4根据文献[4]配置西红柿汁培养基1500ml，分别加入10g粒径为0.1um的电气石，即为促进乳酸菌快速增殖的培养基。
该培养基灭菌后，以西红柿汁培养基为对照，按3.6×106/ml的接种量接种乳酸粪链球菌，置37培养24-48小时，用血球计数器计数法测定菌数，实验结果表明乳酸粪链球菌在促进乳酸菌快速增殖的培养基中培养时，活菌数比常规西红柿汁培养基高出7.21倍；在促进乳酸菌快速增殖的培养基中的延迟期最短，比对照组提前了4小时左右。
权利要求
1.一种促进细菌快速增殖的培养基，其特征在于，在常规培养基中加入促进细菌快速增殖的强化培养物，所述的强化培养物为电气石或电气石处理水。
2.根据权利要求1所述的一种促进细菌快速增殖的培养基，其特征在于，所述电气石平均粒径为0.1～10um。
3.根据权利要求1所述的一种促进细菌快速增殖的培养基，其特征在于，所述的电气石在常规培养基中的添加量以重量百分数计为0.1～10％。
4.根据权利要求1所述的一种促进细菌快速增殖的培养基，其特征在于，所述的电气石处理水是指按电气石与水的质量比不低于0.5∶100的比例将电气石放入水中，至少放置30分钟后过滤所得的滤液。
全文摘要
本发明公开了一种能促进细菌快速增殖的培养基。该培养基是在常规培养基中加入具有促进细菌快速增殖功能的电气石或电气石处理水。本发明的促进细菌快速增殖的培养基能够显著的增加细菌细胞膜的通透性，增强生物体的新陈代谢，增强细胞活力，改善生物体机能。本发明的促进细菌快速增殖的培养基与常规培养基相比有着明显的促进细菌生长，缩短培养时间的效果。
文档编号C12N1/20GK1693451SQ20051005029
公开日2005年11月9日 申请日期2005年4月19日 优先权日2005年4月19日
发明者胡彩虹, 夏枚生, 张红梅, 潘金敏 申请人:浙江大学