专利名称：非淋菌性尿道炎支原体快检试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种非淋菌性尿道炎支原体快检试剂，特别是一种解脲脲原体和人 型支原体快检试纸及其制备方法。其主要成分是蛋白胨、氯酚红、胰蛋白胨、复合生长因 子、酵母浸膏、马血清、氯化钠、混合抗生素、尿素、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐、 滤纸条。该快检试剂能够检测生殖道支原体阳性结果，具有指导临床诊断和治疗的作用，为 防止滥用抗菌药物也具有重要意义。非淋菌性尿道炎是由性接触传染的一种尿道炎，解脲支 原体是一群大小、结构复杂程度介于细菌与病毒之间，能在人工培养基上增殖的原核微生物， 主要存在人和动物的腔道黏膜上，解脲支原体与非淋性尿道炎的发生密切相关，正常人的泌 尿道中也可能有支原体寄生，故认为其致病性类似条件致病菌，其可通过性行为传播，是非 淋性尿道炎的主要病原菌。临床常见症状为非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不 育不孕症等，也有少数无症状携带者，是近年来越来越引起临床重视的病原体之一。该快检 试剂采用优质的支原体基础培养基，富含高营养物和其所需的基质(尿素)及特殊的抑菌剂， 并添加氯酚红指示剂组成，可快速准确地检测出临床标本中的解脲支原体。
技术背景 本发明的目的在于提供一种非淋菌性尿道炎支原体快检试剂，引起非淋菌性尿 道炎的支原体有解脲支原体、人型支原体和生殖支原体。不同的支原体使用不同的培养试剂。 包括液体和固体培养基。检测解脲支原体和人型支原体最可靠的方法是先接种于液体培养基， 待有生长后(液体颜色发生改变)，再接种于固体培养基上，72小时后，如无菌落生长可视 为阴性。生殖支原体主要用于液体培养基14天后无生长可视为阴性。检测方法复杂、时间长、 准确性差。对泌尿生殖道标本支原体进行快速检测，与传统的培养基比较.非淋菌性尿道炎支 原体快检试剂是以布氏肉汤为基础，并增加小牛血清含量;将传统培养基中的抑菌剂青霉素改 为万古霉素、氟康唑与多粘菌素；将解脲培养基中的酚红指示剂改为氯酚红.将传统培养基 中的固体琼脂粉改为滤纸条；结果非淋菌性尿道炎支原体快检试剂与其它类试剂相比具备下 列特点非淋菌性尿道炎支原体快检试剂营养丰富、配制简单、选择性强和变色灵敏，与传统 试剂比较，检出率高，污染小，临床应用效果满意.接种样本24小时后，即能得到液体筛选增 菌，又能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强。
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、 冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种非淋菌性尿道炎支原体快检试剂。
本发明选择的培养基配方如下(克/每升蒸馏水)蛋白胨9.0-10;氯酚红0.05-0.06; 胰蛋白胨2. 5-6. 0;复合生长因子10. 0-20. 0;酵母浸膏2. 0-4. 0;无菌马血清80-100ml氯 化钠5.0-6.0;混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-15ml; 尿素0.5-0.6;半 胱氨酸盐酸盐0.1-0.2;精氨酸盐酸盐3. 0-4. 0;蒸馏水加至1000， p朋.3士0. 3 ，滤纸条吸 附。
快检试剂中含有蛋白胨、酵母抽提物、马血清、生长因子等营养物，并加有尿素、精氨 酸底物及酚红指示剂；当有Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸被分解，生成的碱性物质引起pH 值上升，培养基由黄变红。快检试剂内加有混合抗生素，可抑制泌尿生殖道中G+、 G-细菌和
3真菌生长。快检试剂中不加葡萄糖，分别加入精氨酸及尿素，观察pH变化情况。Mg不能水 解精氨酸及尿素，因此不发生pH变化。脲原体产生的集落稍大而呈深棕色，故甚易检出。
解脲支原体和人型支原体将先接种于液体培养基，待有生长后(液体颜色发生改变)，再 接种于固体培养基上，72小时后，观察无菌落生长。而非淋菌性尿道炎支原体快检试剂，是 一种快检试纸条，将快检试纸条加入试管再接种样本24小时后，即能得到液体筛选增菌，又 能达到固体观察菌落生长情况，检测方法简单、时间短、准确性强。培养到的微生物需作品 种鉴定，而分离过程中常规测定的某些非特征，可能提拱线索。由生殖泌尿道分离到的标本， 产生碱性颜色改变而使含精氨酸的基质混浊，则以含人型支原体的可能性最大；在含脲基质 中产生类似改变，则几可肯定为脲原体。提高了试剂的灵敏度、特异性和稳定性。 本发明产品的制备方法是
1) 、将蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化钠、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐按比
例进行加温、溶解；
2) 、将复合生长因子按比例加热溶解于蒸馏水中，冷至54'C;
3) 、将溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷却后调1-6. 3，加氯酚
红；压力蒸汽灭菌115。C， 20-30min，冷至50。C;
4) 、在无菌条件下加马血清、混合抗生素、尿素，混合均匀；
5) 、将4号滤纸制成滤纸条，包装；压力蒸汽灭菌115T:， 20-30min，烘干；
6) 、在无菌条件下将滤纸条浸泡液体中，待吸附完全后，无菌条件下烘干；冷藏备用。 本发明具有以下优点(1)非淋菌性尿道炎支原体快检试剂营养丰富、配制简单；(2)临
床应用效果满意，解决了床边接种的困难，污染小；(3)检测方法简单、时间短、选择性强、 变色灵敏、检出率高；(4)接种样本24小时后，即能得到液体筛选增菌，又能达到固体观 察菌落生长情况，稳定性好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明 按照下表所列数据(克/每升蒸馏水)及其所述步骤进行配置 配方一
蛋白胨9. 0-10. 0;氯酚红0.05-0.06;胰蛋白胨2. 5-6. 0;复合生长因子10. 0-20. 0; 酵母浸膏2.0-4.0;无菌马血清80-100ml氯化钠5.0-6.0;混合抗生素(万古霉素、氟康唑 与多粘菌素)10-15ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸盐酸盐0. 1-0. 2;精氨酸盐酸盐3. 0-4. 0; 蒸馏水加至1000， p朋.3±0. 3 ，滤纸条吸附。
配方二
蛋白胨 9.5-10.0; 氯酚红0.05-0.06; 胰蛋白胨4.5-6.0; 复合生长因子 15.0-20.0;酵母浸膏3.0-4.0;无菌马血清85-100ml氯化钠5.5-6.0;混合抗生素(万古 霉素、氟康唑与多粘菌素)12-15ml; 尿素0.5-0.6;半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2;精氨酸 盐酸盐3.5-4.0;蒸馏水加至1000， p服.3士0. 3 ，滤纸条吸附。配方三
蛋白胨9. 0-9. 5;氯酚红0. 05-0. 06;胰蛋白胨4. 5-5. 5;复合生长因子10. 0-18. 0; 酵母浸膏2.0-3.0;无菌马血清80-90ml氯化钠5.0-5.5;混合抗生素(万古霉素、氟康唑 与多粘菌素)10-13ml; 尿素0. 5-0. 6;半胱氨酸盐酸盐0. 1-0. 2;精氨酸盐酸盐3. 0-3. 5; 蒸馏水加至1000， p朋.3±0. 3 ，滤纸条吸附。
权利要求
1、本发明涉及一种非淋菌性尿道炎支原体快检试剂，特别是一种解脲脲原体和人型支原体快检试纸及其制备方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸馏水)蛋白胨9.0-10；氯酚红0.05-0.06；胰蛋白胨2.5-6.0；复合生长因子10.0-20.0；酵母浸膏2.0-4.0；无菌马血清80-100ml氯化钠5.0-6.0；混合抗生素(万古霉素、氟康唑与多粘菌素)10-15ml；尿素0.5-0.6；半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2；精氨酸盐酸盐3.0-4.0；蒸馏水加至1000，pH6.3±0.3，滤纸条吸附。
2、 一种权利要求1所述非淋菌性尿道炎支原体快检试剂的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1) 、将蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏、氯化钠、半胱氨酸盐酸盐、精氨酸盐酸盐按比例进行加温、溶解；2) 、将复合生长因子按比例加热溶解于蒸馏水中，冷至54'C;3) 、将溶解的l)混合液加入到溶解的2)溶液中，混合、冷却后调PH6.卜6. 3，加氯酚 红；压力蒸汽灭菌115。C， 20-30min，冷至50。C;4) 、在无菌条件下加马血清、混合抗生素、尿素，混合均匀；5) 、将4号滤纸制成滤纸条，包装；压力蒸汽灭菌115'C， 20-30min，烘千；6) 、在无菌条件下将滤纸条浸泡液体中，待吸附完全后，无菌条件下烘干；冷藏备用。
全文摘要
本发明涉及一种非淋菌性尿道炎支原体快检试剂，特别是一种解脲脲原体和人型支原体快检试纸及其制备方法。该快检试剂能够检测生殖道支原体阳性结果，具有指导临床诊断和治疗的作用，为防止滥用抗菌药物也具有重要意义。本发明具有以下优点(1)非淋菌性尿道炎支原体快检试剂营养丰富、配制简单；(2)临床应用效果满意，解决了床边接种的困难，污染小；(3)检测方法简单、时间短、选择性强、变色灵敏、检出率高；(4)接种样本24小时后，既能得到液体筛选增菌，又能达到固体观察菌落生长情况，稳定性好。
文档编号C12Q1/00GK101566621SQ20081009341
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月21日 优先权日2008年4月21日
发明者奕 曲 申请人:奕 曲