专利名称：中和氨基酸卵黄培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中和氨基酸卵黄培养基，特别是在临床大量使用抗生素后的淋 病患者，需要淋球菌培养检查时培养基的配方及其制备方法。其配方主要成分是氨基酸促 生长液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、胱氨酸 和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基)、多价蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白 胨、酵母浸膏粉、葡萄糖、可溶性淀粉、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、琼脂粉、多粘
菌素B、万古霉素、卵黄、土温-80、卵磷酯。淋球菌培养检査是诊断淋病的重要方法。尤其 对慢性患者及女性患者，需经培养后才能做出正确诊断；对已治疗的患者需经培养才能证实 是否痊愈。该培养基能够检测大量临床使用抗生素后的生殖道淋球菌阳性结果，具有指导临 床诊断和治疗的作用，为防止滥用抗菌药物也具有重要意义。淋病(Gonorrhea)是淋菌性尿 道炎的简称，是由淋球菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎性疾病，主要通过性交传染。是当前 世界范围内流行非常广泛的一种性传播疾病。近30年来由于性乱的社会背景，无症状带菌者 的增多(女性患者高达75%)、避孕方法的改变(避孕药取代了子宫帽、避孕套)以及耐药 菌株的不断出现，更加快了本病的传播。在许多国家和地区，淋病的患病率一直居于各种性 传播疾病的首位。本病最初多侵犯尿道、宫颈内膜，继而可波及前列腺、精囊、副睾、子宫 内膜及输卵管。有时肛门、直肠、咽粘膜、眼结膜也可受染。尚可经血行播散引起菌血症、 关节炎、心内膜炎及脑膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狭窄等后果。由于本病 潜伏期短、传染性强、后果严重，因此它是我国当前重点防治的性病之一。为使培养获得成 功，除取材部位必须准确外，标本采集后，要尽快接种到己预温至36。C的淋球菌培养基上。 用白金耳床边取材，立即接种。正确地采取标本，及时接种和规范地鉴定是提高阳性率和准 确性的关键。最关键的是采用优质的淋球菌基础培养基。中和氨基酸卵黄培养基富含高营养 物和其所需的基质(促生长液)及特殊的抑菌剂，可快速准确地检测出临床标本中的淋球菌。
技术背景 本发明的目的在于提供一种中和氨基酸卵黄培养基，用于临床泌尿生殖道标本 淋球菌的规范鉴定。淋球菌培养检査是诊断淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系统 化脓性炎性疾病是近年来越来越引起临床重视的病原体之一。尤其是大量临床用抗生素后的 淋球菌检测十分难检，由于标本中含大量残余抗生素，在恢复培养淋球菌时继续受到残余抗 生素的作用。因此，不釆用去除残余的抗生素措施的实验，应认为是在设计上的严重失误， 依据这样的实验得出的结果是不可靠的。淋球菌较为娇嫩，酶系统不完整，初代培养普通培 养基不易成功，需在含有动物蛋白的培养基上，且含有5% 10%二氧化碳的条件下才能生 长。与传统的培养基比较.中和氨基酸卵黄培养基不仅以卵黄双抗为基础，还富含8种氨基 酸促生长液；将传统培养基中的抑菌剂青霉素改为万古霉素、多粘菌素；加入营养丰富的酵 母浸膏粉和淋球菌生长唯一热能来源的葡萄糖及有吸附毒素作用的可溶性淀粉，并加入淋球 菌生长必须的生长因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。营养素选择新鲜蛋黄，实验证明效 果很好。将传统培养基中尤其是大量临床用抗生素后的营养改为增加土温-80、卵磷酯中和剂； 中和氨基酸卵黄培养基与其它类培养基相比具备下列特点中和氨基酸卵黄培养基淋球菌培养基营养丰富、配制简单、选择性强,与传统培养基比较，检出率高,污染小，临床应用效果满 意.大大提高检测阳性率，方法简单、时间短、准确性髙。能够中和标本中含大量残余抗生素， 对已治疗的患者需经培养才能证实是否痊愈，具有指导临床诊断和治疗作用，为防止滥用抗 菌药物也具有重要意义
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、 冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种中和氨基酸卵黄培养基淋球菌培养基。
本发明选择的培养基配方如下(克、ml /每升蒸馏水)氨基酸促生长液(含胱胺谷氨 酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基 酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基，)2ml;多价蛋白胨9. 0-12.0;蛋白月示胨4. 0_5. 0;胰蛋 白胨4. 0-5. 0;酵母浸膏粉4. 0-6. 0;葡萄糖1. 0-2. 0;可溶性淀粉1. 5-2. 5;氯化钠14. 0-16. 0; 磷酸氢二钾3. 0-5. 0;磷酸二氢钾1. 5-2. 5;琼脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0. 3 ml; 3mg/L万古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%无菌卵黄盐水10. 0-15. 0 ml; 土温-80 0.3-0.5;卵 磷酯O. 5-0. 8;双重蒸馏水1000ml， pH7. 4。
中和氨基酸卵黄培养基，原材料易得，制作方便，基础成分以GC基础为主，调整蛋白胨 的成分比例，加入营养丰富的酵母浸膏粉和淋球菌生长唯一热能来源的葡萄糖及有吸附毒素 作用的可溶性淀粉，并加入淋球菌生长必须的生长因子胱胺酸、谷氨酰胺、半胱胺酸等。营 养素选择新鲜蛋黄，实验证明效果很好。淋球菌在该培养基孵育24小时后，淋球菌可生长成 细小、圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色如露珠状的菌落，直径为0. 5ram 1. 0ram。 边缘呈花瓣状，用白金耳触之有粘性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出 现皱縮。从菌落上取材作涂片，可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，约有 25%的菌为典型的双球菌，其他75%为单球菌、四联形或八叠形。
本发明产品的制备方法是
1) 、将蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化钠、磷酸氢二 钾、磷酸二氢钾、琼脂粉、土温-80 、卵磷酯、按比例进行加温、溶解；冷却后调rapH7.4;
2) 、分装后，压力蒸汽灭菌121。C， 20-30min;
3) 、在无菌条件下将消毒的复合生长因子、卵黄加入到溶液中，混合均匀；
4) 、冷却至6(TC在无菌条件下加入葡萄糖，万古霉素和多粘菌素B溶液；不时摇动， 凝固备用。
本发明具有以下优点(1)中和氨基酸卵黄培养基，营养丰富、配制简单；(2)选择性强、 方法灵敏、检出率高、污染小，临床应用效果满意；(3)大大提高检测阳性率，方法简单、时 间短、准确性高。(4)灵敏度高、特异性强、稳定性好。能够中和标本中含大量残余抗生素， 对已治疗的患者需经培养才能证实是否痊愈，具有指导临床诊断和治疗作用，为防止滥用抗 菌药物也具有重要意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明
按照下表所列数据(克、ml /每升蒸馏水)及其所述步骤进行配置 配方一氨基酸促生长液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基，)2ml;多价蛋白胨9. 0-12. 0; 蛋白月示胨4.0-5.0;胰蛋白胨4.0-5.0;酵母浸膏粉4.0-6.0;葡萄糖1.0-2.0;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化钠14. 0-16. 0;磷酸氢二钾3. 0-5. 0;磷酸二氢钾1. 5-2. 5;琼脂粉14. 0-16. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3ml; 3mg/L万古霉素0. 2-0.3ml; 15%无菌卵黄盐水10. 0-15. 0 ml; 土温-80 0. 3-0. 5;卵磷酯0. 5-0. 8;双重蒸馏水1000ml， pH7. 4。
配方二
氨基酸促生长液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮
氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基，)2ml;多价蛋白胨 10.0-12.0;蛋白月示胨4. 5-5.0;胰蛋白胨4. 5-5.0;酵母浸膏粉4. 5-6. 0;葡萄糖1. 5-2. 0; 可溶性淀粉2.0-2.5;氯化钠15.0-16.0;磷酸氢二钾4. 0-5. 0;磷酸二氢钾2. 0-2. 5琼脂粉 15.0-16.0; 2. 5mg/L多粘菌素B 0. 2-0.3 ml; 3mg/L万古霉素0. 2-0. 3 ml; 15%无菌卵黄 盐水12. 0-15. 0 ml; 土温-80 0.3-0.4;卵磷酯0. 5-0. 6;双重蒸馏水1000ml， pH7. 4。
配方三
氨基酸促生长液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮 氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基，)2ml;多价蛋白胨9. 0-11.0; 蛋白月示胨4.0-4.5;胰蛋白胨4.0-4.5;酵母浸膏粉4. 0-5. 0;葡萄糖1. 0-1. 5;可溶性淀 粉1. 5-2. 5;氯化钠14. 0-16. 0;磷酸氢二钾3. 0-4. 0;磷酸二氢钾1. 5-2. 0;琼脂粉14. 0-15. 0; 2. 5mg/L多粘菌素B0. 2-0.3 ml; 3mg/L万古霉素0. 2-0.3 ml; 15%无菌卵黄盐水10. 0-13. 0 ml; 土温-80 0.4—0.5;卵磷酯0. 6-0. 8;双重蒸馏水1000ml， pH7. 4。
权利要求
1、本发明涉及一种中和氨基酸卵黄培养基，特别是在临床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培养检查时特制培养基的配方及其制备方法，其特征在于具有如下配方(克、ml/每升蒸馏水)氨基酸促生长液(含胱胺谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、胱氨酸和半胱氨酸8种氨基酸，次黄嘌呤、尿嘧啶2种碱基，)2ml；多价蛋白胨9.0-12.0；蛋白月示胨4.0-5.0；胰蛋白胨4.0-5.0；酵母浸膏粉4.0-6.0；葡萄糖1.0-2.0；可溶性淀粉1.5-2.5；氯化钠14.0-16.0；磷酸氢二钾3.0-5.0；磷酸二氢钾1.5-2.5；琼脂粉14.0-16.0；2.5mg/L多粘菌素B 0.2-0.3ml；3mg/L万古霉素0.2-0.3ml；15％无菌卵黄盐水10.0-15.0ml；土温-800.3-0.5；卵磷酯0.5-0.8；双重蒸馏水1000ml，pH7.4。
2、 一种权利要求1所述中和氨基酸卵黄培养基的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1) 、将蛋白胨、蛋白月示胨、胰蛋白胨、酵母浸膏粉、可溶性淀粉、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、琼脂粉、土温-80 、卵磷酯、按比例进行加温、溶解；冷却后调 ra pH7. 4;2) 、分装后，压力蒸汽灭菌121。C， 20-30min;3) 、在无菌条件下将消毒的氨基酸促生长液、卵黄加入到溶液中，混合均匀；4) 、冷却至6(TC在无菌条件下加入葡萄糖，万古霉素和多粘菌素B溶液；不时摇动，凝固备用。
全文摘要
本发明涉及一种中和氨基酸卵黄培养基，特别是在临床大量使用抗生素后的淋病患者，需要淋球菌培养检查时培养基的配方及其制备方法。淋球菌培养检查是诊断淋病的重要方法。由淋球菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎性疾病是近年来越来越引起临床重视的病原体之一。尤其是大量临床用抗生素后的淋球菌检测十分难检，由于标本中含大量残余抗生素，在恢复培养淋球菌时继续受到残余抗生素的作用。因此，不采用去除残余的抗生素措施的实验，应认为是在设计上的严重失误，依据这样的实验得出的结果是不可靠的。本发明的目的在于提供一种中和氨基酸卵黄培养基，用于临床泌尿生殖道标本淋球菌的规范鉴定。
文档编号C12Q1/04GK101565729SQ200810093410
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月21日 优先权日2008年4月21日
发明者奕 曲 申请人:奕 曲