专利名称：一种食用菌β-葡聚糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种食用菌P-葡聚糖的制备方法，尤其是食用菌中水溶 性P-葡聚糖的制备方法。
(二)
背景技术：
活性多糖(3-(1—3)-D-葡聚糖广泛存在于自然界中，是细菌、酵母、 真菌、食用菌、谷类和海藻的细胞壁组成型成分。目前，国内外研究者己 从食用菌中分离出了几百种具有抗肺瘤、增强免疫、抗衰老及抗氧化活性 的多糖，在国际上，食用菌多糖被称为"生物应答效应器"(Biological Response Modifier )。经总结归纳，食用菌功能性多糖在决定性的一级结 构上存在相对一致的关系，从菌体中提取的活性多糖一般由葡萄糖组成， 而且葡萄糖主链上的(3-1, 3-苷键和支链上的(3-1, 6苷键是抗胂瘤所必需 的(Methacanonetal. 2005; Manto糧i et al. 2008 ), Bohn et a1.1995,以 下该结构以P-l, 3/1， 6-葡聚糖表示。而卩-1—2、 (3-1—4及a-构型的多聚 糖则大多没有生物活性或活性很弱，同时(3-1, 3/1, 6-葡聚糖在抗肿瘤之 外的其他方面也显示了很好的活性。鉴于食用菌p-葡聚糖，尤其是p-l， 3/1， 6-葡聚糖的良好功效，目前在食用菌多糖国际市场上愈来愈认同以 其含量或纯度作为质量评价和定价标准，
近几年来，国内外的p-葡聚糖制备或提取的专利和论文主要还集中 在谷物类来源的青稞、燕麦、大麦和酵母这几种原料中；而对于食用菌来 源的(3-葡聚糖，只是对包括灵芝、灰树花、香菇、猴头菇等一些食用菌 的多糖提取后的分离纯化，难以产业化。在(3-葡聚糖制备或提取方法及工艺路线方面，目前主要还集中在自 溶法、酸法、碱法、酸石成法、酶法(用到其中几种单一酶，如淀粉酶、糖
化酶、蛋白酶、纤维素酶和果胶酶)等，加水后浸提，通过调节pH、温 度、料液比、提取时间等参数后，乙醇沉淀后得相应的葡聚糖。
由于原料来源各异，所应用的用途不一，作为医药保健食品中间体的 食用菌P-葡聚糖的制备与上述的谷物类(3-葡聚糖在方法不尽相同。如酸、 碱法，不仅对生产时的机械设备有损伤，也对产品的食用安全性带来潜在 危害，另外S菱碱法提取时容易引起原有多糖链的降解，破环结构，以及酸 碱法提取的葡聚糖由于水溶性差，口服有效性也不佳。而传统的直接热水 浸提，乙醇沉淀的食用菌多糖提取方法所得到的粗多糖，其中还有较多的 蛋白质，以及一些纤维素、淀粉类及非(3-l， 3/1, 6-的糖残基或连接键， 一般食用菌粗多糖中多糖含量一般占粗提物的30 50%,而其中含有的活 性j3-葡聚糖纯度只占15 40%。也有文献报道采用Sevag法等有机溶剂去 除其中粗多糖中所含的蛋白质，但同样存在有机溶剂潜在毒害残留和生产 车间有机溶剂安全防爆问题。
按目前一个年产20吨规模的小型食用菌多糖生产厂家，若全部生产 粗多糖，年产值只能达到IOOO万元，若能实现食用菌(3-葡聚糖的高纯度 制备，高P-葡聚糖含量的产品(纟屯度SO)按目前市场价(2500- 10000 元/kg)的底价2500元/kg计算，就能使产值达到5000万元，经济效益显 著。
目前尚无对应的食用菌P-葡聚糖制备或提取方法的论文和专利报道， 较多的都是食用菌多糖提取。而相关的谷物类或酵母P-葡聚糖制备及提 取主要集中在如下的代表性方法
一、已有可相对参考的P-葡聚糖的制备方法1、 谷物类P-葡聚糖的制备
①燕麦麸中P-葡聚糖的制备燕麦麸—粉碎—过筛50目—脱脂(异丙 醇和石油醚)—灭酶—加水搅拌提取(加酶去淀粉)—离心分离(残渣二 次提取)4收集上清液—去蛋白(盐酸调等电点沉淀)—醇析—离心分离 —干燥—葡聚糖粗品—硫酸铵纯化—离心分离—(3-葡聚糖
在工艺路线中，用到异丙醇和石油醚有机溶剂和腐蚀性化学试剂 HC1，增加产品安全性风险。
②莜麦中P-葡聚糖的制备莜麦—清理筛选—粉碎—过筛—干燥—燕 麦麸—去脂肪—灭酶—脱溶剂—粉碎—过筛(60目)—酶法去淀粉—i咸冲是 取—离心(4 000 r/ min)—上清液(粗提液)—酶解去淀粉—酶解去蛋白质 —醇析—离心—沉淀—干燥—(3-葡聚糖粗品
在工艺路线中，用到碱提取，不仅对生产时的提取设备造成腐蚀影响， 而且也增加了产品食用安全性风险，另外，对于食用菌来说除了淀粉和蛋 白质外还要考虑去除非活性的纤维素类成分。
③大麦中P-葡聚糖的制备大麦麸皮—加入l mol/LNaOH(l : 50)— 室温下提取l h—6 000 g离心15 min —用1 : 50的1 mo1/ LNaOH再次提 取残渣并离心，合并上清液—用HC1调节上清液至pH 6.5 —力口CaCl2至 终浓度为70mg/L ，加耐高温a-淀粉酶l mL/L ，在96 。C条件下搅拌保持 1 h—冷却至室温，用HC1调节pH 4.5—6 000 g离心15 min ;弃渣—加乙 醇至终浓度为50% ， 4 。C条件下过夜—6 000g离心15min—把悬浮的粗 制胶溶于水，用50%乙醇洗涤2次，离心，在水中轻轻混匀沉淀物—活 性炭脱色2次，透析袋透析—冷冻干燥成粉状P-葡聚糖 用到NaOH和HC1,存在上述类似的安全问题。
2、 酵母中p-葡聚糖的制备① 酸法提取
啤酒酵母渣—干燥—加入0.5mol/L乙酸溶液，在50。C下反应3h—离心 处理—沉淀物水洗2次—然后用无水乙醇洗涤脱色—无水乙醚洗涤脱水 一喷雾干燥—酵母(3-葡聚糖
得到是酸不溶性葡聚糖，产品中蛋白质、甘露聚糖等杂质含量多，需 进一步纯化，工艺复杂，对设备腐蚀损耗大。
② 碱法提取
啤酒酵母—干燥—加入lmol/L氢氧化钠溶液，在90。C下水解反应 3h—水解液过滤—沉淀物水洗2次—然后用无水乙醇洗涤脱色，无水乙醚 洗涤脱水—喷雾干燥—酵母f3-葡聚糖
该法得到是碱不溶性葡聚糖，多糖得率低但杂质含量少，污染较大， 耗能较高，对设备腐蚀损耗大。
③ 碱-酶法
酵母粉经过水洗，脱色后—按照150mL: 10 g的比例加入3%的 NaOH溶液—在80 。C水浴条件下水解2h—离心，洗涤—调整pH至8.5 ~ 9.0，再加入600U/g碱性蛋白酶(以干酵母粉计)，在55。C下水解24h— 离心—沉淀，干燥—卩-(1 , 3)-D-葡聚糖成品
工艺复杂，用到碱液，不仅对设备腐蚀损耗大，而且增加了产品潜在 安全性风险。
自溶-碱-酶法
啤酒酵母—50。C自溶6h—添加100U/g湿酵母木瓜蛋白酶，继续自溶 18h后离心—沉淀用2 %的NaOH溶液分散—于80。C水浴处理3h后离心 —沉淀用蒸馏水清洗3 ~ 4次—真空冷冻干燥—粉碎得酵母P-葡聚糖
同样用到碱液，存在上述类似问题。3、食用菌粗多糖脱蛋白后精制
工厂化食用菌粗多糖的制备工艺通常如下食用菌子实体—60-100°C 干燥l-3h—粉碎—60 100目过筛—加水(为原津牛的20-40倍重量)—热 水提取2-4h—冷却至室温—板框过滤或离心~>清液—浓缩~>加入终浓度 为70% 90%的乙醇—沉淀物加适量水分散(沉淀物重量的3-5倍)—喷 雾干燥—食用菌粗多糖成品
常规食用菌粗多糖脱蛋白后精制食用菌粗多糖成品—加5-10倍的水 复溶—有机溶剂脱蛋白4蒸发去溶剂—精制
其中有机溶剂脱蛋白法包括Sevag法，Sevag试剂(氯仿-正丁醇配 制成体积比为4 : 1的混合液)与多糖比例1: 3充分振荡后，去除下层蛋 白质；三氯乙酸法。
该方法只是对其中的蛋白质进行了去除，对其中的纤维素、淀粉类物 质没有针对性脱除，关键的是用到了氯仿、三氯乙酸等有一定毒性的有机 溶剂，不仅成本高，而且虽经蒸发能去除大部分溶剂，但是免不了少量残 留，考虑到产品食用时的安全性，不适合应用性生产。
4、食用菌(3-葡聚糖分离纯化制备
食用菌粗多糖成品—加5-10倍的水复溶—用离子交换，凝胶层析等柱 分离手段—分离纯化—结构鉴定—得到一定分子量的(3-葡聚糖组分
该方法由于要用到柱层析方法，生厂应用投资大，操作要求高，生产 效率低，而且还需进行产品结构鉴定，费时费力费钱。
发明内容
本发明才艮据食用菌原料的成分特性和应用安全性，目的是实现一种安 全性好，通用性和生产实际应用性强，且纯度高(250%)的食用菌(3-葡 聚糖制备方法。本发明采用的技术方案是
一种食用菌|3-葡聚糖的制备方法，所述方法包括取粉碎至60-100 目的食用菌子实体干燥粉末，加入质量为子实体粉末质量5 10倍的水， 得到的料液于45KHz,单位功率50 80W/kg料液，室温超声处理10 30 分钟，超声处理后的料液再加入质量为子实体干燥粉末质量10 20倍的 水，并添加CaCl2至其浓度为100 300ppm，加入400-800 IU/g子实体干 燥粉末的中性纤维素酶、600 1000 IU/g子实体干燥粉末的半纤维素酶和 1000 2000 IU/g子实体干燥粉末的中性蛋白酶，40 60。C保温搅拌0.5 1.5 小时后，加入200 500IU/g子实体干燥粉末的高温淀粉酶，85 95。C保温 搅拌1~2小时，冷却至室温，离心，耳又上清液，减压浓缩，浓缩液加入 乙醇至乙醇体积浓度为60 80%进行醇沉，耳又沉淀加入质量为沉淀质量 10 15倍的水复溶，以分子截留量为10000的膜超滤，截留液减压浓缩至 原有体积的1/5 1/3,干燥，得到所述食用菌(3-葡聚糖。
通常在醇沉是加入90 98% (体积浓度)的乙醇水溶液，加入的量是 浓缩液的2 4倍(以体积计)。
由于目前尚无针对性的食用菌(3-葡聚糖制备或提取方法，而上述可 借鉴的方法均存在生产应用或安全性方面的问题。考虑到食用菌物质特 性，本发明通过整合超声处理，多种酶酶解去杂，热水浸提，目标物乙醇 沉淀后复溶，超滤去杂，喷雾干燥或冷冻干燥等技术方法，建立了一种安 全、实用和通用性强且高纯度(250%)的食用菌(3-葡聚糖制备工艺路线。
本发明主要采用超声前处理，中性纤维素酶、半纤维素酶、中性蛋白 酶混合酶酶解纤维素酶、半纤维素(如木聚糖，半乳聚糖，以及一些杂聚 糖)和蛋白质(及肽类)，在热水揭JF又同时添加高温淀;盼酶酶解淀;除类物 质，通过后续的乙醇沉淀得到目标物，经l万截留量的膜超滤，进一步得到活性更佳的食用菌P-葡聚糖。
其中①10 30min的超声前处理，不仅有助于物料组织松散，以利 于后续的酶解充分接触底物后有效去杂，而且也可以缩短最后的热水提取 时间。
② 考虑缩短酶解时间，采用混合酶酶解，考虑了 3种酶相互之间合理 酶解的温度，以及pH值与物料体系自然pH值的一致性，而且混合酶酶 解去杂之后，如覆在物料表面的木聚糖等半纤维素的降解，也利于所含目 、标(3-葡聚糖的后续提取。
③ 同时考虑缩短提取时间和酶解除去淀粉类物质，在热水提取时添加 高温淀粉酶。
④ 在醇沉时，由于纤维素、半纤维素、蛋白质和淀粉类杂质通过上述 的酶解作用已基本降解成相对小分子物质，通过控制合理的终乙醇浓度
(60% 80%)来使目标物大分子的(3-葡聚糖沉淀富集。
⑤ 考虑到文献报道的食用菌功能性(3-葡聚糖一般分子量在1万以上， 在工艺最后部分采用了 1万截留量膜超滤进一步纯化活性(3-葡聚糖。
所用中性纤维素酶为液态中性纤维素酶，酶活10000-30000 IU/mL。 所用半纤维素酶(Hemicellulase )为液态半纤维素酶，酶活
20000~40000 IU/mL。
所用中性蛋白酶为液态中性蛋白酶(neutral proteinase ), 酶活
20000 40000IU/mL。
所用高温淀粉酶为液态高温淀4分酶，酶活10000~30000 IU/mL。 所述食用菌子实体为下列之一香菇子实体、灰树花子实体、灵芝子
实体、姬+>萆子实体、桑黄子实体。 具体的，所述方法如下(1) 取食用菌子实体，60 10(TC干燥，粉碎至60 100目，得食用菌 子实体干燥粉末，加入质量为子实体粉末质量8 10倍的水，得 到的料液于45KHz,单位功率50 80W/kg料液，室温超声处理 20 30分钟；
(2) 超声处理后的料液再加入质量为子实体干燥粉末质量10~20倍 的水，并添加CaCl2至其浓度为100 300ppm,加入400 800 IU/g 子实体干燥粉末的20000 IU/mL液态中性纤维素酶、600 1000 IU/g子实体干燥4分末的30000 IU/mL液态半纤维素酶和 1000~2000 IU/g子实体干燥粉末的30000 IU/mL液态中性蛋白 酶，40 60。C保温搅拌酶解0.5 1.5小时；
(3 )酶解液加入200-500 IU/g子实体干燥粉末的20000 IU/mL液态 高温淀粉酶，90 95。C保温搅拌1 2小时，冷却至室温，离心， 耳又上清液，减压浓缩，浓缩液加入乙醇至乙醇体积浓度为 60 80%进行醇沉，取沉淀加入质量为沉淀质量10 15倍的水复 溶，以分子截留量为10000的膜超滤，截留液减压浓缩至原有 体积的1/5 1/3,喷雾干燥，得到所述食用菌P-葡聚糖。 采用本发明的方法，对香菇、灰树花、灵芝、姬松茸、桑黄等几种食 用菌进行了 (3-葡聚糖制备，所得产品经了 (3-葡聚糖专一性的荧光法检观'J， 结果如下表。
本发明制备的p-葡聚糖纯度(％)提取率(％)
香菇65.64.63
灰树花68.53.60
灵芝82.30.87
姬松萆55.23.81
桑黄78.72.14所得5种食用菌(3-葡聚糖产品的纯度在55.2% 82.3%之间，全部高 于50%的目标纯度，提取率在0.87% 4.77%之间，不包括后续的醇沉， 超滤，喷雾干燥，前面的提取部分耗时2 4h，与常规的食用菌粗多糖提 取时间基本一致，但常规的食用菌粗多糖中(3-葡聚糖纯度仅在15%-40% 之间。且釆用本发明的制备方法，无有毒有害化学试剂残留，产品安全； 采用的超声、酶解和超滤等技术条件温和，易于操作；本方法根据食用菌 共有成分性质，通用性强，适用于所有的食用菌(3-葡聚糖制备。
综上所述，本发明的有益效果主要体现在采用本发明方法，食用菌 卩-葡聚糖产品纯度高(55.2%~82.3%),制备过程无有毒有害化学试剂残 留，产品安全，技术条件温和，易于操作，适合所有食用菌P-葡聚糖制 备，适用于工业化生产。
(四)
图1为本发明方法工艺流程图。
(五)
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围 并不^l限于此
实施例1:
工艺流程参见图1,香菇子实体—8(TC热风干燥2h—粉碎至80目— 取香菇子实体干燥粉末lkg,力口 10kg的水—45KHz，功率550W，室温超 声处理20min—再加20kg的水，并添加6.2g的CaCl2—加入液态中性纤 维素酶40mL (酶活20000IU/mL,宁夏和氏壁生物技术有限公司)、液态 半纤维素酶33.3mL (酶活30000IU/mL,宁夏和氏壁生物技术有限公司) 和液态中性蛋白酶66.7mL (酶活30000IU/ mL,宁夏和氏壁生物技术有限公司)，自然pH(即不调pH, —般在6.5~7.0), 45。C保温，搅拌混合 酶解1.5h—加入液态高温淀粉酶25mL (酶活20000IU/mL，宁夏和氏壁 生物技术有限公司)，95。C热水搅拌提取2h—冷却至室温一5000r/min, 10min离心去渣—上清液(约30L)—减压浓缩至6L—加入24L的食用 乙醇—沉淀，加15倍重量的水复溶—1万截留分子量的聚砜膜超滤—截 留液减压浓缩至原体积的1/3—喷雾干燥—香菇(3-葡聚糖成品(经荧光法 检测，纯度65.6%,提取率4.63%)。实施例2:工艺流程参见图1,灰树花子实体—80。C热风干燥2h—粉碎至100 目—取lkg灰树花子实体干燥粉末，加10kg的水—45KHz,功率660W， 室温超声处理20min一再加15kg的水，并添加5.2g的CaCl2—加入液态 中性纤维素酶30mL (酶活20000IU/mL )、液态半纤维素酶30mL (酶活 30000IU/mL )和液态中性蛋白酶60mL (酶活30000IU/ mL )，自然pH(即 不调pH, —般在6.5 7.0), 45。C保温，搅拌混合酶解1.5h—加入液态高 温淀粉酶15mL (酶活20000IU/mL ), 95。C热水搅拌4是耳又1.5h—冷却至室 温—5000r/min， 10min离心去渣—上清液(约25L)—减压浓缩至6L— 加入14L的食用乙醇—沉淀，加水10倍重量的水复溶—1万截留分子量 的聚砜膜超滤—截留液减压浓缩至原体积的1/3—喷雾干燥—灰树花(3-葡 聚糖成品(经荧光法检测，P-葡聚糖纯度68.5。/。，提取率3.60%)。实施例3:工艺流程参见图1,灵芝子实体—80。C热风干燥2h—粉碎至100目— 取灵芝子实体干燥粉末lkg,力。6kg的水—45KHz,功率560W,室温超声处理30min—再加13kg的水，并添加6g的CaCl2—加入液态中性纤维 素酶40mL (酶活20000IU/mL)、液态半纤维素酶33.3mL (酶活 30000IU/mL )和液态中性蛋白酶40mL (酶活30000IU/ mL ),自然pH (即 不调pH, —般在6.5 7.0), 50。C保温，搅拌混合酶解l.Oh—加入液态高 温淀粉酶10mL (酶活20000IU/mL ), 95。C热水搅拌纟是取1.5h—冷却至室 温—5000r/min, 10min离心去渣—上清液(约18L)—减压浓缩至6L— 加入9L的食用乙醇—沉淀，加15倍重量的水复溶—1万截留分子量的聚 砜膜超滤—截留液减压浓缩至原体积的1/5—喷雾干燥—灵芝(3-葡聚糖成 品(经荧光法检测，(3-葡聚糖纯度82.3%,提取率0.87%)。
实施例4:
工艺流程参见图1,姬松萆子实体—80。C热风干燥3h—粉碎至80目 —取姬松萆子实体干燥粉末lkg,力口 12kg的水—45KHz,功率650W,室 温超声处理20min—再加17kg的水，并添加9g的CaCl2—加入液态中性 纤维素酶60mL (酶活20000IU/mL)、液态半纤维素酶26.7mL (酶活 30000IU/mL )和液态中性蛋白酶66.7mL (酶活30000IU/ mL ),自然pH (即不调pH, —般在6.5~7.0), 50。C保温，搅拌混合酶解lh—加入液态 高温淀粉酶，酶活20000IU/mL,添加量500IU/g (食用菌子实体重量)， 95。C热水搅拌提取2h—冷却至室温—5000r/min, 10min离心去渣—上清 液(约25L ) 4减压浓缩至5L—加入20L的食用乙醇—沉淀，力口 12倍重 量的水复溶—1万截留分子量的聚砜膜超滤—截留液减压浓缩至原体积 的1/3—喷雾干燥—姬松萆p-葡聚糖成品(经荧光法检测，P-葡聚糖纯度 55.2%，提取率3.81%)。实施例5:
工艺流程参见图1，桑黄子实体—100。C热风干燥—粉碎至100目— 取桑黄子实体干燥粉末lkg,力口 5kg的水—45KHz,功率480W，室温超 声处理30min—再加10kg的水，并添加3.2g的CaCl2—加入液态中性纤 维素酶40mL (酶活20000IU/mL)、液态半纤维素酶26.7mL (酶活 30000IU/mL )和液态中性蛋白酶43.4mL (酶活30000IU/ mL )，自然pH (即不调pH, —般在6.5 7.0)， 45。C保温，搅拌混合酶解1.5h—加入液 态高温淀粉酶20mL (酶活20000IU/mL )， 95 °C热 K搅拌提耳又2h—冷却至 室温—5000r/min， 5min离心去渣—上清液(约12L) 一减压浓缩至3L— 加入7L的食用乙醇—沉淀，加15倍重量的水复溶—1万截留分子量的聚 砜膜超滤—截留液减压浓缩至原体积的1/4倍—喷雾干燥—桑黄p-葡聚糖 成品(经荧光法检测，(3-葡聚糖纯度78.7%,提取率2.14%)。
权利要求
1.一种食用菌β-葡聚糖的制备方法，所述方法包括取粉碎至60～100目的食用菌子实体干燥粉末，加入质量为子实体粉末质量5～10倍的水，得到的料液于45KHz，单位功率50～80W/kg料液，室温超声处理10～30分钟，超声处理后的料液再加入质量为子实体干燥粉末质量10～20倍的水，并添加CaCl2至其浓度为100～300ppm，加入400～800IU/g子实体干燥粉末的中性纤维素酶、600～1000IU/g子实体干燥粉末的半纤维素酶和1000～2000IU/g子实体干燥粉末的中性蛋白酶，40～60℃保温搅拌0.5～1.5小时后，加入200～500IU/g子实体干燥粉末的高温淀粉酶，85～95℃保温搅拌1～2小时，冷却至室温，离心，取上清液，减压浓缩，浓缩液加入乙醇至乙醇体积浓度为60～80％进行醇沉，取沉淀加入质量为沉淀质量10～15倍的水复溶，以分子截留量为10000的膜超滤，截留液减压浓缩至原有体积的1/5～1/3，干燥，得到所述食用菌β-葡聚糖。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所用中性纤维素酶为液态中性 纤维素酶，酶活10000 30000IU/mL。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所用半纤维素酶为液态半纤维 素酶，酶活20000~40000 IU/mL。
4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所用中性蛋白酶为液态中性蛋 白酶，酶活20000~40000IU/mL。
5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所用高温淀粉酶为液态高温淀 粉酶，酶活10000 30000 IU/mL。
6. 如权利要求l所述的方法，其特征在于所述食用菌子实体为下列之一 香菇子实体、灰树花子实体、灵芝子实体、姬松萆子实体、桑黄子实 体。
7. 如权利要求l所述的方法，其特征在于所述加入的乙醇为90~98%乙醇水溶液。
8. 如权利要求l所述的方法，其特征在于所述90 98%乙醇水溶液加入体 积为浓缩液体积的2~4倍。
9. 如权利要求l所述的方法，其特征在于所述干燥为喷雾干燥。
10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下(1) 取食用菌子实体，60 10(TC干燥，粉碎至60 100目，得食用菌 子实体干燥粉末，加入质量为子实体粉末质量8 10倍的水，得 到的料液于45KHz,单位功率50 80W/kg料液，室温超声处理 20 30分钟；(2) 超声处理后的料液再加入质量为子实体干燥粉末质量10 20倍的 水，并添加CaCl2至其浓度为100 300ppm,加入400 800 IU/g 子实体干燥净分末的20000 IU/mL液态中性纤维素酶、600 1000 IU/g子实体干燥粉末的30000 IU/mL液态半纤维素酶和 1000-2000 IU/g子实体干燥4分末的30000 IU/mL液态中性蛋白 酶，40 60。C保温搅拌酶解0.5 1.5小时；(3 )酶解液加入200~500 IU/g子实体干燥粉末的20000 IU/mL液态高 温淀粉酶，90 95。C保温搅拌1~2小时，冷却至室温，离心，取 上清液，减压浓缩，浓缩液加入95%乙醇至乙醇体积浓度为 60 80%进行醇沉，取沉淀加入质量为沉淀质量10 15倍的水复 溶，以分子截留量为10000的膜超滤，截留液减压浓缩至原有体 积的1/5~1/3,喷雾干燥，得到所述食用菌P-葡聚糖。
全文摘要
本发明提供了一种食用菌β-葡聚糖的制备方法，主要采用超声前处理，中性纤维素酶、半纤维素酶、中性蛋白酶混合酶酶解纤维素酶、半纤维素(如木聚糖，半乳聚糖，以及一些杂聚糖)和蛋白质(及肽类)，在热水提取同时添加高温淀粉酶酶解淀粉类物质，通过后续的乙醇沉淀得到目标物，经1万截留量的膜超滤，进一步得到活性更佳的食用菌β-葡聚糖。本发明的有益效果主要体现在采用本发明方法，食用菌β-葡聚糖产品纯度高(55.2％～82.3％)，制备过程无有毒有害化学试剂残留，产品安全，技术条件温和，易于操作，适合所有食用菌β-葡聚糖制备，适用于工业化生产。
文档编号C12P19/00GK101407833SQ200810122318
公开日2009年4月15日 申请日期2008年11月10日 优先权日2008年11月10日
发明者何荣军, 孙培龙, 开 杨 申请人:浙江工业大学