专利名称：：细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法
技术领域：
：本发明涉及一种生产细菌纤维素的微生物菌株及利用该菌株发酵生产细菌纤维素的方法。
背景技术：
：纤维素是地球上最丰富的生物多聚物，是作为植物生物量的主要组成部分，地球上每年由植物产生的纤维素达亿万吨。除植物外，某些低等动物可产生动物纤维素(Tunldn)，某些细菌能以异养方式比植物更高效、更高纯度地产生胞外细菌纤维素(Bacterialcellulose,以下简称BC。在1886年A.J.Brown就首次报告了由木醋杆菌"ceto6a"er;^'7丄TO迈)能够合成一种胞外的凝胶状的物质(A.J.Brown.Onanaceticfermentformscellulose[J]./.CAe/n.5Vc,1886，49:432-439.)，但由于无合适的实验手段以及纤维索的产量较低，因此多年来一直未受到足够重视，细菌纤维素引起人们更多的注意还在20世纪后期，使用乂矽//""附作为一种模型细菌，深入研究BC合成是从Hestrin等开始的，他证明了静置和冻干的醋酸细菌细胞在有葡萄糖和氧时能够合成纤维素(Hestrin,S.andSchramm,M.，Synthesisofcelluloseby^ceto6ac欲x^/Z"m附preparationoffreezedriedcellscapableofpolymerizingglucosetocellulose,5fecAe肌/，1954，58:345.);其次，ColvinW在含A;cy/fm^细胞抽提物、葡萄糖和ATP样品中观察到有纤维素的合成(ColvinJR.FormationofcellulosemicrofibrilsinahomogenateofJceto6a"er;c_y/z>jww[J].y4i"cA.5/oc/iei5/e>//y^，1957，70，294-295.)。BC属于初级代谢的特殊产物，与植物纤维素(PC)—样，BC主要也是起到一种保护层的作用。能够产生BC的细菌主要有爿ceo6acter，iWzoWwm，爿gTO6a"en'i/w，和Sara'"a等(JonasR，FarahLF.Productionandapplicationofmicrobialcellulose[J].户o/戸e/"Degrarfaft'o/i朋rfiStoM/印，1998，59:101-106.)。BC有许多独特的性质。如(l)植物纤维主要由纤维素组成，但参杂其它许多糖类，如半纤维素或木质素。而BC是一种"纯纤维素"，有高化学纯度和高结晶度；(2)BC的弹性模量为一般植物纤维的数倍至十倍以上，并且抗张强度高。(3)BC有很强的持水能力；(4)BC有较高的生物适应性和良好的生物可降解性。(5)BC生物合成时的可调控性。此外，细菌纤维素相对于传统的纤维素资源还有很多优势，如加工时不用弃除木质素；可合成特殊用途的纸张；加工成任何形状的无纺织物；可作为优良的膳食纤维等，因此，细菌纤维素能够广泛应用于造纸、纺织品和食品中，作为生物材料还可用于化妆品、医药等行业，关于BC的研究已成为当今新的微生物合成材料研究的热点之一。采用微生物发酵方法合成细菌纤维素，目前的细菌纤维素产生菌种类较少，细菌纤维素微生物合成方法有动态发酵或静态发酵法，而多数菌种只能采用动态发酵或静态发酵中的一种进行细菌纤维素的合成。动态发酵法耗能相对较高、工艺也较复杂，但比较适合大规模生产，且细菌纤维素产量可能较高；静态发酵法耗能低、工艺简单，但产量可能不高，较适合小规模生产。
发明内容本发明的目的是提供一种以葡萄糖等作原料的细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法，该细菌纤维素产生菌既能采用动态发酵法又能用静态发酵法生产细菌纤维素，且两种方法的细菌纤维素得率均较高。本发明所提供的微生物菌株是经选育的细菌纤维素产生菌--葡糖酸酵酸杆菌(Wwc朋aceto力sctersp.)GD-BC-l，该菌株于2008年10月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，编号为CCTCCM208149。该菌株以下简称葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149。中国典型培养物保藏中心的联系资料如下电话027-87682319传真(027)87883833E-mail:cctcc@whu.edu.cn;地址武汉武汉大学邮编430072。葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株在固体培养基(葡萄糖lOOg，酵母膏10g，碳酸钙20g，琼脂20g，蒸馏水定容至1L，调pH值至7.0-7.2.)上生长48小时，形成的菌落细小，菌落直径不超过3mm，多是圆形，凸起，边缘整齐，呈乳白色或微黄色，能形成皮革状菌膜，显微镜16X100倍观察菌体形态为单细胞、短杆菌，其主要生理生化特征见下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株的遗传学特征采用16SrRNA测序进行分类学分子鉴定。菌种基因组DNA提取采用丙酮破坏细菌细胞壁膜脂质结构，裂解液破除细菌细胞膜，释放胞内核酸，经酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质及多糖，无水乙醇沉淀DNA,TE缓冲液溶解DNA。采用两种合成的通用引物PCR扩增细菌的16SrDNA，引物如下27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3';1541R:5'-AAGGAAGTGATGCAGCCGCA-3'。PCR扩增产物纯化后直接进行序列测定，通过测序分析得到该菌株的16SrDNA序列(其序列如SEQ1所示)。葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株的16SrDNA序列全长为1436bp。将测序得到的序列送GenBank做Blast比较，其中同源性最高的菌株是G/wco"acWo6acto"sp.4L(Genbank登录号为AY741144.1),同源性达97%。结合生理生化特征试验结果，判断该菌株为葡糖酸醋酸杆菌<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>用本发明所提供的葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149，在以葡萄糖作为主要发酵原料的三角瓶中振动发酵或静置发酵均可以产生细菌纤维素，从而可以用其作为发酵菌株生产细菌纤维素。本发明所提供的用葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株生产细菌纤维素的方法，其特点是用葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149做发酵菌株，利用葡萄糖作为主要发酵原料进行发酵，动态摇瓶发酵4-10天，可产细菌纤维素2.0~8.0g/L;静置发酵4-10天，可产细菌纤维素1.5~4.4g/L。利用葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株发酵生产细菌纤维素的具体工艺过程如下(1)斜面菌种活化将培养好的保藏斜面种(葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-.lCCTCCM208149)划线于新配制的固体培养基斜面上，固体培养基斜面组成如下葡萄糖80120g，酵母膏812g，碳酸钙1525g,琼脂1522g,自来水1L，调pH值至6.5~7.2.。28-32°C培养2448小时，再冷藏于4'C1~5天。(2)菌种的液体活化将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，接种于液体活化培养基中，液体活化培养基组成如下葡萄糖80120g，酵母膏812g,蛋白胨510g，自来水1L，调pH值至6.0~7.0.。液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml,于28-32'C往复式摇床振荡培养1836小时，摇床转速为80-110r/m，冲程为65-75mm。(3)发酵取培养好的液体活化种，按5-10%接种量，接入发酵培养基中进行动态发酵或静置发酵。如果采用动态发酵方法，可用500ml(更大体积也可)的三角瓶装发酵培养基，装量为三角瓶体积的10%,如果用500ml三角瓶，则装发酵培养基50ml，于28-32'C,冲程65-80mm,转速60-110r/m的往复式摇床振荡培养4-10天，停止发酵；如果采用静置发酵方法，其步骤与动态发酵方法基本相同，区别在于不必振荡培养，而是于28-32'C静止放置4-10天后，停止发酵，即可。(4)发酵完毕的发酵液经提取工艺即得细菌纤维素产物。由于细菌纤维素在发酵完毕的发酵液中呈凝胶状固形物，因此提取细菌纤维素产物只需按以下步骤即可发酵完毕的发酵液进行固液分离，固体为细菌纤维素凝胶，液体为发酵废液，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水多次冲洗，除去表面杂质。再将细菌纤维素凝胶浸入0.1mol/L的NaOH溶液中，8(TC保温60min，除去残存的菌体和培养基。然后用去离子水反复冲洗。此时凝胶呈乳白色半透明状，再将细菌纤维素凝胶于6080'C干燥，即得到细菌纤维素。在步骤(3)中，适宜的发酵培养基成份如下(按每升培养基所含克重g/L计算)20-60g葡萄糖、5-10g蛋白胨、0.5g-1.5g酵母膏、6-10gNa2HPO4、10-20g乙醇、l-2g柠檬酸钠，其余成分为水。培养基于灭菌前调pH值至4.5-7.0，可用NaOH及HC1调节。后121'C灭菌15分钟，备用。本发明中最大的特点在于用一株葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株发酵生产细菌纤维素，在以葡萄糖作为主要发酵原料的三角瓶中振动发酵或静置发酵均可以产生细菌纤维素，而且产率较高，在最佳动态发酵工艺条件下，产细菌纤维素最高可达8.0g/L,在最佳静置发酵工艺条件下，产细菌纤维素最高可达4.4g/L,因而本发明适合不同生产环境下用不同方法生产细菌纤维素。具体实施例方式下面的实施例对本发明作详细说明，但对本发明没有限制。下面的实施例中用到的斜面种采用如下方法培养葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149划线于新配制的固体斜面上，固体斜面组成如下葡萄糖80120g，酵母膏S12g，碳酸钙1525g，琼脂1522g,蒸馏水定容至1L，调pH值至6.57.2.。28-32°C培养2448小时，再冷藏于4°C冰箱备用。将上述斜面上约lcm2面积的菌种刮下，接种于液体活化培养基中，液体活化培养基组成如下葡萄糖80120g，酵母膏812g，蛋白胨510g,自来水1L，调pH值至6.0~7.0.。液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml,于28-32。C往复式摇床振荡培养1836小时，摇床转速为80-110r/m，冲程为65-75mm。实施例一取4'C冰箱内保藏5天的斜面种[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖80，酵母膏8，碳酸钙15,琼脂15，其余成分为水，pH6.5。28'C培养24小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(g/L):葡萄糖80，酵母膏8,蛋白胨5，其余成分为水，调pH值至6.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml，于28t)往复式摇床振荡培养18小时，摇床转速为80r/m，冲程为65mm。取上述培养好的液体活化培养基按5%接种量(2.5ml)接种到新配置、121'C灭菌15分钟并已冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下20g葡萄糖、5g蛋白胨、0.5g酵母膏、6gNa2HP04、10g乙醇、lg柠檬酸钠，其余成分为水，NaOH调pH值至7.0。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，32'C静止放置4天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水冲洗2次，将细菌纤维素凝胶浸入0.1mol/L的NaOH溶液中，80'C保温60min，，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于8(TC干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为1.5g/L。实施例二取4'C冰箱内保藏5天的斜面种[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖80，酵母膏8，碳酸钙15，琼脂15，其余成分为水，P冊.5。28°C培养24小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(g^):葡萄糖80，酵母膏8,蛋白胨5，其余成分为水，调pH值至6.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml，于28。C往复式摇床振荡培养18小时，摇床转速为100r/m,冲程为75mm。取上述培养好的液体活化培养基按5%接种量(2.5ml)接种到新配置、121'C灭菌15分钟并已冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下20g葡萄糖、5g蛋白胨、0.5g酵母膏、6gNa2HP04、10g乙醇、lg柠檬酸钠，其余成分为水，NaOH调pH值至7.0。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，于28'C、冲程65mm、转速60r/m的往复式摇床振荡培养4天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水冲洗2次，将细菌纤维素凝胶浸入O.lmol/L的NaOH溶液中，8(TC保温60min，，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于8(TC干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为2.0g/L。实施例三取4'C冰箱内保藏3天的斜面种，[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖IOO，酵母膏10，碳酸钙25，琼脂18，其余成分为水，PH7.2。32°C培养36小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(g/L):葡萄糖100，酵母膏10，蛋白胨7.5，其余成分为水，调pH值至7.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml,于32'C往复式摇床振荡培养28小时，摇床转速为90r/m，冲程为75mm。取上述培养好的液体活化培养基按7%接种量(3.5ml)接种到新配置、121'C灭菌15分钟并已冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下40g葡萄糖、7.5g蛋白胨、lg酵母膏、8gNa2HP04、15g乙醇、1.5g柠檬酸钠，其余成分为水，HCl调pH值至4.5。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，28。C静止放置7天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水冲洗3次，将细菌纤维素凝胶浸入0.lmol/L的NaOH溶液中，80'C保温60min，，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于70'C干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为3.lg/L。实施例四取4'C冰箱内保藏3天的斜面种，[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖IOO，酵母膏10，碳酸钙25，琼脂18，其余成分为水，pH7.2。32°C培养36小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(gi):葡萄糖100，酵母膏10,蛋白胨7.5，其余成分为水，调pH值至7.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml，于32'C往复式摇床振荡培养28小时，摇床转速为90r/m，冲程为75mm。取上述培养好的液体活化培养基按7%接种量(3.5ml)接种到新配置、121'C灭菌15分钟并已冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下40g葡萄糖、7.5g蛋白胨、lg酵母膏、8gNa2HP04、15g乙醇、1.5g柠檬酸钠，其余成分为水，HCl调pH值至4.5。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，.于28。C、冲程75mm、转速90r/m的往复式摇床振荡培养7天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水冲洗3次，将细菌纤维素凝胶浸入O.1raol/L的NaOH溶液中，80'C保温60min，，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于7(TC干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为5.6g/L。实施例五取4'C冰箱内保藏1天的斜面种，[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖120，酵母膏12，碳酸钙20，琼脂22，其余成分为水，PH7.0。30°C培养48小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(g/L):葡萄糖120，酵母膏12，蛋白胨10，其余成分为水，调pH值至6.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml，于30'C往复式摇床振荡培养36小时，摇床转速为110r/m，冲程为70mm。取上述培养好的液体活化培养基按10%接种量(5ml)接种到新配置、12rC灭菌15分钟并已冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下60g葡萄糖、10g蛋白胨、1.5g酵母膏、10gNa2HPO4、20g乙醇、2g柠檬酸钠，其余成分为水，调pH值至5.5。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，30'C静止放置10天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离,取出细菌纤维素凝胶,蒸馏水冲洗3次,将细菌纤维素凝胶浸入0.1mol/L的NaOH溶液中，80'C保温60min,，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于6(TC干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为4.4g/L。实施例六取4t:冰箱内保藏l天的斜面种，[斜面培养基的组成(g/L):葡萄糖120，酵母膏12，碳酸钙20,琼脂22,其余成分为水，pH7.0。30°C培养48小时]，用接种针将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，转接到新配置的液体活化培养基中[液体活化培养基的组成(g/L):葡萄糖120，酵母膏12，蛋白胨10，其余成分为水，调pH值至6.0。]，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml,于3(TC往复式摇床振荡培养36小时，摇床转速为110r/m，冲程为70mm。取上述培养好的液体活化培养基按10%接种量(5ml)接种到新配置、12rC灭菌15分钟并己冷却至室温的发酵培养基上，发酵培养基的组成(g/L)如下60g葡萄糖、10g蛋白胨、1.5g酵母膏、10gNa2HPO4、20g乙醇、2g柠檬酸钠，其余成分为水，调pH值至5.5。发酵培养基装于500ml三角瓶中，三角瓶装量为50ml，于30'C、冲程70mm、转速110r/m的往复式摇床振荡培养10天，停止发酵，将发酵完毕的发酵液进行固液分离，取出细菌纤维素凝胶，蒸馏水冲洗3次，将细菌纤维素凝胶浸入0.1mol/L的NaOH溶液中，80'C^温60min，，然后用去离子水冲洗2次后，再将细菌纤维素凝胶于6(TC干燥至恒重，用天平称重，得出细菌纤维素的产量为8.0g/L。序列表<110>广东省微生物研究所〈120〉细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法<160>1<210〉1<211〉1436<212〉DNA<213>葡糖酸醋酸杆菌(67uco"aceto6actersp.)GD-BC-1〈400〉1ATTCATGGGGGCTGCTTACCATGCAGTCGCACGAACCTTTCGGGGTTAGTGGCGGACGGG60TGAGTMCGCGTAGGGATCTGTCCATGGGTGGGGGATAACTTTGGGAMCTGAAGCTAAT120ACCGCATGACACCTGAGGGTCAAAGGCGCAAGTCGCCTGTGGAGGAACCTGCGTTCGATT180AGCTAGTTGGTGGGGTMAGGCCTACCAAGGCGATGATCGATAGCTGGTCTGAGAGGATG240ATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGMT300ATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCMTGCCGCGTGTGTGAAGMGGTTTTCGGA360TTGTMAGCACTTTCAGCGGGGACGATGATGACGGTACCCGCAGAAGAAGCCCCGGCTAA420CTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGMGGGGGCAAGCGTTGCTCGGAATGACTGGGCG480TMAGGGCGCGTAGGCGGTTGTTACAGTCAGATGTGMATTCCCGGGCTTAACCTGGGGG540CTGCATTTGATACGTGATGACTAGAGTGTGAGAGAGGGTTGTGGAATTCCCAGTGTAGAG600GTGAMTTCGTAGATATTGGGAAGMCACCGGTGGCGAAGGCGGCAACCTGGCTCATGAC660TGACGCTGAGGCGCGAMGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGC720TGTAMCGATGTGTGCTGGATGTTGGGTGACTTTGTCATTCAGTGTCGTAGTTMCGCGA780TAAGCACACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGMACTCAAAGGAATTGACGGGGGC840CCGCACMGCGGTGGAGCATGTGGTTTMTTCGAAGCAACGCGCAGMCCTTACCAGGGC900TTGACATGCGGAGGCTGTGTCCAGAGATGGGCATTTCTCGCAAGAGACCTCCAGCACAGG960TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCG1020CAACCCTCGCCTTTAGTTGCCATCACGTCTGGGTGGGCACTCTAAAGGAACTGCCGGTGA1080CAAGCCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGTCCTGGGCTACA1140CACGTGCTACAATGGCGGTGACAGTGGGAAGCCAGGTGGTGACACCGAGCCGATCTCAAA1200AAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGGTGGAATCGCTAGT1260AATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGMTACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCA1320CACCATGGGAGTTGGTTTGACCTTAAGCCGGTGAGCGAACCGCAAGGACGCAGCCGACCA1380CGGTCGGGTCAGCGACTGGGGGAAGTCGAACAAGAGCTGCATAAGTTAAACGGGGT143权利要求1、一种细菌纤维素产生菌，其特征在于该菌株是经选育的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobactersp.)GD-BC-1CCTCCM208149。2、一种细菌纤维素的制备方法，其特征在于用葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149做发酵菌株，利用葡萄糖作为主要发酵原料进行发酵。3、根据权利要求2所述的细菌纤维素的制备方法，其特征在于工艺过程如下(1)斜面菌种活化将培养好的葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149保藏斜面种划线于新配制的固体培养基斜面上，固体培养基斜面组成如下葡萄糖80120g,酵母膏S12g,碳酸钙1525g，琼脂1522g，自来水1L,调pH值至6.57.2，28-32°C培养2448小时，再冷藏于4'C1~5天；(2)菌种的液体活化将上述斜面上约1cm2面积的菌种刮下，接种于液体活化培养基中，液体活化培养基组成如下葡萄糖80120g,酵母膏812g,蛋白胨510g，自来水1L,调pH值至6.0~7.0，液体活化培养基装于250ml三角瓶中，三角瓶装量为20ml,于28-32。C往复式摇床振荡培养1836小时，摇床转速为80-110r/m，冲程为65-75mm;(3)发酵取培养好的液体活化种，按5-10%接种量，接入发酵培养基中，进行动态或静置发酵；当采用动态方法发酵时，用500ml以上容积的三角瓶装发酵培养基，装量为三角瓶体积的10%，于28-32°C,冲程65-80mm，转速60-110r/m的往复式摇床振荡培养4-10天，停止发酵；当采用静置方法发酵时，用500ml以上容积的三角瓶装发酵培养基，装量为三角瓶体积的10%,于28-32'C静止放置4-10天后，停止发酵；(4)发酵完毕的发酵液按以下工艺提取细菌纤维素产物将发酵完毕的发酵液通过固液分离，得到细菌纤维素凝胶，用蒸馏水多次冲洗，除去其表面杂质，再将细菌纤维素凝胶浸入0.1mol/L的NaOH溶液中，80。C保温60min，除去残存的菌体和培养基，然后用去离子水反复冲洗，得到呈乳白色半透明状的凝胶，再将该凝胶于608(TC干燥，即得细菌纤维素产品。4、根据权利要求2或3所述的细菌纤维素的制备方法，其特征在于所述的发酵培养基成份按每升培养基所含克重g/L计算为20-60g葡萄糖、5-10g蛋白胨、0.5g-1.5g酵母膏、6-10gNa2HP04、10-20g乙醇、l-2g柠檬酸钠，其余成分为水；培养基于灭菌前调pH值至4.5-7.0。全文摘要本发明提供一种细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法，该菌株是经选育的葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149。用该菌株做发酵菌株，并利用葡萄糖作为主要发酵原料进行发酵，可制备得到细菌纤维素，其制备方法包括斜面菌种活化，菌种的液体活化，将液体活化种接入发酵培养基中进行动态发酵或静置发酵和在发酵液中提取细菌纤维素产物等工艺步骤。本发明以葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1CCTCCM208149菌株发酵生产细菌纤维素，在以葡萄糖作为主要发酵原料的三角瓶中振动发酵或静置发酵均可以产生细菌纤维素，而且产率较高，适合在不同生产环境下用不同方法生产细菌纤维素。文档编号C12P19/04GK101381694SQ200810218500公开日2009年3月11日申请日期2008年10月21日优先权日2008年10月21日发明者劲冯,静冯,施庆珊,欧阳友生,疏秀林,谢小保,陈仪本,陈爱美申请人:广东省微生物研究所