专利名称：裂殖壶菌高密度培养的营养物配方的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种大幅度提高海洋真菌——裂殖壶菌生物量，并提高其代谢产物 DHA (二十二碳六烯酸)产量的营养物配方，属于生物工程领域。
背景技术：
DHA(二十二碳六烯酸)属于ω-3系列多不饱和脂肪酸中的一种，其烯键位置为 Δ4，Δ7，Δ 10，Δ 13，Δ 16，Δ 19，据有关报道，DHA具有健脑作用、保护和改善视力、预防和 治疗心血管疾病、降低血管阻力、减低血液粘稠度、抑制血小板凝聚、抗血栓和降低血压、改 善血液粘度、防止动脉硬化、预防老年痴呆、抗肿瘤、提高运动员耐久力等生理功能。DHA的功能决定了它是一种非常有价值的产物，值得开发，在国际市场上把它开发 成食品添加剂、饲料添加剂及保健品，富含DHA的鱼油已经被《美国医师用药手册PDR》列为 防治高血脂的第四类参考用药。DHA的早期主要来源是一些深海鱼，但是，这种来源存在着一些突出的缺陷资源 有限、提取工艺复杂、污染环境、含有强烈的鱼腥味而不适于食品添加等。很多藻类和海洋 微生物能够合成DHA，为DHA的来源开辟了新的途径，并解决了传统来源DHA的一些弊端。裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)是产DHA的重要海洋微生物之一，DHA的含量能 占其总脂肪酸的15% 20%。在推进裂殖壶菌实现DHA产业化的过程中，生物量和DHA产 量无疑是最重要的决定因素，它们直接决定了 DHA的生产成本和可开发性，在以往的工作 中，已基本确定了裂殖壶菌培养的基质和碳源、氮源，进一步提高生物量和DHA产量需要对 裂殖壶菌的培养进行更加细致的工作。
发明内容
本发明利用从广东湛江地区红树林中筛选得到一株产DHA裂殖壶菌 (Schizochytrium sp.)，在确定了以一定浓度的海水为基质，并确定了基本的碳源、氮源和 基本培养条件后对促进裂殖壶菌生物量积累、促进菌丝体中DHA积累的一些重要营养。本发明的目标是这样实现的(1)首先，通过单因子实验对多种维生素(包括Vb系列、VD、VH、VK、Vpp、硫辛酸、VR等)、多种氨基酸(选择了常见的15种氨基酸)和多种微量元素(包括铜、铁、钴、锰、锌、 钼、镍、铬、锡等)进行了考察分析，找出与生物量及DHA积累量具有正相关的因子，排除与 生物量及DHA积累量无关或具负相关的因子。(2)在单因子实验基础上，利用正交设计试验分别对维生素、氨基酸和微量元素的 添加量和添加比例进行了优化，通过统计分析，得到了以下结果a优化的维生素含量配方Vbl (硫胺素)10ppm士 1ppmVb2 (核黄素)20ppm 士 2ppmVb6(吡哆醇)60ppm士5ppmVB12(钴胺素)
硫辛酸
Vk
VPP (尼克酰胺) Vb9 (叶酸)
14ppm士Ippm 30ppm士3ppm 20ppm士2ppm IOppm士Ippm 30ppm士3ppm
b优化的氨基酸含量配方 蛋氨酸2. 5g/L 3. Og/L
赖氨酸0. 3g/L 0. 5g/L
组氨酸0. 3g/L0. 5g/L
谷氨酰胺1. Og/L 1. 2g/L
苏氨酸1. 8g/L 2. Og/L
c优化的微量元素含量配方
2+
90ppm 20ppm 5ppm 60ppm
^ IOOppm ^25ppm IOppm ^70ppm
Mn」
Co2+ Fe2+ Ni2+
Se (SeO32"的形式)120ppm 130ppm。
(3)在以海水为基质，葡萄糖和甘油为碳源、酵母粉和大豆蛋白胨为氮源的培养基 上，使用本发明的配方，最后能使裂殖壶菌的生物量(以菌丝干重计算)达到115g/L以上， 最高达125. 2g/L ；DHA积累量达菌丝干重的15%以上，最高达19. 2%。
权利要求
1.一种裂殖壶菌(Schizochytrium)的高密度培养的营养物配方，其特征在于在培养 基中使用了复合维生素、复合氨基酸及复合微量元素。
2.根据权利要求1所述的营养物配方，其特征在于配方应用于海洋真菌裂殖壶菌属。
3.根据权利要求1所述的复合维生素，其特征在于组成为Vbl(硫胺素)、Vb2 (核黄 素)、Vb6 (吡哆醇)、VB12 (钴胺素)、硫辛酸、Vk、Vpp (尼克酰胺)、Vb9(叶酸)。
4.根据权利要求1所述的复合氨基酸，其特征在于组成为蛋氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷 氨酰胺、苏氨酸。
5.根据权利要求1所述的复合微量元素，其特征在于组成为Mn2+、Co2+、Fe2+、Ni2\ Se (SeO32"的形式)。
6.根据权利要求2所述的复合维生素，其特征在于在培养基中的含量为 Vbl (硫胺素)IOppm士 IppmVb2(核黄素)20ppm士 2ppmVb6 (吡哆醇)60ppm士 5ppmVB12(钴胺素) 14ppm士 Ippm 硫辛酸30ppm 士 3ppmVk20ppm士2ppmVpp (尼克酰胺) IOppm士 Ippm Vb9(叶酸)30ppm士 3ppm。
7.根据权利要求3所述的复合氨基酸，其特征在于在培养基中的含量为 蛋氨酸2. 5g/L 3. Og/L赖氨酸0. 3g/L 0. 5g/L组氨酸0. 3g/L0. 5g/L谷氨酰胺1. Og/L 1. 2g/L苏氨酸1. 8g/L2. Og/L。
8.根据权利要求4所述的复合微量元素，其特征在于在培养基中的含量为 Mn2+90ppm IOOppmCo2+20ppm 25ppmFe2+5ppm IOppmNi2+60ppm 70ppmSe (SeO32-的形式)120ppm 130ppm。
全文摘要
本发明涉及一种大幅度提高海洋真菌——裂殖壶菌生物量，并提高其代谢产物DHA(二十二碳六烯酸)产量的营养物配方，所涉及营养物包括复合维生素、复合氨基酸及复合微量元素，最后能使裂殖壶菌的生物量(以菌丝干重计算)达到115g/L以上，最高达125.2g/L；DHA积累量达菌丝干重的15％以上，最高达19.2％，本发明使得利用裂殖壶菌进行DHA产业化成为可能。
文档编号C12P7/64GK101993824SQ20091016925
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月25日 优先权日2009年8月25日
发明者曾洪梅, 林爱玉, 王顺岭 申请人:王顺岭