专利名称：利用初级糖代谢基因提高阿维菌素的产量的制作方法
技术领域：
本发明涉及基因工程领域以及微生物学领域，特别涉及一类与阿维菌素产量相关
的基因以及操作该类基因提高阿维菌素产量的用途。
背景技术：
阿维菌素(Avermectins， AVM)是一类广泛使用，高效低毒的农用抗生素，其在农 用生产中扮演了非常重要的角色。它是于1976年由美国的默克公司和日本的北理研究 所从来自日本的一份土壤中的链霉菌发酵产物中分离得到的，目前主要通过除虫链霉菌 (Str印tomyces avermitilis)发酵生产，其具有十六元大环内酯的化学结构。从结构上来 讲根据C-5、 C22-23， C26位置上的结构差别可分为Ala、 Alb、 A2a、 A2b、 Bla、 Blb、 B2a、 B2b 八种组分。其中Bla是最具活性的组分，被广泛应用于家畜寄生虫的感染治疗和农业虫害 的防治，目前已经成为一种非常重要的生物农药。 由于阿维菌素本身的重要性，从其投入到工业生产开始，以提高菌种发酵产量的 研究工作一直未曾停止，而其中使用最为频繁的是常规的随机诱变育种，但是这种方法具 有很大的不确定性，而且菌种经长期使用诱变剂处理后，其生存能力会慢慢下降。通过对阿 维菌素生物合成的研究，结合初级代谢过程中碳源的代谢途径，可以发现其生物合成前体 主要来自于碳源代谢的其中一条支路，而针对这个特点，我们完全可以通过对其他碳源的 代谢支路进行控制，使原料更多地转向阿维菌素生物合成所需的前体，从而提高阿维菌素 的产量。 此前，已有研究表明在天蓝链霉菌中通过敲除其中一个编码负责催化6-磷酸葡 萄糖转为6-磷酸葡萄糖内酯的6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因，能使抗生素放线紫红素的产 量提高(A卯l. Environ. Microbiol. 2006， 72， 7132-7139)。而通过对除虫链霉菌的全基因序 列进行分析，可以发现其中也含有两个类似的基因，通过对其中的一个进行敲除也可以发 现突变株阿维菌素的产量相对于原始菌株有了明显的提高。
发明内容
本发明的目的是提供一类除虫链霉菌(Str印tomyces avermitilii)中6_磷酸葡
萄糖脱氢酶失活的zwf2基因，基因失活方法以及用于生产阿维菌素的用途，所述的6-磷酸
葡萄糖脱氢酶基因(zwf2)进行失活后使用可提高阿维菌素产量的基因及方法。 在本发明的一个方面，提供一种位于阿维菌素生物合成基因序列以外的基因序
列，通过在除虫链霉菌中敲除这个编码6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因可以提高阿维菌素的
产量，所述的基因选自zwf2基因，并且诉述的基因来自除虫链霉菌基因组。 本发明的第二方面，提供一种通过增加前体的供应量来提高除虫链霉菌中阿维菌
素表达量的方法，包括以下步骤在除虫链霉菌基因组中敲除初级代谢过程中的一个编码
6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因，并且诉述的基因选自zwf2基因。 在本发明的_个优选例中，所述的将目的基因在除虫链霉菌基因组上敲除包括以下步骤 (a)构建含有目标基因5'和3'旁侧序列和红霉素抗性基因的敲除载体。(b)将含有基因取代载体的宿主菌株作为供体菌株，通过供体菌株-链霉菌接合
转移的方法导入到除虫链霉菌中，得到含有基因取代载体的除虫链霉菌转化子。
(c)转化子经高温诱导得到单交换突变株，再将单交换传代后获得发生了同源双
交换的重组除虫链霉菌突变株。 (d)所述敲除载体中基因的5'端旁侧序列、红霉素抗性基因3'-5'序列和基因3'端旁侧序列按上述顺序且按上述方向顺次连接。 用于构建敲除载体的出发载体为任意一种大肠杆菌-链霉菌穿梭载体，如pKC1139，pKC505，pIJ653，pIJ8154，优选为pKC1139。以pKC1139为出发载体构建的基因取代载体为pWJb5452。 本发明的另一优选例中，所述的宿主细胞为大肠杆菌细胞。 本发明的第四个方面，提供了一种生产阿维菌素的方法，包括下面步骤 (1)发酵本发明上述的敲除目的基因的除虫链霉菌； (2)从发酵产物中分离阿维菌素。 在本发明的一个优选例中，所述的基因位于除虫链霉菌基因组中，且只有一个拷贝，位于阿维菌素生物合成基因序列之外。 在本方明的第五个方面，提供所述的敲除zwf2基因的除虫链霉菌的用途，其特征在于，用于生产阿维菌素。 本发明的其它方面由于本发明的公开内容，对于本领域的技术人员而言是显而易见的。
图1 :敲除zwf2基因置换质粒pWJb5452的构建过程。 图2 :avaL2基因置换突变菌株的PCR验证。所用引物zwf2f :5 ' -GAACGACCTGCTCAAGTC-3'禾P引物zwf 2r : 5' -GTGTCCGTGAGGTCGATC—3' ， PCR扩增出约1. 8kb的序列，切胶回收后用zwf2f和zwf2R为引物测序验证。泳道1，2，3，5，6 :1. 8kb区域显示信号，泳道4 :DL 5000DNA分子量标准(从上到下依次为5kb， 3kb， 2kb， 1. 5kb， lkb，750bp，500bp) 图3:zwf2基因置换突变菌株与野生型菌株发酵产物的分析对比。Bla代表阿维菌素Bla组分。(A)HPLC图谱；(B)柱状对比图，1代表野生型，2代表zwf2基因置换突变株。
具体实施例方式
本发明人经过广泛而深入的研究，发现了一种可影响除虫链霉菌抗生素(阿维菌素)生产的基因，所述基因为zwf2基因。将所述的基因在除虫链霉菌基因组中进行敲除，可大大提高阿维菌素的产量。基于以上完成了本发明。所述基因来自除虫链霉菌(Str印tomyces avermitilis)本身的基因组中。如本发明所用，所用到的基因编码的蛋白为参与初级代谢过程中糖代谢途径中碳源转为辅因子等的代谢支路过程，且除虫链霉菌(Str印tomyces avermitilis)的总基因序列 还含有另外一个与其有类似功能的基因，敲除本发明所述的基因不会影响除虫链霉菌的生长状态。 在本发明中，所用的"6-磷酸葡萄糖脱氢酶"是指在初级代谢过程中的负责催化6-磷酸葡萄糖转为6-磷酸葡萄糖内酯的一种酶，其控制了糖代谢过程中一个转向辅因子等代谢产物的一个支路，并且本发明用到的除虫链霉菌分别有两个基因编码这种酶，敲除目标基因不会完全终止此支路，只会减少此支路消耗的碳源。在本发明中，从除虫链霉菌基因组中获得的所述zwf2基因(GenBank登录号为BAC74024. 1)，该基因由外源导入敲除载体后被红霉素抗性基因所替代，形成除虫链霉菌突变株。 在本发明中，"除虫链霉菌"(Str印tomyces avermitilis)是一种能够产生阿维菌素(avermectins AVM)的菌。 在本发明中，大肠杆菌-链霉菌穿梭载体是指一类能由大肠杆菌转到链霉菌中的质粒，包括(但是不限于)pKC1139。 在本发明中，"基因转移"是指将外源的遗传物质由供体菌导入到受体菌内的过程，其可以通过转化、接合转移、转导、细胞融合等手段来实现。"接合转移"是指细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质(主要是质粒DNA)从供体菌转移给受体菌。本发明敲除的基因zwf2(核苷酸序列表序列1)，具有以下的核苷酸序列ttgtcgagcagcaacccgctgcgtgaccccgC3g3CCg3Cggctcccgcgtetcgcgggg60ccgtcgggcctggtcatcttcggcgtcacgggcgatttgtcacgte皿皿gctgatgcca120gccgtgtecgatctcgccaaccgcgggctgctgccgccgggcttctcgctcgtcggcttc180gcccgccgcg3Ctggg3gC3cgaggacttcgcccaggtcgtccacgacgccgtc皿gg皿240cacgcccgtecggagttccgtggC3gC3gCtcatccaggggatgcgcttc300gtCC3gggC3ccttcgacgacgacgacgccttcgagcggctgcgcgacaccatcgggg皿360ctggac皿ggC3C3gggC3Cgggcggc雄ttcgccttctacctgtccgtgccgccgtcc420gccttcccggtggtcatccagcagctc皿g皿gcacggcctggccgaccagtcggacggc■tcctggcgccgcgcggtcatcgag皿gcccttcggacacgacctcaagtcggccg郷ag540ctcaacgcgatcgtccacgaggtcttcggctcggaccaggtcttccgcatcgaccactec600ctggg咖ggagaccgtccagaacatcctggcgctgcgcttcgccaacacgatgttcg3g660ccgatctggaaccggtccttcgtggaccatccatggccgagg織tcggt720atcggcggccgcgccggctectecgacggcatcggcgccgcccgtgacgtcatccagaac780cacctgctcc3gCtg3tggCactgaccgccccgcctccttCg3CgCgg3C840gcgctcgccgCCg3g皿g3Ccaaggtgctcggcgccgccaagctgccg皿ggacctgagc■皿g皿C3CCgtccgcggacagtecgcggccggctggc郷gcggcg卿aggtcgtcggc960tetctccagg朋gacggcatcgaccccaagtcg皿gaccgacacctecgcggccgtc皿g1020ctcgaggtggacaaccgccgctgggcgggcgtccccttctatctccgteccggc皿gcgc1080ctgggccgccgcgtcaccgagatcgcggtcgtcttccagcgcgccccgcactcccccttc1140g3CC3C3CggCg3Cgg郷3gctcggccag皿cgcgatcgtcatccgcgtccagcccgac1200g3gggC3tC3ccgtccgcttcggctccaaggtgcccggcacctcgatgga gatccgggac1260gtctcgatggacttcgcgtecggcgagtcgttcaccgagtccagcccgg3 ggcgtecgag1320cggctgattctggacgtgctgctcggcgactcgaacctcttcccgcgcac1380gagctgtcctgg皿gatcctcgacccgatcg3gg3gC3Ctggg3C皿gC3cggcaagccc1440
6
gcgcagtacc ccgcgggcac gtggggtccc gtcgaggcgg acgaaatgct cgaacgagac 1500
ggacggagct ggcgtcgccc atga 1524
如本发明所用，中断上述基因包括对上述基因进行替换、关键残基点突变、同框敲除等对目标基因失活的手段。 本发明提供的中断质粒的构建方法，系由载体和在多克隆位点上加入中断的目的基因旁侧序列和红霉素抗性基因序列组成，载体为大肠杆菌和链霉菌穿梭质粒，可以为pKC1139、p0J260、pWHM3等及其类似的载体。
进一步的描述如下 本发明的基因能够负向影响阿维菌素的生物合成，当将该类基因敲除后，可以提高阿维菌素的产量。并且本发明人选择了合适的接合转移载体，即带有温敏型复制子的质粒pKC1139，利用同源重组技术，得到了稳定的基因突变株。 在检测阿维菌素产量时，可通过测量出发菌株和改良菌株产生的有效组分Bla(avermectin Bla，中文全名:2， 6_双脱氧-4-0-(2， 6_双脱氧3_0_甲基_a_L-阿拉伯糖基_吡喃己基)-3-0-甲基-a-L-阿拉伯糖基-吡喃己基[氧化]-3' ， 4' ， 6， 6， 7， 10， 14，15，17a，20，20a，20b-十四氢-20，20b-)双羟-5'，6，8， 19-四甲基-6' -(l-甲丙基)螺旋[11， 15-甲撑-2H， 13H， 17H-呋喃]4， 3， 2-pq， 2， 6，[苯丙双氧环八癸炔]_吡喃_17_酮)的含量为标准，检测阿维菌素的产量是否提高。 本发明中所用于实施例或其他内容所显示的成分用量、反应条件等数字均为大约数值。因此除非文中特别注明，本说明书的上述数字参数均为近似值，其可根据所需得到的本发明的结果而加以变化。 除特别说明外。文中所用到的专业术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或者均等的方法及材料均可应用于本发明的方法之中。实验中未注明的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYork : Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述条件或者按照制造厂商所建议的条件。 本发明的主要特点在于 1.发现了一种与除虫链霉菌的阿维菌素产量密切相关的基因。 2.发现敲除其中的zwf2基因可以大大提高除虫链霉菌的阿维菌素的产量。 3.本发明采用接合转移的手段将中断质粒导入到受体菌中，诱导发生双交换，得
到了稳定的基因型突变株。 下面结合具体的实施例来进一步说明本发明。应该理解的是，所用实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。 实施例中所用培养基，除特殊说明外，液体均用YEME培养基，固体均用MS培养基。
实施例中断zwf2基因对阿维菌素(avermectin)产量的影响
1 :左右交换同源臂的获得 以Str印tomyces avermitilis的基因组为模板，采用引物5' -AAA GAA TTCCACGAT CGA CAA GAA CTC-3'和引物5' -AAA TCT AGA GAC TTG AGC AGG TCG TTC-3'克隆得到左臂约2kb的PCR产物，利用酶切位点连入pGEM-7zf中，再用引物5'-AAA CTC GAG ACTAGT AGA TCG ACC TCA CGG ACA C-3'和引物5' -AAA AAG CTTCAG CAA CAT CGA CGT ACTC-3'得到右臂约2kb的PCR产物，利用酶切位点连入pSP72中。
2 :抗性基因片段的获得 红霉素抗性基因是通过利用酶切位点Xhol和Xbal从质粒pAGE_2中切取所得，长 约1. 8kb。 3 :重组质粒pWJb5452的获得 将左臂从载体中用核酸内切酶EcoRI和XbaI切出来，将右臂用核酸内切酶 HindIII和Xhol从构建的质粒中切出来，与切出的抗性片段一起连入用HindIII和EcoRI 切好的pKC1139中，具体构建可见附图1。
4 :中断zwf2基因突变株的获得和生物效价的评定 将用于中断的重组质粒pWJb5452转入到大肠杆菌ET12567中，通过大肠杆菌和链
霉菌之间的属间接合转移将重组质粒导入到链霉菌中，37t:整合后松弛诱导发生双交换，
双交换突变株利用PCR验证，基因型验证结果见图2，由于替换的红霉素抗性基因片段本身 与zwf2基因相差不大，因此将扩增出的目标带回收后测序验证，得到突变株2。
在相同发酵条件下对比出发菌株和突变后的菌株产阿维菌素Bla的量分析。
将保存好的孢子解冻后，涂于平板培养基上，平板培养基配方为葡萄糖(国药集 团化学试剂有限公司)1. 5%、天门冬酰氨(华美生物工程公司)0. 05%、进口牛肉浸膏(中 国医药(集团)上海化学试剂公司)0.3%、磷酸二氢钾(天津市化学试剂六厂)O. 05%、琼 脂1.8%。 3(TC培养五天后，用打孔器取一小块放到种瓶内。 种子培养基配方为玉米淀粉3%、豆粕粉0.8%、花生饼粉1%、酵母浸提物 0.4%、氯化钴(中国医药(集团)上海化学试剂公司，l^的溶液)0.3^、淀粉酶4ii/g淀粉。 配制时先将玉米淀粉糊化(玉米淀粉用少量水溶解，加入淀粉酶，搅拌均匀，倒入 约1/2总量的沸水中，煮沸)，加入其他原料(也用冷水调匀)，定容后调pH值6. 8 7，分 装40ml/250ml三角瓶，121。C灭菌25min。 28。C ， 200rpm培养两天后，吸取1. 5ml到摇瓶中。
发酵培养基配方为玉米淀粉14%、豆粕粉2.8%、酵母粉1 %、钼酸钠 (1% )2. 2%。、硫酸锰(0. 1% )2. 3%。、硫酸铵(5% )5%。、氯化钴(1% )2%。。
配制时先将玉米淀粉用冷水溶解调匀，加入淀粉酶(1. 5 2单位没克淀粉)，水浴 加热，变稀后计时保温12min(在升温过程中，料液会由乳白色变为半透明浆糊状，此时开 始计时)，取出，加入其它原料(先用冷水调匀)，定容，调pH，起始pH值约6. 3，调至7. 5，然 后加入碳酸钙0. 8%。，搅拌均匀，边搅拌边分装30ml/250ml三角瓶，12rC灭菌25min。
摇瓶在28°C ， 200rpm的条件下培养十天，取lml菌液，加4ml甲醇，超声10min，离 心取上清，HPLC检测。 检测条件为检领lj波长UV = 245nm;柱子VARIAN 250/4.6 SN 282566MICR0S0RB-MV 100-5 C18 R008620005 ;流动相条件v = lmL/min ;A溶液=H20 ;B 溶液=CH30H ;洗脱条件为85% B， 15% A，洗脱时间为20min。 分析HPLC结果可以看出，原始出发菌株阿维菌素的产量约为418.57ug/ml，突变 株的产量为976. 53ug/ml，增产为133%。具体的HPLC图谱以及产量对比柱形图见附图3。
SEQUENCE LISTING
〈110〉中国科学院上海有机化学研究所
80089] 〈120〉利用初级糖代谢基因提高阿维菌素的产]
0090] 〈130〉说明书，权利要求书
0091] 〈160>1
0092] 〈170>PatentIn version 3. 5
0093] 〈210>1
0094] 〈211>1524
0095] 〈212>DNA
0096] 〈213>Streptomyces avermitilis
0097] 〈220〉〈221〉中国科学院上海有机化学研究所〈222〉(1). (1524)〈400〉1ttgtcgagcagcaacccgctgcgtgaccccgcagaccgacggctcccgcgtetcgcgggg60ccgtcgggcctggtcatcttcggcgtcacgggcgatttgtcacgte皿皿gctgatgcca120gccgtgtecgatctcgccaaccgcgggctgctgccgccgggcttctcgctcgtcggcttc180gcccgccgcg3Ctggg3gC3cgaggacttcgcccaggtcgtccacgacgccgtc皿gg皿240cacgcccgtecggagttccgtggcagragctcatccaggggatgcgcttc300gtccagggraccttcgacgacgacgacgccttcgagcggctgcgcgacaccatcgggg皿360ctggac皿ggC3C3gggC3Cgggcggc雄ttcgccttctacctgtccgtgccgccgtcc420gccttcccggtggtcatccagcagctc皿g皿gcacggcctggccgaccagtcggacggc■tcctggcgccgcgcggtcatcgag皿gcccttcggacacgacctcaagtcggccg郷ag540ctcaacgcgatcgtccacgaggtcttcggctcggaccaggtcttccgcatcgaccactec600ctggg咖ggagaccgtccagaacatcctggcgctgcgcttcgccaacacgatgttcgag660ccgatctggaaccggtccttcgtggaccatccatggccgagg織tcggt720atcggcggccgcgccggctectecgacggcatcggcgccgcccgtgacgtcatccagaac780cacctgctcc3gCtg3tggCactgaccgccccgcctccttcgacgcggac840gcgctcgccgCCg3g皿g3Ccaaggtgctcggcgccgccaagctgccg皿ggacctgagc■皿g皿C3CCgtccgcggacagtecgcggccggctggc郷gcggcg卿aggtcgtcggc960tetctccagg朋gacggcatcgaccccaagtcgaagaccg acacctecgcggccgtc皿g1020ctcgaggtggacaaccgccgctgggcgggcgtccccttct atctccgteccggc皿gcgc1080ctgggccgccgcgtcaccgagatcgcggtcgtcttccagcgcgccccgcactcccccttc1140g3CC3C3CggCg3Cgg郷3gctcggccagaacgcgatcg tcatccgcgtccagcccgac1200g3gggC3tC3ccgtccgcttcggctccaaggtgcccggca cctcgatgga gatccgggac1260gtctcgatggacttcgcgtecggcgagtcgttcaccgagtccagcccgga ggcgtecgag1320cggctgattctggacgtgctgctcggcgactcgaacctcttcccgcgcac1380gagctgtcctgg皿gatcctcgacccgatcgaggagcactgggac^gcacggcaagccc1440gcgcagtaccccgcgggcacgtggggtcccgtcgaggcgg acg朋atgctcg皿cgagac1500ggacggagct ggcgtcgccc atga152权利要求
一类用于生产阿维菌素的除虫链霉菌(Streptomyces avermitilii)中6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf2，其特征在于所述的zwf2基因置换或中断失活。
2. 如权利要求1所述的基因，其特征是所述的zwf2基因具有如下核苷酸序列ttgtcgagcagcaacccgctgcgtgaccccgC3g3CCg3Cggctcccgcgtatcgcgggg60ccgtcgggcctggtcatcttcggcgtcacgggcgatttgtgctgatgcca120gccgtgtecgatctcgccaaccgcgggctgctgccgccgggcttctcgctcgtcggcttc180gcccgccgcg3Ctggg3gC3cgaggacttcgcccaggtcgtccacgacgccgtc^gg^240cacgcccgtacggagttccgtggC3gC3gCtcatccaggggatgcgcttc300gtccagggcaccttcgacgacgacgacgccttcgagcggctgcgcgacacC3tCgggg33360Ctgg3C33ggC3C3gggC3Cgggcggc咖ttcgccttctacctgtccgtgccgccgtcc420gccttcccggtggtcatccagC3gCtC33g^gcacggcctggccgaccagtcggacggc■tcctggcgccgcgcggtcatCg3g33gCCCttcggacacgacctcaagtcggccg鄉ag540ctcaacgcgatcgtccacgaggtcttcggctcggaccaggtcttccgcatcgaccactac600ctgggc卿gagaccgtccagaacatcctggcgctgcgcttcgccaacacgatgttcgag660ccgatctggaaccggtccttcgtggaccatccatggccgagg3C3tCggt720atcggcggccgcgccggctactacgacggcatcggcgccgcccgtgacgtcatccagaac780cacctgctcc3gCtg3tggCactgaccgccccgcctccttCg3CgCgg3C840gcgctcgccgCCg3g33g3Ccaaggtgctcggcgccgcca3gCtgCCg33ggacctgagc■^g^C3CCgtccgcggacagtacgcggccggctggc鄉gcggcgag^ggtcgtcggc960tatctccagg^gacggcatcgaccccaagtCg33g3CCgacacctacgcggCCgtC33g1020ctcgaggtggacaaccgccgctgggcgggcgtccccttctatctccgtacCggC33gCgC1080ctgggccgccgcgtcaccgagatcgcggtcgtcttccagcgcgccccgcactcccccttc1140g3CC3C3CggCg3Cgg鄉3gctcggccag^cgcgatcgtcatccgcgtccagcccgac1200g3gggC3tC3ccgtccgcttcggctccaaggtgcccggcacctcgatggagatccgggac1260gtctcgatggacttcgcgtacggcgagtcgttcaccgagtccagcccggaggcgtecgag1320cggctgattctggacgtgctgctcggcgactcgaacctcttcccgcgcac1380gagctgtcctcgacccgatcg3gg3gC3Ctgggac^gcacggcaagccc1440gcgcagtaccccgcgggcacgtggggtcccgtcg鄉cggCg33Cg3g3C1500ggacggagctggcgtcgcccatga1524
3.如权利要求1所述的基因置换失活的方法，其特征在于所述的zwf2基因置换失活包括如下步骤(1) ，以Str印tomyces avermitilii的基因组为模板，采用PCR方法获得zwf2基因置 换所须的左臂序列，包括上游序列及部分相应基因序列约2kb ;(2) ，以Str印tomyces avermitilii的基因组为模板，采用PCR方法获得zwf2基因置 换所须的右臂序列，包括下游序列及部分相应基因序列约2kb ;(3) ，将(1)和(2)步骤得到的左右臂序列和包含或不包含抗性基因片段，通过相应的 酶切位点克隆入pKC1139载体中构建成基因置换重组质粒；(4) ，将(3)步骤获得的重组质粒以接合转移的方法转入除虫链霉菌 (Str印tomycesavermitilii)中，经整合、松弛培养诱导发生双交换及筛选鉴定后完成目标基因失活。
4. 一类经6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf2失活后的除虫链霉菌 (Str印tomycesavermitilii)用于生产阿维菌素。
全文摘要
本发明公开了除虫链霉菌中一个编码6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的用途，对该基因的失活可以显著提高除虫链霉菌生产阿维菌素的能力。所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因为zwf2。本发明还公开了利用该基因构建产量提高的除虫链霉菌突变菌种的方法和应用，相应突变菌种发酵获得的阿维菌素产量与未经改造的菌株相比有大幅提高。
文档编号C12P19/62GK101717778SQ200910199530
公开日2010年6月2日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者唐功利, 王健博 申请人:中国科学院上海有机化学研究所