专利名称：Hla高分辨基因测序试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及用于人类白细胞抗原(Human Leucocyte Antigen, HLA)_A，B, DRBl基因的扩增和分型方法，以及所述方法中使用的特异性引物。
背景技术：
HLA是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统，其 在抗原识别、抗原递呈、免疫应答与调控、破坏外来抗原靶细胞等方面发挥重要的作用，是 引起免疫排斥反应的主要物质基础。移植物细胞表面HLA-I类和HLA-II类抗原都是强移植 抗原，体液免疫和细胞免疫都参与了对移植物的排斥反应，无论是异基因造血干细胞移植， 还是器官移植，供受体之间HLA相配程度是决定移植成功的关键。目前国际标准的HLA分型技术有PCR-SSP(序列特异引物聚合酶链式反应)， PCR-SSO (聚合酶链式反应寡核苷酸探针杂交)和PCR-SBT (聚合酶链式反应产物直接测序 分型)。PCR-SSO(sequence specific oligonucleotide) ik 禾尔 PCR-ASO(allele specific oligonuceotide)，用以同位素或非放射性标记的探针与PCR扩增的目标片断产 物杂交，根据阳性斑点判断个体基因型。由于HLA等位基因非常多，就需要很多的探针对每 个DNA样品要进行多次杂交(甚至十几次)才能完成定型分析操作也十分繁琐。于是在此 基础上又发展起来一种反向杂交法(reverse hybridization) 0将各种不同的探针固定于 同一张膜上，再将PCR产物标记，以PCR产物(待检测基因DNA)反过来与探针杂交。这样一 次杂交即可完成多个等位基因分析。此方法具有灵敏度、特异性强、需样本量少等优点，但 不同探针的杂交条件的须严格统一(如温度，离子强度)，易出现误差；不能检测新等位基 因，试剂盒需不断升级；对某些杂合子分辨率也不好。很多HLA基因型含有相同的多态性， 而仅仅由于排列方式不同，因此分辨率不及SSP和SBT。此方法适宜大量和高纯度样本，杂 交条带将作为书面原始记录长期保存(三种效果比较)。PCR-SSP :PCR/SSP方法用乃设计出一整套等位基因组特异性引物(sequence specific primer, SSP)，借助PCR技术获得HLA型别特异的扩增产物，可通过电泳直接分析 带型决定HLA型别，从而大大简化了实验步骤。优点是简单易行，分辨率可从低到高，成本 低。缺点是不易自动化；不能检测新的等位基因，试剂盒需不断升级。此方法适宜零散和 纯度低样本，重复实验时要重提DNA和必须使用紫外凝胶成象仪保留原始资料，增加实验 成本(三种效果比较)。PCR-SSP和PCR-SSO均需大量试剂(引物)，且不能识别非经典的 HLA基因和假基因(绿)。针对HLA外显子和内含子序列精心设计引物可避免这些问题。PCR-SBT 以PCR扩增所要分析的基因片断，然后对DNA序列进行分析，可以直接得 到基因型。分辨率高，可大规模进行，精确度高，能直接发现新的等位基因。因此，应用SBT 技术进行HLA高分辨基因分型是目前国际上公认的HLA基因分型金标准。
目前进口的HLA-SBT试剂只对HLA外显子(Exon 2，3)进行测序，当几个等位基因 核苷酸区别在这些区域之外时，就无法进行区分，从而造成实验结果中有许多无法明确的 组合(模棱两可的结果)。另外，SBT的试剂全部是从国外进口，试剂成本高。因此，需要进 一步提高HLA测序的分辨率和精确性，同时降低测序试剂的成本。
发明内容
本发明目的是提供一种人类白细胞抗原(Human Leucocyte Antigen, HLA)基因的 分型方法，包括以下步骤(1)按照常规技术提取待测基因组DNA，使用PCR扩增引物扩增所要分析的目的基 因片段；(2)使用测序引物对步骤⑴所得PCR产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增 出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分 型结果；其中，步骤(1)中所述目的基因片段包括HLA-A的2，3，4外显子，HLA-B的2，3，4 外显子和HLA-DRB1位点2外显子；相应的PCR扩增引物对包括HLA_A位点扩增引物，HLA-B位点扩增引物和 HLA-DRB1位点扩增引物；其中，所述HLA-A位点扩增引物包括正义引物，SEQID No. 1 :CCATTGGGTGTCGGGTTTC(-105 -87)；反义引物，SEQID No. 2 :CAGCAATGATGCCCACGATG(1973 1992)；所述HLA-B位点扩增引物包括正义引物1，SEQ ID No. 3 :CCCTGAGTTTCACTTCTTCTCCCA(-183 -160)；正义引物2，SEQ ID No. 4 :CCACGAGTTTCACTTCTTCTCCCA(-183 -160)；反义引物，SEQID No. 5 :CCAGCAACAATGCCCACGAT(1962 1981)；上述HLA-B位点扩增引物一起组合使用；
所述HLA-DRB1位点扩增引物包括Gl, SEQ ID No. 6 :TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTGGCAGCTTAAGTT(8101 8119)；G2, SEQ ID No. 7 :TGTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGCCTAAGAGG(8101 8120)；G3, SEQ ID No. 8 :TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGT(8101 8118)；G4, SEQ ID No. 9 :TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGCAGGTTAAAC(8101 8118)；G7, SEQ ID No. 10 :GTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGGGTAAGTATA(8101 8121)；G8, SEQ ID No. 11 :TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGG(8101 8118)；G9, SEQ ID No. 12 :TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGAAGCAGGATAAGTT(8101 8119)；G10, SEQ ID No. 13 :TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGGAGGAGGTTAAGTT(8101 8119)；R, SEQ ID No. 14 :CAGGAAACAGCTATGACCGCTCACCTCGCCGCTGCAC(8352 8370)；R * 09, SEQ ID No. 15 :CAGGAAACAGCTATGACCGCTTACCTCGCCTCTGCAC (8352 8370)；上述HLA-DRB1位点扩增引物一起组合使用，并且SEQ ID No. 6 13为正义引物， SEQ ID No. 14 15为反义引物；
步骤(2)中，相应的测序引物包括=HLA-A位点的第2、3、4外显子测序引物，HLA-B 位点的第2、3、4外显子测序引物和HLA-DRBl位点的第2外显子测序引物；所述HLA-A位点的第2外显子测序引物包括A2F, SEQ ID No. 16 :CGGGGAGAAGCAASGG (107 122)；A2R, SEQ ID No. 17 :CGGACCCGGAGACTGTG(539 555)；所述HLA-A位点的第3外显子测序引物包括A3F, SEQ ID No. 18 :GGTTTCATTTTCAGTTTAGGC (622 642)；A3R, SEQ ID No. 19 :TTGTCTCCCCTCCTTGTGG (1048 1066)；所述HLA-A位点的第4外显子测序引物包括A4F, SEQ ID No. 20 :GGTGTCCTGTCCATTCTCAAG (1475 1495)；A4R, SEQ ID No. 21 :CAGAGAGGCTCCTGCT (1884 1899)；所述HLA-B位点的第2外显子测序引物包括B2F, SEQ ID No. 22 :CCCAGGCTCCCACTCCAT (197 214)；B2R, SEQ ID No. 23 :GGGGAGTCGTGACCTGC(494 510)；所述HLA-B位点的第3外显子测序引物包括B3F, SEQ ID No. 24 :GGCCAGGGTCTCACAC(711 726)；B3R, SEQ ID No. 25 :GGCGACATTCTAGCGC (1078 1093)；所述HLA-B位点的第4外显子测序引物包括B4F, SEQ ID No. 26 :AGATGCAAAGCGCCTGAA (1528 1545)；B4R, SEQ ID No. 27 :GGCTCCTGCTTTCCCTGA(1875 1892)；所述HLA-DRBl位点的第2外显子测序引物包括M13F, SEQ ID No. 28 :TGTAAAACGACGGCCAGT ；M13R, SEQ ID No. 29 :CAGGAAACAGCTATGACCCodon 86，SEQ ID No. 30 :CTGCACTGTGAAGCTCTCCA。上述技术方案中，所述引物方向均从5’到3’ ；HLA-A设计模板为A女01010101, HLA-B设计模板为B * 070201 ,HLA-DRBl设计模板为DRBl * 03010101，所有等位基因序列 均参照欧洲 IMGT/HLA 专业网站数据库http://www. ebi. ac. uk/imgt/hla/index. html。同时，本发明还提供了一种HLA高分辨基因测序试剂盒，含有上述PCR扩增引物和 测序引物，所述PCR扩增引物分别具有SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 15所述的碱基序列，所 述测序引物分别具有SEQ ID No. 16至SEQ ID No. 30所述的碱基序列。上述技术方案中，所述HLA高分辨基因测序试剂盒还包括缓冲液(buffer)，镁离 子(Mg2+)，dNTP和Taq酶；所述Taq酶优选为QIAGENHotStarTaq热启动酶。优选的技术方案中，步骤(1)中所述PCR扩增反应条件为1. 95°C, 15min ；2. 94°C，0. 5min — 64°C，0. 5min — 72°C，2. 5min (重复 15 个循环)；3. 94°C，0. 5min — 60°C，0. 5min — 72°C，2. 5min (重复 15 个循环)；4. 94°C，0. 5min — 58°C，0. 5min — 72V, 2. 5min (重复 6 个循环)；5. 72°C,7min ；6.4°C 保持。
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本发明的基本原理是HLA的多态性复杂，HLA-A等位基因965个，HLA-B等位基因 1543个，HLA-DRB1等位基因762个，因此，要在有限的保守区的设计能扩增HLA_A，B位点的 2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子的PCR引物，并分别针对不同的HLA-A，B, DRB1位 点的外显子再设计测序引物。由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点1.由于本发明HLA基因测序试剂盒以及测试条件的优化组合，有效地扩增HLA-A， B位点的2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子，并对相应外显子进行测序，因此在进一 步进行分型时，能够避免当某几个等位基因核苷酸位于扩增区域之外时无法进行有效分型 的问题，提高了对HLA基因分型的分辨率和精确性。2.由于本发明HLA基因测序试剂盒中主要试剂自行配置并优化，大大降低的试剂 成本。3.现有的国外进口试剂只对HLA第2、3外显子进行检测，分型结果组合多；本发 明对HLA第2、3、4外显子进行测序，分型结果组合少。4.现有国外进口试剂是针对美国高加索和美国黑人的常见HLA等位基因设计的 引物序列，可能会造成中国人群的HLA等位基因发生漏检，而本发明在测试过程中检测对 象均为我国人群，经过验证证明使用本发明所述试剂盒进行检验的结果可靠，能更好地弥 补上述不足，得到正确结果。
图1是实施例一-中HLA-A，B结构图上PCR扩增引物，测序引物位置示意图
图2是实施例一-中HLA-DRB1结构图上PCR扩增引物，测序引物位置示意图
图3是实施例一-中HLA-A基因第2外显子测序图4是实施例一-中HLA-A基因第3外显子测序图5是实施例一-中HLA-A基因第4外显子测序图6是实施例一-中HLA-B基因第2外显子测序图7是实施例一-中HLA-B基因第3外显子测序图8是实施例一-中HLA-B基因第4外显子测序图9是实施例一-中HLA-DRB1基因第2外显子测序图10是实施例—二试验组中HLA-A基因第2外显子测序图11是实施例—二试验组中HLA-A基因第3外显子测序图12是实施例—二试验组中HLA-A基因第4外显子测序图13是实施例—二试验组中HLA-B基因第2外显子测序图14是实施例—二试验组中HLA-B基因第3外显子测序图15是实施例—二试验组中HLA-B基因第4外显子测序图16是实施例—二试验组中HLA-DRB1基因第2外显子测序图17是实施例—二对照组中HLA-A基因第2外显子测序图18是实施例—二对照组中HLA-A基因第3外显子测序图19是实施例—二对照组中HLA-A基因第4外显子测序图20是实施例—二对照组中HLA-B基因第2外显子测序图21是实施例二对照组中HLA-B基因第3外显子测序图；图22是实施例二对照组中HLA-B基因第4外显子测序图；图23是实施例二对照组中HLA-DRB1基因第2外显子测序图；图24是实施例一所得HLA-A PCR产物电泳图；图25是实施例一所得HLA-B PCR产物电泳图；图26是实施例一所得HLA-DRB1 PCR产物电泳图。
具体实施例方式下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述实施例一采用核苷酸序列表所述PCR扩增引物和测序引物(所述引物的位置如图1、2所 示)，对人血样进行HLA-A，B, DRB1位点的高分辨率基因分型，具体步骤如下(1)提取基因组DNA按照Promaga公司基因组DNA抽提试剂盒操作说明书进行抽提。(2)PCR 扩增分别使用不同的引物对步骤(1)中提取的基因组DNA。使用HLA-A位点扩增引物 (SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2)进行HLA-A分型的扩增；使用HLA-B位点扩增引物(SEQ ID No. 3，SEQ ID No. 4，SEQ ID No. 5)进行HLA-B分型的扩增；使用HLA-DRB1位点扩增引物 (SEQ ID No. 6 SEQ ID No. 15)进行HLA-DRB1分型的扩增；上述扩增过程和扩增反应体 系均如下所述PCR扩增反应条件为1. 95°C, 15min ；2. 94°C，0. 5min — 64°C，0. 5min — 72°C，2. 5min (重复 15 个循环)；3. 94°C，0. 5min — 60°C，0. 5min — 72°C，2. 5min (重复 15 个循环)；4.94°C，0.5min —58°C，0.5min —72°C，2.5min (重复 6 个循环)；5. 72°C,7min ；6.4°C 保持；所述PCR反应体系为50 iU，其组成如下表所示， 其中，IOX扩增缓冲液、5 X Q buffer、Mg2+(25mM)、Taq DNA 聚合酶购自 Qiagen 公 司，dNTPs (IOmM)、引物购自上海生工。扩增所得PCR产物的电泳图如图24、25、26所示，结果表明得到目的基因片段。按照常规技术对PCR扩增产物进行纯化。(3)使用测序引物进行测序扩增。分别使用不同的引物对步骤(2)中纯化的PCR产物进行测序扩增，使用HLA-A位 点(第2、3、4外显子)测序引物(SEQ ID No. 16 SEQ ID No. 21)分别扩增HLA-A的第2、 3、4外显子；使用HLA-B位点(第2、3、4外显子)测序引物(SEQ ID No. 22 SEQ ID No. 27) 分别扩增HLA-B的第2、3、4外显子；使用HLA-DRBl位点(第2外显子)测序引物(SEQ ID No. 28 SEQ ID No. 30)扩增HLA-DRBl的第2外显子；上述测序扩增过程和测序扩增反应 体系均如下所述测序扩增反应条件为94°C，0.5min — 50°C,0. 5min — 60°C，2. 5min (重复 25个循环)所述测序扩增反应体系为10μ 1，其组成如下表所示， 其中，BigdyeV3.1 购自 ABI 公司。按照常规方法纯化测序扩增产物。(4)进行外显子测序。使用ABI公司3730测序仪对经过纯化的测序扩增产物进行测序，测序结果如图3 至图9。实施例二分别采用美国Abbott公司的HLA测序试剂盒，实施例一中的HLA测序试剂盒及方 法对同一血样进行HLA-A，B, DRBl位点的高分辨率基因分型。分别得到HLA-A(第2、3、4外显子)测序图，HLA-B(第2、3、4外显子)测序图，HLA-DRBl第2外显子测序图。采用实施例一中的HLA测序试剂盒及方法得到的测序图(试验组)为图10到图 16 ；采用美国Abbott公司的HLA测序试剂盒得到的测序图(对照组)为图17到图23。对比HLA-A基因第2、3、4外显子测序图可知 对照组HLA-A Exon2正反向测序峰图的信号强度:A2F A (232) G (227) C (279) T(345) ；A2R A(155)G(361)C (276)T (217)；实验组HLA-A Exon2正反向测序峰图的信号强度A2F A (461) G (705) C (545) T(275) ；A2R A(51)G(133)C(105)T(91)；对照组HLA-A Εχοη3正反向测序峰图的信号强度A3F A(758)G(1336) C(1058) T(827 ；A3R A(440)G(903)C (696)T (502)；实验组HLA-A Εχ0η3正反向测序峰图的信号强度A3F A(495)G (918) C(663) T(514) ；A3R A(195)G(430)C (358)T (258)；对照组HLA-A Εχοη4正反向测序峰图的信号强度A4F A(774)G(1142) C(674) T(583) ；A4R A(712)G(1233)C (870)T (962)；实验组HLA-A Exon4正反向测序峰图的信号强度:A4F A (506) G (716) C (469) T(421) ；A4R A(325)G(551)C(390)T (405)；从以上测序图分析可以得出，实验组HLA-A位点信号质量与对照组基本一致，实 验组的信号强度整体比对照组稍弱，但两组数据通过软件分析所得基因分型结果一致。对比HLA-B基因第2、3、4外显子测序图可知对照组HLA-B Εχοη2正反向测序峰图的信号强度B2F A(725)G(1210) C(955) T(795) ；B2R A(451)G(1100)C (957)T (1001)；实验组HLA-B Exon2正反向测序峰图的信号强度B2F A(699)G(1056)C(1002) T(839) ；B2R A(343)G(839)C (787)T (923)；对照组HLA-B Εχ0η3正反向测序峰图的信号强度B3F A(410)G(715)C(568) T(419) ；B3R A(166)G(331)C (247)T (222)；实验组HLA-B Εχοη3正反向测序峰图的信号强度B3F A(726)G(1076) C(896) T(717) ；B3R A(319)G(608)C (527)T (437)；对照组HLA-B Εχοη4正反向测序峰图的信号强度B4F A(720)G(1086) C(848) T(870) ；B4R A(208)G(380)C (243)T (323)；实验组HLA-B Εχ0η4正反向测序峰图的信号强度B4F A(310)G(433) C(364) T (417) ；B4R A (203) G (364) C (236) T (340)；从以上测序图分析可以得出，实验组HLA-B3R信号强度比对照组强一倍，其余实 验组HLA-B位点信号质量和对照组基本相近，并且两组数据通过软件分析所得基因分型结
果完全一致。对比HLA-DRBl基因第2外显子测序图可知对照组HLA-DRBlExon2正反向测序峰图的信号强度DRB2F A(403)G(574) C(478) T(627) ；DRB2R A(353)G(539)C (534)T (723)；实验组HLA-DRBl Exon2正反向测序峰图的信号强度DRB2F A(271)G(575)C(258) T(302) ；DRB2R A(286)G(463)C (338)T (337)；
从以上测序图分析可以得出，实验组HLA-DRBl位点信号质量与对照组基本一致， 实验组的信号强度整体比对照组稍弱，但两组数据通过软件分析所得基因分型结果一致。实施例三，美国UCLA大学的国际质控和中华骨髓库质控的实验结果中华骨髓库HLA质控样本基本上是选择中国人常见的等位基因组合，而用本发明 试剂也未发现漏检现象，与对照试剂结果完全一致。美国UCLA大学的HLA质控样本包括 了世界范围内各人种的HLA等位基因组合，特别是中国人群十分罕见的等位基因比如A * 0260，B女1535等，其结果也与对照试剂相符合。
权利要求
一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤(1)按照常规技术提取待测基因组DNA，使用PCR扩增引物扩增所要分析的目的基因片段；(2)使用测序引物对步骤(1)所得PCR产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；其特征在于，其中，步骤(1)中所述目的基因片段包括HLA A的2，3，4外显子，HLA B的2，3，4外显子和HLA DRB1位点2外显子；相应的PCR扩增引物对包括HLA A位点扩增引物，HLA B位点扩增引物和HLA DRB1位点扩增引物；其中，所述HLA A位点扩增引物包括正义引物，SEQ ID No.1CCATTGGGTGTCGGGTTTC；反义引物，SEQ ID No.2CAGCAATGATGCCCACGATG；所述HLA B位点扩增引物包括正义引物1，SEQ ID No.3CCCTGAGTTTCACTTCTTCTCCCA；正义引物2，SEQ ID No.4CCACGAGTTTCACTTCTTCTCCCA；反义引物，SEQ ID No.5CCAGCAACAATGCCCACGAT；所述HLA DRB1位点扩增引物包括G1，SEQ ID No.6TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGTGGCAGCTTAAGTT；G2，SEQ ID No.7TGTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGCCTAAGAGG；G3，SEQ ID No.8TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGT；G4，SEQ ID No.9TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGCAGGTTAAAC；G7，SEQ ID No.10GTAAAACGACGGCCAGTTCCTGTGGCAGGGTAAGTATA；G8，SEQ ID No.11TGTAAAACGACGGCCAGTTCTTGGAGTACTCTACGG；G9，SEQ ID No.12TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGAAGCAGGATAAGTT；G10，SEQ ID No.13TGTAATACGACGGCCAGTTCTTGGAGGAGGTTAAGTT；R，SEQ ID No.14CAGGAAACAGCTATGACCGCTCACCTCGCCGCTGCAC；R＊09，SEQ ID No.15CAGGAAACAGCTATGACCGCTTACCTCGCCTCTGCAC；步骤(2)中，相应的测序引物包括HLA A位点的第2、3、4外显子测序引物，HLA B位点的第2、3、4外显子测序引物和HLA DRB1位点的第2外显子测序引物；所述HLA A位点的第2外显子测序引物包括A2F，SEQ ID No.16CGGGGAGAAGCAASGG；A2R，SEQ ID No.17CGGACCCGGAGACTGTG；所述HLA A位点的第3外显子测序引物包括A3F，SEQ ID No.18GGTTTCATTTTCAGTTTAGGC；A3R，SEQ ID No.19TTGTCTCCCCTCCTTGTGG；所述HLA A位点的第4外显子测序引物包括A4F，SEQ ID No.20GGTGTCCTGTCCATTCTCAAG；A4R，SEQ ID No.21CAGAGAGGCTCCTGCT；所述HLA B位点的第2外显子测序引物包括B2F，SEQ ID No.22CCCAGGCTCCCACTCCAT；B2R，SEQ ID No.23GGGGAGTCGTGACCTGC；所述HLA B位点的第3外显子测序引物包括B3F，SEQ ID No.24GGCCAGGGTCTCACAC；B3R，SEQ ID No.25GGCGACATTCTAGCGC；所述HLA B位点的第4外显子测序引物包括B4F，SEQ ID No.26AGATGCAAAGCGCCTGAA；B4R，SEQ ID No.27GGCTCCTGCTTTCCCTGA；所述HLA DRB1位点的第2外显子测序引物包括M13F，SEQ ID No.28TGTAAAACGACGGCCAGT；M13R，SEQ ID No.29CAGGAAACAGCTATGACC；Codon 86，SEQ ID No.30CTGCACTGTGAAGCTCTCCA。
2. —种HLA高分辨基因测序试剂盒，含有PCR扩增引物和测序引物，其特征在于，所述 PCR扩增引物分别具有SEQ ID No. 1至SEQ ID No. 15所述的碱基序列，所述测序引物分别 具有SEQ ID No. 16至SEQ ID No. 30所述的碱基序列。
全文摘要
本发明公开了一种人类白细胞抗原基因的分型方法，包括以下步骤(1)按照常规技术提取待测基因组DNA，使用PCR扩增引物扩增所要分析的目的基因片段HLA-A的2，3，4外显子，HLA-B的2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子；(2)使用测序引物对步骤(1)所得PCR产物进行扩增，扩增各外显子，然后对扩增出的各外显子进行测序，并将测序结果与数据库中的标准序列进行比较，从而确定基因分型结果；由于本发明HLA基因测序试剂盒以及测试条件的优化组合，有效地扩增HLA-A，B位点的2，3，4外显子和HLA-DRB1位点2外显子，并对相应外显子进行测序，因此在进一步进行分型时，能够避免当某几个等位基因核苷酸位于扩增区域之外时无法进行有效分型的问题，提高了对HLA基因分型的分辨率和精确性。
文档编号C12Q1/68GK101892317SQ20101023960
公开日2010年11月24日 申请日期2010年7月29日 优先权日2010年7月29日
发明者邱桥成 申请人:苏州大学;苏州大学附属第一医院