专利名称：一种nob1基因在脑胶质瘤疾病中的应用的制作方法
技术领域：
本发 明涉及脑胶质瘤发病机制的研究领域，具体涉及一种NOBl基因在脑胶质瘤 疾病中的应用。
背景技术：
胶质瘤是来源于中枢神经系统支持细胞的具有高侵袭性和致死性的实体肿瘤，可 分为星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和少肢星形细胞瘤。星形细胞瘤占胶质瘤的80 85%， 根据病理可分为I级至IV级。IV级胶质瘤又称胶质母细胞瘤，是胶质瘤中最常见的病理类 型，预后很差。虽然在胶质瘤治疗方面研究者做了大量的工作，但是部分胶质母细胞瘤的患 者生存期仍然低于15个月。虽然在胶质瘤的病因和预后方面有大量的研究，但是在胶质瘤 的基因水平的研究仍然处于起步阶段。在真核细胞中，蛋白酶体26S是一种蛋白水解复合物，可以将多泛素化的蛋白降 解为小的多肽。蛋白酶体26S由两个亚复合体组成起催化作用的20S蛋白酶体和起调节 作用的19S颗粒。19S调节颗粒又由分别起底和盖作用的两个亚复合体组成。底由6个有 蛋白酶体活性的ATP酶(Rptl-Rpt6)和2个非ATP酶的亚基(Rpnl和Rpn2)组成。盖则由 Rpn3，5，6，7，8，9，10，11，12组成。以Rpn 12为诱饵进行的双杂合测试，第一次将酵母菌的 Nobl蛋白(Noblp)分离出来。越来越多的证据表明在酵母菌中，Noblp在蛋白酶体形成和 RNA代谢中起重要作用。Noblp通过起分子伴侣的作用将20S蛋白酶体催化亚复合物和19S 调节颗粒结合在一起，从而形成26S蛋白媒体，同时降解Umplp。Noblp的基因缺失严重抑 制20S pre-rRNA向成熟的18S rRNA转化，提示Noblp参与rRNA的加工。另外，Nobl蛋白 的PIN域可以结合18S rRNA的单链切割位点D。26S蛋白酶体通过泛素-蛋白酶体途径催化蛋白质的降解，从而从多方面调节真 核生物细胞周期，包括通过检查点和细胞外环境调控细胞周期不同期间间的进程。已有的 数据表明多种参与催化20S蛋白酶体、19S调节子组成26S蛋白酶体的酶在细胞周期和细 胞生存期中扮演重要角色。Thaker等人应用干扰RNA筛选到55个对于人类胶质母细胞瘤 的存活具有重要作用的基因，其中22% (12/55)的基因组成20S和26S蛋白酶体亚基。它 们参与到细胞的多种过程中，包括蛋白质泛素化，嘌呤和嘧啶的代谢，核苷的切除修复，以 及NF-kappaB信号通路。虽然以上各种调控通路的异常在恶性细胞中都已观察到，但蛋白 酶体功能缺陷与人类胶质瘤相关方面还缺乏研究。人类NOBl的同源基因已于数年前克隆出来。人NOBl基因编码一个50KDa大小的 蛋白，包含一个PIN域(PilT amino terminus)和zinc ribbon域，主要在肝脏、肺和脾脏 表达。但是NOBl基因的具体功能还不清楚，到目前为止国际上无文献报道有关NOBl基因 在脑胶质瘤疾病中应用的内容。
发明内容
本发明所要解决的技术问题之一是提供一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，不论在体内还是体外，NOBl对脑胶质瘤的发生都是必须的，并且根据NOBl基因在脑胶质瘤组织中的表达结果，为今后胶质瘤的生物靶向治疗提供强有力手段。本发明涉及一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用。所述的NOBl基因调控人神经胶质瘤细胞周期，降低NOBl水平导致细胞周期的Gl
期停滞。所述的NOBl基因调控人神经胶质瘤细胞的增殖，抑制NOBl使胶质瘤细胞生长迟滞。所述的NOBl基因对人神经胶质瘤细胞体外和体内的肿瘤形成有关，NOBl的减少 阻抑人神经胶质瘤细胞肿瘤的发生。相对于低级别胶质瘤和正常脑组织，所述的NOBl在高级别胶质瘤组织中表达水 平明显增高。所述的高级别和低级别胶质瘤组织中NOBl表达水平具有显著性差异，即P = 0.049。与正常脑组织相比，所述的NOBl基因在高级别的胶质瘤中的平均表达增加至近4 倍水平，即P = 0. 017，而在低级别胶质瘤中仅增加1. 5倍，即P = 0. 032。表达低水平NOBl即P = 0. 028的患者生存期超过24个月，表达较高水平NOBl即 P <0.01的患者存期短于24个月。所述的表达较高水平NOBl的胶质瘤患者预后较差。酵母NOBl可与19S调节子相互作用，在26S蛋白酶体的成熟过程中是必须的。本 发明预先用NOBl siRNA处理的人类胶质瘤细胞的细胞周期分布情况。在U373和A172胶 质瘤细胞系中，NOBl蛋白的下降导致S期的减少、Gl期的增加。在RNA干扰下U373、A172 细胞系中NOBl蛋白表达水平下降，细胞增殖也显著延迟。这种生长抑制作用在琼脂糖克隆 形成试验和裸鼠异中移植试验中也观察到，提示NOBl在体外、体内试验中对于人类胶质瘤 的形成都具有关键作用。通过对胶质瘤患者样本NOBl表达水平的研究发现，随着胶质瘤的 生长，NOBl表达上调。随着胶质瘤恶性程度的增加、生存期的缩短，NOBl表达水平上调，提 示NOBl参与胶质瘤的生长、发展。已有研究显示蛋白酶体通过调节细胞周期蛋白影响细胞周期进程。在细胞周期进 程中，蛋白酶体还影响⑶C25A、⑶C25B和⑶C25C的稳定性。有序的、暂时的降解调节分子 对于细胞的生长来说是必须的。因此，NOBl蛋白下降可能通过抑制蛋白酶体介导的细胞周 期蛋白的降解来阻止细胞增殖。此外，蛋白酶体还可通过影响半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶、 BCL2、NF-kB的活性来增强或降低细胞凋亡。本发明的研究说明了无论在体外还是体内， NOBl都参与胶质瘤的肿瘤形成中。而且，NOBl的表达水平高低还与肿瘤病理级别、胶质瘤 患者的预后相关。有益效果本发明通过研究，发现不论在体内还是体外NOBl对脑胶质瘤的发生都是必须的， 并且根据NOBl基因在脑胶质瘤组织中的表达结果，为今后胶质瘤的生物靶向治疗提供强 有力手段。
图 IWestern blot 和 RT-PCR 证实 NOBl siRNA 起作用；
图2N0B1的降低后细胞群众各细胞在细胞周期中所占比例；图3人胶质瘤细胞转染NOBl siRNA后的细胞活性及增值情况检测；图4A172和U373转染NOBl siRNA后的体内及体外肿瘤生成试验；图5胶质瘤阳平中的NOB1 mRNA的表达；图6检测下游的分子无显著变化。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。实施例1材料和方法细胞培养HEK293T 细胞以及胶质瘤细胞 A172 和 U373 购自 American Type Culture Collection (ATCC)公司。采用DMEM培养基，另外加入10 %胎牛血清、lOOU/mL青霉素和 100μ g/mL链霉素。细胞在孵化箱中培养，条件为37°C，湿化，含5% C02。RNA 提取人脑胶质瘤组织和正常脑组织在手术取样后立即置于液氮中，后保存于-80°C冰 箱至RNA抽提。按Trizol reagent操作说明书抽提总RNA。细胞系A172和U373采用同样 方法抽提RNA。RNA 逆转录和 Real-time PCR取2 μ g RNA参照M-MuLV逆录酶操作说明书合成cDNA。取合成的cDNA (20 μ g)与 SYBR GreenMasterMix混合，在CFX96实时监测系统中进行扩增。每个样本重复3次。NOBl 基因的相对表达量通过与内参β -Actin或者GAPDH比较得到。NOB1 基因，上游引物5 ‘ -ATCTGCCCTACAAGCCTAAAC-3，下游引物5 ‘ -TCCTCCTCCTCCTCCTCAC-3 ；β -Actin，上游引物5 ‘ -GGCGGCACCACCATGTACCCT-3，下游引物5 ‘ -AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3 ‘；GAPDH,上游引物5 ‘ -GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ‘，下游引物5 ‘ -GAAGATGGTGATGGGATTTC-3 ‘。质粒构建、转染和Western blot将NOBl的开放阅读框序列插入pEGFP-Nl的NheI和SalI位点之间获得FLAG标 记的真核细胞NOBl基因表达载体，pEGFP-FLAG-NOBl。另将4个NOBl基因的候选RNA干扰 序列以及1个负性对照RNA干扰序列插入到pLKD4. 0载体内，pLKD4. 0-siN0BlopEGFP-FLAG-NOBl 和 pLKD4. 0-siN0Bl 共转染入 HEK293T 细胞。48 小时后，使用低 温细胞溶解液(IOmM Tris-HCl,pH 7. 4, ImM EDTA,0. 1% Tritron X-100,0. 1%SDS)处理细 胞，并力口入蛋白酶抑制齐[J (2 μ g/mL aprotinin ； 10 μ g/mL antipain, 2 μ g/ml ρ印statin, and 2mM benzamide)。细胞溶解液离心分层(10，OOOg, 10min,4°C )，取上清 SDS-PAGE 电泳，转移至PVDF膜，进行免疫标记。抗-FLAG抗体(1:10，000 ;Sigma)4°C孵化过夜。二抗(抗 辣根过氧化物酶抗体)室温孵化lh。Western结果表明针对NOBl基因311-329位核苷酸 的NOBl-siRNA干扰效果最明显。病毒包装重组病毒包装采用Lentivector 表达系统(PREI Co. LTD Sha nghai)。1· 2 X IO6 个 HEK293T细胞共转染入15 μ g pLKD4. O-siNOBl或者负性对照siRNA载体，以及2个分别表 达Gag/Pol前体蛋白和糖蛋白VSV-G的包装载体，剂量为10 μ g。转染48小时后，取上清并 通过孔径为0. 45 μ m的筛板筛选。流式细胞仪分析细胞周期细胞在不同周期(G1，S or G2/M期)，DNA成分不同。荧光染料propidium iodide (PI)与DNAl :1结合，因此检测PI的荧光强度可以反映细胞内DNA含量。通过无血清培养基培养24小时，使得细胞周期同步化。然后将培养基换成加入生 长因子的完全培养基。48小时后，用胰蛋白酶-EDTA收细胞，冷PBS液冲洗两次，70%乙醇 在-20°C固定2小时。固定的细胞压制后在？1/1 妝86^^3(10(^8/1^ propidium iodide 和10 μ g/mLRNase Α)液中37°C避光复悬浮30分钟，然后用尼龙过滤网过滤。1 X IO6个细 胞在FACscaliber II sorter和Cell Quest FACS系统中检测。实验重复三次，取平均值。 每次实验均超过10，000个细胞。FACS Calibur自动分析出各周期的细胞所占百分比。集落形成能力的检测软琼脂分析方法如先前描述[12]。准备了 6个培养皿，每皿中包含0. 5mL 0. 8% 琼脂培养基。NOBl shRNA组及阴性对照慢病毒转染组细胞在0.4%琼脂培养基(0.8%高 琼脂培养基等体积)中用胰蛋白酶消化，分离，再悬浮，并且每皿接种200个细胞。细胞在 37°C环境下培养14天。用GIEMSA(Chemic0n)染色后，在显微镜下观察细胞集落数量并计数。细胞增殖的检测A172或U373细胞分别给予2小时的4毫克/毫升的冲击量BrdU(Sigma)。贴壁 培养细胞的间接免疫组化显示，使用了抗核苷抗体(anti-BrdU)与辣根过氧化物酶二抗结 合后我们可以观察细胞有无新DNA的合成。这些抗体是通过TMB过氧化物酶底物试剂盒生 产的。采用96孔读板测定在550纳米波长的吸收率。细胞活性通过转换活细胞中MTT为 彩色的formazan化合物来检测。简单地说，用PBS洗涤细胞，并使细胞最终浓度为2 X IO4/ 毫升时悬浮。细胞悬浮液(2，000 cells ； 100 μ L)分配到96个培养皿中，并在37°C湿化CO2 温箱中培养l-5d。为使细胞染色，每皿中加入10 μ L MTT(5mg/mL)并在37°C下培养4h，再 加入10%二甲基亚砜(DMS0，100 μ L)。后采用采用96孔读板测定在550纳米波长的吸收 率。每项试验重复三遍。裸鼠移植试验五六周大雌性BALB/C-nu/nu无菌鼠从上海的癌症研究中心购买。这些动物在复 旦大学的动物研究中心层流架下的特殊无菌环境中养育。雌性BALB/C-nu/nu无菌鼠7-8 周大时，每只鼠在前肢皮下接种0.2mL的1.5 X IO7肿瘤细胞。每星期两次使用轮尺在二个 维度上测量肿瘤大小，并且使用公式ν = 0. 5*长径*短径2计算其体积(mm3)。21天后肿 瘤从老鼠身上切除并且称量，所有程序都由复旦大学动物护养使用委员会批准。
病人样本
这项研究的神经胶质瘤标本由神经外科学上海学院提供。所有患者根据组织伦理 委员会批准的研究文件给予知情同意。组织从25名低级别神经胶质瘤(LGG，世界卫生组 织等级I-II)患者和30名高级别神经胶质瘤患者的手术中获得。在患者的家庭都表示了 同意的情况下，从7名创伤患者的颅内减压外科切除部分的正 常脑组织中获得。用于这研 究的所有样品都根据中国的临床采样规章执行。所有患者病理诊断由二位不同病理学家证 实。神经胶质瘤组织样品的总核糖核酸进行了提取，并用实时PCR进行了 NOBl表达的检测。 2010年3月对病人进行电话随访，并且确定其存活时间。统计分析t检验进行不同神经胶质瘤细胞系统计分析。对于神经胶质瘤组织样品的实 验，每个小组的NOBl mRNA的相对表达水平(正常脑、LGG和HGG)用MEAN士SE来表示， Mann-Whitney检验用于比较小组之间的差异。当研究NOBl的表达和患者的预后之间的关 系，我们首先编组了所有等级的神经胶质瘤患者分成存活时间长于及短于24个月的组，然 后用Marm-Whitney U测试比较这两个小组之间NOBl表达的差异。然后分别分析在低级神 经胶质瘤和高级神经胶质瘤患者的预后。SPSS 15.0 (SPSS公司，芝加哥，美国)作为统计分 析软件和显著性差异的水平设定为P < 0. 05。结果si RNA干扰后人胶质瘤细胞NOBl表达降低编码siNOBl或对照SiRNA的质粒和用flag标记的编码NOBl质粒分别转染入 HEK293T细胞。48h以后，这些细胞进行裂解并用含flag抗体的探针进行Western blot分 析。与对照组siRNA(图1A)相比，NOBl蛋白质在siRNA处理以后减少了 90%。人神经胶质 瘤A172和U373细胞系皆高表达NOBl (无数据显示)，为进一步证实siNOBl沉默对NOBl表 达的抑制作用，我们使用含NOBl siRNA和对照siRNA的慢病毒进行转染。与非靶向siRNA 比较，如图IB和C所显示，使用siNOBl后80% NOBl mRNA沉默了。图 1，(A)HEK293T 细胞用 GFP 空载体(列 1)禾Π GFP-NOB1-FLAG (列 2)禾口 GFP-NOB1 -FLAG+contro 1 siRNA(列 3)和 GFP-NOBl-FLAG+siNOBl (列 4)转染。细胞裂解物 中的蛋白质用SDS-PAGE分离并转移入PVDF膜中(此为FLAG抗体和GAPDH抗体)。(B, C) 通过RT-PCR证实siRNA的转染致NOBl mRNA的减少。NOBl siRNA和非靶向siRNA慢病毒 载体都转染如A172和U373细胞系。总RNA被提取并反转录成cDNA。降低的NOBl水平导致细胞周期的Gl期停滞要检验NOBl直接地调控细胞周期的假设，我们研究了 siNOBl转染后，处于各个周 期的不同细胞的比例。shNOBl和阴性对照shRNA通过慢病毒转入了 A172和U373细胞并且 通过荧光激活细胞分类(FACS)分析了其在细胞周期的作用。比较野生型和shRNA-转染后 的细胞，在U373细胞(图2B)和A172细胞(图2A)中，shNOBl组都显示了在S-期细胞的 显著减少和在Gl期细胞数量的增加。图2，转染siNOBl组，对照siRNA组和不转染组中(A)A172和(B)U373细胞群中 GLG2/M和S期在细胞周期中的比例。抑制NOBl使胶质瘤细胞生长迟滞为评价NOBl在人的神经胶质瘤细胞生存中的作用，A172和U373的细胞增长与减少的NOBl蛋白质表达进行了 MTT分析。如图3A和B所显示，减少NOBl导致了 A172和U373 大量细胞生长延缓，与在此非处理对照组在转然后第三天即有差异(P < 0. 05)。第五天，减 少NOBl表达的A172细胞系的生长速度只相当于对照组的一半。siRNA阴性对照组细胞与 非处理对照组细胞比较没有重大区别。进一步使用BrdU联合分析证实了 NOBl在人神经胶质瘤细胞繁殖中的作用。24小 时后未观察到siNOBl组与对照siRNA组有明显区别。然而，72小时后siNOBl组由于NOBl 表达降低而明显减少了 BrdU的摄取，与非处理对照相差较大。在U373细胞(图3C和D) 也观察到相似结果。总之，这些数据表明NOBl或许能调控人神经胶质瘤细胞的增殖。图3，转染siNOBl组，对照siRNA组和不转染组中72小时候(A)A172和(B)U373 细胞群的MTT检测情况。从第三天开始，各细胞群增殖情况便出现差异。(C)、(D)图分别 为A172 and U373进行BrdU培养后的情况。数据皆为 均数士SD形式。各组间统计差异用 双侧 Student' s t-test (*P < 0. 05)检测差别。NOBl的减少阻抑人神经胶质瘤细胞肿瘤发生为研究NOBl在人胶质瘤细胞中体外肿瘤发生作用，我们检验了 A172和U373在软 琼脂培养基上的细胞集落形成能力。在软琼脂培养基上，A172和U373细胞系NOBl的减少 导致了细胞集落形成能力的降低(P < 0. 01 ；图4A-D)。为进一步证实降低NOBl水平在神 经胶质瘤细胞中肿瘤发生的作用，转染NOBl shRNA或对照shRNA的A172细胞系被接种入裸 鼠侧背。在肿瘤体积的变化监测了三周(图4E)。21天后(图4F)，siNOBl平均瘤体积是 697. 02mm3，用无转染处理和阴性对照的shRNA瘤体积为分别为919. 56mm3、1077. 27mm3 (P =0. 006,P = 0. 005)。因此，与无转染处理组比较，减少的NOBl蛋白质会强烈抑制人神经 胶质瘤细胞的肿瘤形成。这些数据表明NOBl对人神经胶质瘤细胞体外和体内的肿瘤形成 力是很重要的。图4，(A，B)体外软琼胶平板上检测NOBl的肿瘤生成作用。转染siNOBl组，对照 siRNA组和不转染组中A172被琼脂包埋培养。37°C培养3周后，进行染色，并计数集落形成 数。(C，D)同样方式处理的U373细胞的肿瘤生成作用。数据皆为均数士SD形式。各组间 统计差异用双侧Student' s t-test (*P < 0. 05)检测差别。(E，F)体内移植物分析检测 NOBl的肿瘤生成作用。肿瘤体积进行了连续的二维测量。并且使用公式ν = 0.5*长径* 短径2计算其体积(mm3)。数据皆为均数士SD形式。用单向ANOVA进行组间差异分析(*P < 0. 05)。NOBl在胶质瘤组织样本中过表达且与不良预后相关通过实时定量RT-PCR的方法研究NOBl在胶质瘤患者样本中的表达情况。纳入研 究的患者其基本特点已列入表1。正如图5A中所示，与正常脑组织相比，高级别的胶质瘤 中NOBl的平均表达增加至近4倍水平(P = 0. 017)，而低级别胶质瘤中仅增加1. 5倍(P = 0. 032)。高级和低级胶质瘤中NOBl表达水平具有显著性差异(P = 0. 049)。鉴于NOBl在 胶质瘤患者中过表达，且与病理级别分类具有显著性关联，NOBl可能参与到脑肿瘤的发生 中。本试验验证了 NOBl表达情况与胶质瘤患者预后间的关系。在全部研究对象中，生存期 超过24个月的患者(共23人，包括13名LGG、10名HGG)表达低水平NOBl，而生存期短于 24个月的患者(共32人，包括12名LGG、20名HGG)表达较高水平的NOBl (P < 0. 01，图 5B)。分别对低级别和高级别胶质瘤患者进行统计也得到了相似的结果，在低级别胶质瘤患者中P = 0. 028，在高级别胶质瘤患者中P < 0. 01 (图5C、5D)。这些结果表明表达较高水 平的NOBl mRNA可能与相对较短的生存期相关。图5，(A)实时RT-PCR显示NOBl mRNA在LGG和HGG组织中都有上调(P = 0. 017 andP = 0.032)。(B)胶质瘤病人中，生存期超过24个月(23人，占41. 8%)的病人NOBl 的低表达，低于24个月(32人，58. 2%)的显示NOBl高表达(P <0.01)。(C) LGG病人，生 存期超过24个月(13人，占52%)的病人NOBl的低表达，低于24个月(12人，48%)的显 示NOBl高表达(P = 0. 028)。(D)HGG病人，生存期超过24个月(10人，占33%)的病人 NOBl的低表达，低于24个月(20人，67% )的显示NOBl高表达(P < 0. 01)。NOBlmRNA的 相对表达量用均数士SD形式，用Marm-Whitney U test进行组间差异分析(*P < 0. 05. **P < 0. 01)。表1.纳入研究病人的人口统计资 料
权利要求
一种NOB1基因在脑胶质瘤疾病中的应用。
2.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于所述 的NOBl基因调控人神经胶质瘤细胞周期，降低NOBl水平导致细胞周期的Gl期停滞。
3.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于所述 的NOBl基因调控人神经胶质瘤细胞的增殖，抑制NOBl使胶质瘤细胞生长迟滞。
4.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于所述 的NOBl基因对人神经胶质瘤细胞体外和体内的肿瘤形成有关，NOBl的减少阻抑人神经胶 质瘤细胞肿瘤的发生。
5.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于相对 于低级别胶质瘤和正常脑组织，所述的NOBl在高级别胶质瘤组织中表达水平明显增高。
6.根据权利要求3所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于所述 的高级别和低级别胶质瘤组织中NOBl表达水平具有显著性差异，即P = 0. 049。
7.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于与正 常脑组织相比，所述的NOBl基因在高级别的胶质瘤中的平均表达增加至近4倍水平，即P =0. 017，而在低级别胶质瘤中仅增加1. 5倍，即P = 0. 032。
8.根据权利要求1所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于表达 低水平NOBl即P = 0. 028的患者生存期超过24个月，表达较高水平NOBl即P < 0. 01的 患者存期短于24个月。
9.根据权利要求6所述的一种NOBl基因在脑胶质瘤疾病中的应用，其特征在于所述 的表达较高水平NOBl的胶质瘤患者预后较差。
全文摘要
本发明涉及一种NOB1基因在脑胶质瘤疾病中的应用，NOB1基因调控人神经胶质瘤细胞周期，降低NOB1水平导致细胞周期的G1期停滞；且调控人神经胶质瘤细胞的增殖，抑制NOB1使胶质瘤细胞生长迟滞；同时NOB1的减少可阻抑人神经胶质瘤细胞肿瘤的发生。本发明通过研究，发现不论在体内还是体外NOB1对脑胶质瘤的发生都是必须的，并且根据NOB1基因在脑胶质瘤组织中的表达结果，为今后胶质瘤的生物靶向治疗提供强有力手段。
文档编号C12N5/09GK101948921SQ20101028076
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月14日 优先权日2010年9月14日
发明者卢亦成, 周劲旭, 孙克华, 陈菊祥 申请人:中国人民解放军第二军医大学