专利名称：一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于水产养殖领域，特别涉及一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂及其 制备方法。
背景技术：
随着规模化水产养殖业的大量出现，养殖密度不断增加，养殖水体中的排泄物以 及饵料的残渣不断增加，致病微生物大量繁殖，养殖水体富营养化程度加剧，生态环境遭到 严重的破坏，这导致水产动物大规模且频繁出现各类病害和应急状态，与此同时抗生素和 杀菌剂的长期使用和滥用也进一步导致了养殖水体中各种药物的残留和致病微生物抗药 性和耐药性的提高和，从而进一步破坏了养殖水体的生态环境。近年来，微生物制剂在水产养殖上已有所应用，但是还存在着不少的问题。大多数 微生物制剂仅针对养殖水体发挥功效，但对水产动物本身并没有直接作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂及其 制备方法。该水产养殖用多菌种微生物复合制剂同时可以改善水产动物的生态环境，防治 疾病，降低动物应急状态，提高水产动物品质，缩短上市周期。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为
一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂，其特征在于它是由光合细菌(/？如而/^^^ elegans)ACCC 10649、酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ、纳豆菌(feci/A/s natto Swamura) ACCC 10614、牛古草芽抱杆菌(ifeci/^/iAs subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳酸杆菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 和双歧杆 ^Bifidobacterium sp) ACCC 11054分别进行单菌种培养得到的种子培养液接种于同 一培养基中，然后进行发酵罐培养，待培养液的pH值自然降至3. O 3. 5而得到的，该 制剂中光合细菌elegans) ACCC 10649 的菌数彡 5. OX 109cfu/ml，酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌数彡 0. 1 X 109cfu/ml，纳豆菌UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌数彡 5. OX 109cfu/ml，枯草芽孢杆菌(feci/A/s subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌数彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸杆菌 (Lactococcus lactis)ACCC 11092 的菌数彡 5. OX 109cfu/ml，双歧杆菌(bifidobacterium sp) ACCC 11054 的菌数彡 5. 0X109cfu/ml。按上述方案，所述各菌种的种子培养液的重量百分数为光合细菌的种子培养液 25% 35%，酵母菌的种子培养液5% 15%，纳豆菌的种子培养液15% 25%，枯草芽孢杆 菌的种子培养液15% 25%，乳酸杆菌的种子培养液5% 15%，双歧杆菌的种子培养液 5% 15%。—种水产养殖用多菌种微生物复合制剂的制备方法，其特征在于包括如下步 骤(1)种子培养液的制备
光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的种子培养液的制备将光合细菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在无菌条件下接种到液体培养基中，所述的液体培养 基为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸镁0. 05g、氯 化钙0. 3g，pH值调至6. 08 7. 0之间，放置于光培养箱内，28°C -30°C常规光照培养6 7 天，得到光合细菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的种子培养液；
酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的种子培养液的制备将酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在无菌条件下接种到液体培养基中，所述的液 体培养基为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为无水硫酸镁1. 0g、磷酸二氢钾2. 0g、尿素 3. 0g、玉米浆1. 0g、硫酸锰0. 02g、硫酸亚铁0. 2g，pH值调至5. 5，30°C _31°C培养4 5天， 得到酵母菌菌数彡0. 1 X IO9CfuAil的种子培养液；
纳豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的种子培养液和枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T 的种子培养液的制 备将纳豆菌 UaciWiAS natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢杆菌^^/^狀 subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分别在无菌条件下接种于液体培养 基中，所述的液体培养基均为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化钠5. 0g, pH值调至7. 0，28°C 32°C，单菌种培养7 8天，分别得到纳豆菌菌数 彡5. OX 109CfU/ml的纳豆菌种子培养液和枯草芽孢杆菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢杆菌种子培养液；
乳酸杆菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的种子培养液和双歧杆菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的种子培养液的制备将乳酸杆菌(Lactococcus lactis) ACCC 11092和双歧杆菌(历/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分别在无菌条件下 接种于液体培养基中，所述的液体培养基均为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化钠5. 0g、酵母粉6. 0g、吐温80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值调至7. 2，30°C 35°C单菌种培养2 3天，分别得到乳酸杆菌菌数 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸杆菌种子培养液和双歧杆菌菌数彡5. OX 109Cfu/ml的双歧杆菌 种子培养液；
(2)水产养殖用多菌种微生物复合制剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、纳豆菌(feci/A/s natto 5kaffl ra)ACCC10614、 枯草芽孢杆菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ、乳 酸杆菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和双歧杆菌(历Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的种子培养液按其重量百分数为光合细菌的种子培养液25% 35%，酵母菌的种子培养 液5% 15%，纳豆菌的种子培养液15% 25%，枯草芽孢杆菌的种子培养液15% 25%，乳 酸杆菌的种子培养液5% 15%，双歧杆菌的种子培养液5% 15%，在无菌条件下分别接种 到同一液体培养基中，接种量为液体培养基重量的1 % 2 %，所述的液体培养基中各组分 在1. OL蒸馏水中的含量为红糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度为5 %即发酵罐中氧气的体 积与发酵液的体积比为5%的条件下，28°C 32°C密闭式静置培养7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
利用不同菌种的特性可相应地解决水产养殖中出现的问题，但是不同菌种微生物 复合时，各菌种之间存在相互排异、抢占碳源/氮源和相互侵蚀的现象。本发明将不同特性 的菌种分别发酵，得到种子培养液，然后按一定比例分别接种于同一培养基中混合培养，至 PH值自然降低到3. 0 3. 5而成，在该pH条件下，各菌种处于极端环境，迫使各菌种进入休 眠状态，从而可避免不同菌种之间存在的相互排异、抢占碳/氮源和相互侵蚀的现象。在使 用时，将本发明制备的水产养殖用微生物复合制剂放入养殖水域后，由于环境的改变可使 得菌种解除休眠状态，从而使各菌种充分发挥作用，解决实际水产养殖中出现的问题。本发明所选用的菌种的功能如下
(1)光合细菌elegans) ACCC 10649 消耗水体中多余的营养物质，产生 大量对水产动物的有益的营养物质，降低氨氮、硫化物等有害物质。(2)酵母菌(/YcAia fermentans lodder)ACCC 20319τ 大量产生动物必需的多种
氨基酸。(3)枯草芽抱杆菌(泡<^7/"5· subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ 产生蛋白酶、淀粉酶以及枯草菌素。(4)乳酸杆菌(Zactococcm Iactis)ACCC 11092 可分解糖产酸，抑制致病菌及腐 败菌的繁殖，提高动物的饵料的吸收。(5)双歧杆菌(历/ii/ο力acterii/ sp)ACCC 11054 维护肠道正常细菌菌群平衡， 抑制病原菌的生长，在肠道内合成维生素、氨基酸和提高机体对钙离子的吸收，产生维生素 Bi、B2、B6、B12及丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等。(6)纳豆菌UaciBw1S natto ^aswra) ACCC10614 调节肠道菌群，增强动物细胞 免疫放应，并能生成多种蛋白酶(特别是碱性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，降解植物性 饲料种某些复杂的碳水化合物，从而提高饲料的转化率。本发明的有益效果
1.促进胃肠道内微生态环境的恢复。本制剂中的乳酸杆菌(LactococcmIactis)ACCC 11092、双歧杆菌(召i/it/o力acieri腫 sp) ACCC 11054、纳豆菌 UaciBw1S natto Swamura) ACCC 10614能够在水产动物的肠道内迅速定殖，建立起有益菌的种群优势，促进水产动 物的营养吸收，产生多种水产动物生长所必需的氨基酸、维生素和有机酸，并且双歧杆菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054、纳豆菌UaciBw1S aaiio )ACCC10614 能够明 显地增强机体的免疫功能，有效预防消化道感染、降低应急状态；
2.净化养殖水体。本制剂中的光合细菌elegans)KCCC10649、酵母菌 {Pi chia fermentans Iodder ) ACCC 20319τ 和枯草芽孢杆菌(feci/A/s subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242τ能及时分解在水产养殖过程中产生的动物排泄 物、代谢物和水体中残留的饵料，明显降低养殖水体的富营养程度，提高水体的溶氧度，同 时产生多种蛋白质，为水产动物提供了优质的天然饵料，也为浮游生物提供了生长所需要 的营养物质，从而进一步建立和完善养殖水体的微生态环境。
具体实施例方式下面用具体实施例对本发明做进一步的详细说明，但本发明不仅仅局限于以 下实施例。
实施例1
水产养殖用微生物制剂的制备方法，包括如下步骤 (1)种子培养液的制备
光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的种子培养液制备将光合细菌 iRhodoplanes elegans)KCCC 10649在无菌条件下，接种到液体培养基中，所述的液体培养 基中各组分在1. OL蒸馏水中的含量为酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸镁0. 05克、氯 化钙0. 3g，pH值调至6. 08 7. 0之间，放置于常规光培养箱内，28°C 30°C常规光照培养 6 7天，得到光合细菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的种子培养液。酵母菌(/YcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的种子培养液的制备将酵母 菌(PicAia fermentans lodder) ACCC 20319τ在无菌条件下接种到液体培养基中，所述的 液体培养基中各组分在1. OL蒸馏水中的含量为无水硫酸镁1. 0g、磷酸二氢钾2. 0g、尿素 3. 0g、玉米浆1. 0g、硫酸锰0. 02g、硫酸亚铁0. 2g，pH值调至5. 5，30°C _31°C培养4 5天， 得到酵母菌菌数彡0. IX IO9CfuAil的种子培养液。纳豆菌UaciBw1S natto Swamura ) ACCC 10614种子培养液和枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 种子培养液的制 备将纳豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢杆菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分别在无菌条件下接种于液体培养 基中，所述的液体培养基为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为蛋白胨10.0g、牛肉膏 3. 0g、氯化钠5. 0g, pH值调至7. 0，28°C 32°C单菌种培养7 8天，分别得到纳豆菌菌数 彡5. OX 109CfU/ml的纳豆菌种子培养液和枯草芽孢杆菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢杆菌种子培养液。乳酸杆菌(ZaciococcM lactis) ACCC 11092种子培养液和双歧杆菌 (.Bifidobacterium sp)ACCC 11054种子培养液的制备将乳酸杆菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092和双歧杆菌(历/ii/ο力acieri腫sp)ACCC 11054分别在无菌条件下接种于同一 液体培养基中，所述的液体培养基中各组分在1. OL蒸馏水中的含量为番茄汁200. OmL, 可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化钠5. 0g、酵母粉6. 0g、吐温80 1. 0g、葡萄糖20. 0g，pH 值调至7. 2，30°C 35°C单菌种培养2 3天，分别得到乳酸杆菌菌数彡5. 0 X 109cfu/ml的 乳酸杆菌种子培养液和双歧杆菌菌数> 5. OX 109CfU/ml的双歧杆菌种子培养液。(2)水产养殖用微生物制剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的各菌种的种子培养液按照光合细菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的种子培养液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 种子培养液、纳豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的种子培养液、枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的种子培养液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的种子培养液和双歧杆菌(历/ii/ο力acieriws sp) ACCC 11054的种子培养液的重量百分数为光合细菌的种子培养液25%，酵母菌的种子培 养液5%，纳豆菌的种子培养液15%，枯草芽孢杆菌的种子培养液25%，乳酸杆菌的种子培养 液15%，双歧杆菌的种子培养液15%，在无菌条件下分别接种到同一液体培养基中，接种量 为液体培养基重量的1 % 2 %，所述的液体培养基中各组分在1.0L蒸馏水中的含量为 红糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度为5 %即发酵罐中氧气体积与发酵液体积比为5%的条件下，28°C 32°C密闭式静置培养7 15天，使pH值自然降到3. 0-3. 5而成。经检测，该水产养殖用微生物复合制剂为酸性，色泽金黄，pH值为3. 0-3. 5，其制 剂中活菌分别是光合细菌elegans) ACCC 10649的菌数彡5. OXlO9Cfu/ ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌数彡彡 0. lX109cfu/ml, 纳豆菌(Macillus natto Swamura ) ACCC 10614 的菌数彡 5. 0 X 109cfu/ml，枯草芽孢 tf M^Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌数 彡 5. OX 109cfu/ml，乳酸杆菌(LaciococcWs lactis) ACCC 11092 的菌数彡 5. OXlO9Cfu/ ml，双歧杆菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌数彡 5. OX 109cfu/ml。实施例2
(1)种子培养液的制备
采用本实施例1的方法，制得种子培养液；
(2)水产养殖用微生物制剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的各菌种的种子培养液按照光合细菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的种子培养液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 种子培养液、纳豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的种子培养液、枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的种子培养液、乳 酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的种子培养液和双歧杆菌(历Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的种子培养液的重量百分数为光合细菌的种子培养液35%，酵母菌的种子培 养液15%，纳豆菌的种子培养液25%，枯草芽孢杆菌的种子培养液15%，乳酸杆菌的种子培养 液5%，双歧杆菌的种子培养液5%，在无菌条件下分别接种到同一液体培养基中，接种量为 液体培养基重量的1 % 2 %，所述的液体培养基中各组分在1.0L蒸馏水中的含量为红 糖50. 0g、蜂蜜10. Og,在溶氧度为5 %即发酵罐中氧气体积与发酵液体积比为5%的条件 下，28°C 32°C密闭式静置培养7 15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。经检测，该水产养殖用微生物复合制剂为酸性，色泽金黄，pH值为3. 0-3. 5， 其制剂中各菌种的活菌数分别是光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌数彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌数 彡 0. IX 109cfu/ml，纳豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌数彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱杆 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的菌数彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸杆菌(ZaciococOT1S Iactis) ACCC 11092 的菌数 彡 5. OX 109cfu/ml，双歧杆菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌数彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο实施例3
(1)种子培养液的制备
采用本实施例1的方法，制得种子培养液；
(2)水产养殖用微生物制剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的各菌种的种子培养液按照光合细菌(/？如而/^皿^ elegans)ACCC 10649 的种子培养液、酵母菌fermentans lodder)ACCC 20319τ 的 种子培养液、纳豆菌UaciB^s natto ^aayra) ACCC10614的种子培养液、枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ 的种子培养液、乳酸菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092的种子培养液和双歧杆菌(历Λ· /ο力acieriws sp) ACCC 11054的种子培养液的重量百分数为光合细菌的种子培养液30%，酵母菌的种子培 养液10%，纳豆菌的种子培养液20%，枯草芽孢杆菌的种子培养液20%，乳酸杆菌的种子培养 液10%，双歧杆菌的种子培养液10%，在无菌条件下分别接种到同一液体培养基中，接种量 为液体培养基重量的1 % 2 %，所述的液体培养基中各组分在1.0L蒸馏水中的含量为 红糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度为5 %即发酵罐中氧气体积与发酵液体积比为5%的条件 下，28°C -32°C密闭式静置培养7-15天，使pH值自然降到3. 0 3. 5而成。经检测，该水产养殖用微生物复合制剂为酸性，色泽金黄，pH值为3.0 3. 5， 其制剂中各菌种的活菌数分别是光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的 菌数彡 5. 0X109cfu/ml,酵母獻Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ 的菌数 彡 0. IX 109cfu/ml，纳豆菌 UaciBw1S natto Swamura )ACCC 10614 的菌数彡 5. 0 X 109cfu/ ml,枯草芽抱杆 Iif {Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T 的菌数彡 5. 0X109cfu/ml,乳酸杆菌(ZaciococOT1S lactis) ACCC 11092 的菌数 彡 5. OX 109cfu/ml，双歧杆菌(召i/ii/o力acieri腫 sp) ACCC 11054 的菌数彡 5. OXlO9Cfu/ ml ο应用实施例
采用本发明实施例1制备的水产养殖微生物复合制剂，分别在虾池和鱼池中实施如
下
以虾池为例试验虾池面积2亩，放养自繁青虾虾苗5万只/亩；对照虾池面积2 亩，放养自繁青虾虾苗5万只/亩。使用方法在试验虾池中，于虾苗放养前10天，采用池水泼洒方法，按照500ml水 产养殖微生物复合制剂/亩，并将其稀释200倍，每10天一次，全池泼洒三次。试验结果试验虾池的溶解氧比对照池增加85% ；氨氮含量< 0. lmg/mL,比对照 虾池平均下降65% ；总产比对照虾池增加25kg，增幅15% ；商品率达90%，并且规格大，售 价高，而对照池商品率为54. 5%，并且规格小，相对售价低。以鱼池为例
试验鱼池面积8亩，每亩放养草鱼、鲫鱼和鲢鱼鱼种共计90kg ；对照鱼池面积8亩， 每亩放养草鱼、鲫鱼和鲢鱼鱼种共计90kg。使用方法在试验鱼池中，于鱼种放养前10天，采用池水泼洒方法，按照500ml水 产养殖微生物复合制剂/亩，并将其稀释200倍，每10天一次，全池泼洒三次。试验结果试验鱼池的亩均净产比对照鱼池增100kg，增幅25% ；氨氮含量 (0. lmg/mL,亚硝酸盐含量< 0. 02mg/mL,水体中COD降低50% 60%，水体富营养化有效降 低；浮游植物种群数增加30% 40%，部分藻类总数下降60% 80%，优化了水体中浮游植物 的种群结构，抑制了藻类的过度繁殖，建立和完善了养殖水体的微生态环境。
权利要求
一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂，其特征在于它是由光合细菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649、酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T、纳豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T、乳酸杆菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092和双歧杆菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054分别进行单菌种培养得到的种子培养液接种于同一培养基中，然后进行发酵罐培养，待培养液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，该制剂中光合细菌(Rhodoplanes elegans)ACCC 10649的菌数≥5.0×109cfu/ml，酵母菌(Pichia fermentans lodder)ACCC 20319T的菌数≥0.1×109cfu/ml，纳豆菌(Bacillus natto Swamura)ACCC 10614的菌数≥5.0×109cfu/ml，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills subsp. spizienii Nakamura et al)ACCC 10242T的菌数≥5.0×109cfu/ml，乳酸杆菌(Lactococcus lactis)ACCC 11092的菌数≥5.0×109cfu/ml，双歧杆菌(Bifidobacterium sp)ACCC 11054的菌数≥5.0×109cfu/ml。
2.根据权利要求1所述的水产养殖用多菌种微生物复合制剂，其特征在于所述各菌 种的种子培养液的重量百分数为光合细菌的种子培养液25% 35%，酵母菌的种子培养 液5% 15%，纳豆菌的种子培养液15% 25%，枯草芽孢杆菌的种子培养液15% 25%，乳 酸杆菌的种子培养液5% 15%，双歧杆菌的种子培养液5% 15%。
3.根据权利要求1所述的水产养殖用多菌种微生物复合制剂的制备方法，其特征在 于包括如下步骤(1)种子培养液的制备光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649的种子培养液的制备将光合细菌 i Rhodoplanes elegant) ACCC 10649在无菌条件下接种到液体培养基中，所述的液体培养 基为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为酵母粉3. 0g、蛋白胨3. 0g、七水硫酸镁0. 05g、氯 化钙0. 3g，pH值调至6. 08 7. 0之间，放置于光培养箱内，28°C 30°C常规光照培养6 7天，得到光合细菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的种子培养液；酵母菌(/7ZcAia fermentans lodder) ACCC 20319τ的种子培养液的制备将酵母菌 {Pichia fermentans lodder) ACCC 20319τ在无菌条件下接种到液体培养基中，所述的液 体培养基为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为无水硫酸镁1. 0g、磷酸二氢钾2. 0g、尿素 3. 0g、玉米浆1. 0g、硫酸锰0. 02g、硫酸亚铁0. 2g，pH值调至5. 5，30°C _31°C培养4 5天， 得到酵母菌菌数彡0. IX IO9CfuAil的种子培养液；纳豆菌(^Bacillus natto Swamura) ACCC10614的种子培养液和枯草芽孢杆菌 (.Bacillus subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al )ACCC 10242T 的种子培养液的制 备将纳豆菌(feci/^As natto Swamura )ACCC ^^^和枯草芽孢杆菌⑶^以·/^^ subtilIs subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242τ分别在无菌条件下接种于液体培养 基中，所述的液体培养基均为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为蛋白胨10. 0g、牛肉膏 3. 0g、氯化钠5. 0g, pH值调至7. 0，28°C 32°C，单菌种培养7 8天，分别得到纳豆菌菌数 彡5. OX 109CfU/ml的纳豆菌种子培养液和枯草芽孢杆菌菌数彡5. OX 109CfU/ml的枯草芽 孢杆菌种子培养液；乳酸杆菌(Laciococcw1S lactis) ACCC 11092的种子培养液和双歧杆菌 (.Bifidobacterium sp) ACCC 11054的种子培养液的制备将乳酸杆菌(Lactococcuslactis) ACCC 11092和双歧杆菌(历/ii/ο力acieri腫sp) ACCC 11054分别在无菌条件下 接种于液体培养基中，所述的液体培养基均为各组分在1. OL蒸馏水中的含量为番茄 汁200. 0ml、可溶性淀粉0. 5g、蛋白胨15. 0g、氯化钠5. 0g、酵母粉6. 0g、吐温80 1. 0g、 葡萄糖20. 0g, pH值调至7. 2，30°C 35°C单菌种培养2 3天，分别得到乳酸杆菌菌数 彡5. OX 109Cfu/ml的乳酸杆菌种子培养液和双歧杆菌菌数彡5. OX 109Cfu/ml的双歧杆菌 种子培养液；(2)水产养殖用多菌种微生物复合制剂的制备分别将步骤(1)制备得到的光合细菌(Rhodoplanes elegans) ACCC 10649、酵母菌 {Pichia fermentans lodder)ACCC 20319τ、纳豆菌(feci/A/s natto 5kaffltfra)ACCC10614、 枯草芽孢杆菌(feciBws subtil Is subsp. spizienii Nakamura et al) ACCC 10242T、乳 酸杆菌(Zaciococc^s Iactis)ACCC 11092 和双歧杆菌(历Λ· /ο力acieri腫 sp)ACCC 11054 的种子培养液按其重量百分数为光合细菌的种子培养液25% 35%，酵母菌的种子培养 液5% 15%，纳豆菌的种子培养液15% 25%，枯草芽孢杆菌的种子培养液15% 25%，乳 酸杆菌的种子培养液5% 15%，双歧杆菌的种子培养液5% 15%，在无菌条件下分别接种 到同一液体培养基中，接种量为液体培养基重量的1 % 2 %，所述的液体培养基中各组分 在1. OL蒸馏水中的含量为红糖50. 0g、蜂蜜10. 0g，在溶氧度为5 %即发酵罐中氧气的体 积与发酵液的体积比为5%的条件下，28°C 32°C密闭式静置培养7 15天，使pH值降到 3. 0-3. 5 而成。
全文摘要
本发明涉及一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂及其制备方法。一种水产养殖用多菌种微生物复合制剂，其特征在于它是由光合细菌、酵母菌、纳豆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌分别进行单菌种培养得到的种子培养液接种于同一培养基中，然后进行发酵罐培养，待培养液的pH值自然降至3.0～3.5而得到的，该制剂中酵母菌的菌数≥0.1×109cfu/ml，其余各菌种的菌数均≥5.0×109cfu/ml。该水产养殖用多菌种微生物复合制剂同时可以改善水产动物的生态环境，防治疾病，降低动物应急状态，提高水产动物品质，缩短上市周期。
文档编号C12N1/00GK101974434SQ201010540308
公开日2011年2月16日 申请日期2010年11月11日 优先权日2010年11月11日
发明者刘志强, 司金安, 唐清池, 尹宝华, 李忠宏, 李旭光, 王学宾, 王建程, 王照, 白帅, 胡伟, 范道佳, 郭金保, 郭银保, 陆勤 申请人:唐清池