专利名称：一种用于快速检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种用于临床病原菌快速检测装置，尤其涉及一种用于检测尿液 中金黄色葡萄球菌的试剂盒。
背景技术：
尿路感染是临床常见的感染性疾病之一，也是妇女最常见的细菌感染性疾病，几 乎一半的妇女将至少经历一次尿路感染。金黄色葡萄球菌所致的尿路感染常导致患者不 适，局部化脓感染，严重的尿路感染还可导致肾损害，甚至死亡。目前国内外尚无临床病原菌快速检测一体化试剂盒，临床上一般通过临时组合检 测所需要的装置和试剂，操作起来非常不便。
实用新型内容本实用新型为了克服现有技术的不足，而提供的一种结构简单，使用方便快 捷的用于检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒。本实用新型采用的技术方案它包括壳体，壳体上具有固定液放置仓、载玻片放置槽、盖玻片放置槽、清洗缓冲 液放置仓、金黄色葡萄球菌特异探针浓缩液放置仓、标准阳性对照探针浓缩液放置仓，杂交 缓冲液放置仓、溶菌酶放置仓、溶葡萄球菌素放置仓。上述的固定液放置仓为两个。上述载玻片放置槽和盖玻片放置槽均为多个，载玻片放置槽与载玻片放置槽之 间、盖玻片放置槽与盖玻片放置槽之间以及载玻片放置槽与盖玻片放置槽之间均平行设置。本实用新型取得的技术效果1、本实用新型结构简单，使用起来非常方便，使用本试剂盒后检测尿液中金黄色 葡萄球菌十分敏感，最低检出限达到了为IO3 104CFU/ml，检测的阳性率为97. 7%，检测尿 液中金黄色葡萄球菌特异性强，试剂盒的特异性达到100%，一份临床标本的检测时间约为 3h，耗时较传统培养鉴定方法大为缩短。
图1为本实用新型的俯视图；图2为载玻片上检测为设置示意图。其中，1-壳体、2-固定液放置仓、3-载玻片放置槽、4-盖玻片放置槽、5-清洗缓 冲液放置仓、6-金黄色葡萄球菌特异探针浓缩液放置仓、7-标准阳性对照探针浓缩液放置 仓、8-杂交缓冲液放置仓、9-溶菌酶放置仓、10-溶葡萄球菌素放置仓、11-样本阳性对照 位、12-标本检测位。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型的实施方式做进一步的说明。参见图1，一种用于检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒，它包括壳体1，壳体上 具有两个固定液放置仓2、载玻片放置槽3、盖玻片放置槽4、清洗缓冲液放置仓5、金黄色 葡萄球菌特异探针浓缩液放置仓6、标准阳性对照探针浓缩液放置仓7，杂交缓冲液放置仓 8、溶菌酶放置仓9、溶葡萄球菌素放置仓10。上述载玻片放置槽和盖玻片放置槽均为多 个，具体个数可以根据需要设定，载玻片放置槽与载玻片放置槽之间、盖玻片放置槽与盖玻 片放置槽之间以及载玻片放置槽与盖玻片放置槽之间均平行设置。金黄色葡萄球菌16sRNA 特异探针序列为5’ -AGAGAAGCAAGCTTCTCGTCCGTTC-3’ ；标准阳性对照探针为EUB338探针， 该探针针对所有细菌，其序列为5’ -GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3’，荧光探针5’端标记的荧光 报告基团均是异硫氰酸荧光素(FITC)。参见图2，载玻片上分为6个位，可同时做3份标本，其分为2横列，上列为样本阳 性对照位11，其中样本阳性对照位定义为d、e、f，下列为标本检测位12，其中标本检测位定 义为g、h、i。利用本装置的试剂盒进行检测的步骤1、本的准备及预处理用无菌尿杯分别留取三位病人的标本a、b、c，混勻后，各吸 取3 ml尿液于于无菌试管中，加入9ml第一个固定液放置仓中的固定液，混勻后放 置10分钟，固定完成后，将标本a、标本b、标本c置于离心机8000rpm离心3min，弃上清； 吸取标本a沉淀IOul滴入载玻片上d、g号位，吸取标本b沉淀IOul滴入载玻片e、h号位， 吸取标本c沉淀IOul滴入载玻片上f、i号位，然后室温晾干；2、交片固定将上步标本涂片浸入20ml第二固定液放置仓的固定液中，IOmin后 取出，去离子水冲洗，室温晾干备用；3、杂交前处理向载玻片上6个位各滴加溶菌酶10 μ 1，置湿盒30°C孵育10分钟， 用无菌生理盐水清洗，再向载玻片上6个位滴加溶葡萄球菌素10 μ 1，置湿盒30°C孵育 30分钟，用无菌生理盐水清洗，室温晾干；4、杂交d、e、f号位分别滴加IOng/μ 1 Eub338探针稀释液20 μ 1，g、h、i号位分
别滴加IOng/μ 1 jpl6sRNA探针稀释液20μ 1，盖上盖玻片，置湿盒55°C避光孵育 2. Oh ；5、洗涤将杂交片浸泡在洗涤液中10 min,以除去未结合探针，室温晾干。6、封片向杂交片上滴加一滴封片介质，盖上盖玻片，在荧光显像下观察结果；7、荧光显微镜下观察样本a的d、g号位在荧光显微镜下均能见到典型的葡萄球 状结构，且呈现出FITC特异的绿色荧光信号；样本b的e号位即阳性对照位能见到典 型的葡萄球状结构，且呈现出绿色荧光信号，样本b的h号位即检测位未见绿色荧光信号； 样本c的f号位和i号位在荧光显微镜下均未呈现出FITC特异的绿色荧光信号。
4[0030]8、结果判读标本a检测阳性对照位呈阳性，检测位也呈阳性反应，最后结果是标 本a为金黄色葡萄球菌检测阳性；标本b检测阳性位呈阳性反应，检测位呈阴性反应， 最后结果是标本b有细菌感染但非金黄色葡萄球菌感染；标本c检测位次呈阴性反应，检测 位也呈阴性反应，最后结果是标本c无细菌感染。从上述实验可以说明，荧光原位杂交方法结果易判断，特异性较普通PCR方法好， 而且，荧光原位杂交方法检测试剂盒对尿液中金黄色葡萄球菌的检测仅需3个小时就能完 成，而传统的培养法需2-3天才能完成，因此，使用该试剂盒可以大大缩短检测时间。该试剂盒的操作只需1人即可完成整个定量操作过程，一次可检测3-21 (每个载 玻片可同时固定3个样本)个样品，这样也减少了人力资源的浪费。本实用新型的保护范围并不限于上述的实施例，显然，本领域的技术人员可以对 本实用新型进行各种改动和变形而不脱离本实用新型的范围和精神。倘若这些改动和变形 属于本实用新型权利要求及其等同技术的范围内，则本实用新型的意图也包含这些改动和 变形在内。
权利要求1.一种用于快速检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于它包括壳体(1)， 壳体上具有固定液放置仓(2)、载玻片放置槽(3)、盖玻片放置槽(4)、清洗缓冲液放置仓 (5)、金黄色葡萄球菌特异探针浓缩液放置仓(6)、标准阳性对照探针浓缩液放置仓(7)，杂 交缓冲液放置仓(8)、溶菌酶放置仓(9)、溶葡萄球菌素放置仓(10)。
2.根据权利要求1所述的用于检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于所 述的固定液放置仓为两个。
3.根据权利要求1或2所述的用于检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒，其特征在于 所述载玻片放置槽和盖玻片放置槽均为多个，载玻片放置槽与载玻片放置槽之间、盖玻片 放置槽与盖玻片放置槽之间以及载玻片放置槽与盖玻片放置槽之间均平行设置。
专利摘要本实用新型涉及一种用于快速检测尿液中金黄色葡萄球菌的试剂盒，它包括壳体，壳体上具有固定液放置仓、载波片放置槽、盖波片放置槽、清洗缓冲液放置仓、金黄色葡萄球菌特异探针浓缩液放置仓、标准阳性对照探针浓缩液放置仓，杂交缓冲液放置仓、溶菌酶放置仓、溶葡萄球菌素放置仓。本实用新型结构简单，使用方便快捷。
文档编号C12M1/34GK201778028SQ2010205248
公开日2011年3月30日 申请日期2010年9月10日 优先权日2010年9月10日
发明者吴青, 李艳, 汪明 申请人:李艳;汪明;吴青