专利名称：益生菌微胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种益生菌微胶囊及其制备方法，属生物工程领域。
背景技术：
人类食用益生菌后，首先经过胃液的消化，然后才能进入肠道中。在胃液的消化过程中大部分益生菌的活性被胃酸抑制甚至杀灭，导致益生菌无法在肠道中繁殖，从而失去了益生菌在肠道中定植的可能。微胶囊技术早已广泛应用于医药、化工、食品等领域，随着益生菌微胶囊化技术的不断发展与完善，益生菌微胶囊的耐酸性、耐胆盐性、耐储性和肠溶性均有所增强。本发明以食用菌粉作为益生素成分被添加到微胶囊中，果胶作为壁材应用到益生菌包埋技术当中，使食用菌中的多糖成分充分作用于益生菌，使益生菌快速在肠道中定植下来，同时食用菌被粉碎至200目，增大反应表面积，以求达到增加合生元微生态制剂的营养性、功能性及益生菌与益生素的协同作用等目的。
发明内容
本发明目的在于提供益生菌微胶囊及其制备方法。本发明的目的是这样实现的本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的1.益生菌的选择及培养基的制备A 菌-乳酸乳球菌乳脂亚种 CICC20408 (Lactobacillus lactis subsp.
cremoris)，培养基为酵母浸膏7. 5克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800. 5毫升，水900毫升，ρΗ7· 0。B 菌-植物乳杆菌 CICC 22211 (Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨 10. 0g，
牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠5. 0g，柠檬酸二胺2. 0g，Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgS04. 7H20 0. 2g, MnS04. H20 0. 05g, CaC0320. Og,蒸馏水 1. 0L, pH6. 8。C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC 21723 (Lactobacillus acidophilus)蛋白胨 5. 0g，牛
肉膏5. 0g，胰蛋白胨10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖10. 0g,吐温801. 0g, K2HP042. Og,乙酸钠
5.0g，柠檬酸氢二铵 2. 0g, ZnS04 ？ 7H20 0. 25g，MgS04 · 7H20 0. lg，蒸馏水定容至 1L，pH
6.2-6. 4。D 菌-嗜热链球菌 CICC 21729 (Strep tococcus thermophilus)酪蛋白胨 20g，
酵母浸出粉5. Og,葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801. 0ml,NaCl 4. Og,乙酸钠1. 5g，抗坏血酸0. 5g，加蒸馏水至1. 0L,调酸度至pH6. 8,0. IMPa灭菌20min。2.益生菌的制备过程2.1冻干菌粉末的活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于4只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2益生菌扩大培养2.2. 1母发酵剂的制备分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养M小时，作为母发酵剂。2. 2. 2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，121 °C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养3036小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，每发酵液活菌数彡IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2. 3食用菌微胶囊的制备分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3%海藻酸钠与1 %果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1. 5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入 1.5% CaCl2溶液钙化汕，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0. 6%，pH = 5. 5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心IOmin收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2. 4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊1-2份，B菌微胶囊4-5份，C菌微胶囊2-4份，D菌微胶囊2-3份，充分混勻后真空包装。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述实施例一本发明采用的4株益生菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，分别为乳酸乳球菌乳脂亚种CICC 20408，植物乳杆菌CICC 22211，嗜酸乳杆菌CICC 21723，嗜热链球菌CICC21729，本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌。1.益生菌的选择及培养基的制备A 菌-乳酸乳球菌乳脂亚种 CICC 20408 (Lactobacillus lactis subsp.
cremoris)，培养基为酵母浸膏7. 5克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800. 5毫升，水900毫升，ρΗ7· 0。B 菌-植物乳杆菌 CICC 22211 (Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨 10. 0g，
牛肉膏10. Og,酵母粉5. Og,葡萄糖5. Og,乙酸钠5. Og,柠檬酸二胺2. 0g, Tween 801. Og, K2HP042. 0g, MgS04. 7H20 0. 2g, MnS04. H20 0. 05g, CaC0320. Og,蒸馏水 1. 0L, ρΗ6· 8。C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC 21723 (Lactobacillus acidophilus)蛋白胨 5. 0g，牛
肉膏5. 0g，胰蛋白胨10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖10. 0g,吐温801. 0g, K2HP042. Og,乙酸钠 5. 0g，柠檬酸氢二铵 2. 0g, ZnS04 ？ 7H20 0. 25g，MgS04 · 7H20 0. lg，蒸馏水定容至 1L，pH6. 2-6. 4。D 菌-嗜热链球菌 CICC 21729 (Streptococcus thermophilus)酪蛋白胨 20g，
酵母浸出粉5. Og,葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801. 0ml,NaCl 4. Og,乙酸钠1. 5g，抗坏血酸0. 5g，加蒸馏水至1. 0L,调酸度至pH6. 8,0. IMPa灭菌20min。2.益生菌的制备过程2. 1冻干菌粉末的活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于4只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2益生菌扩大培养2. 2. 1母发酵剂的制备分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养M小时，作为母发酵剂。2. 2. 2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，121 °C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养30——36小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数彡IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2. 3食用菌微胶囊的制备分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3%海藻酸钠与1 %果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1. 5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入 1.5% CaCl2溶液钙化汕，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0. 6%，pH = 5. 5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心IOmin收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2. 4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊1份，B菌微胶囊4份，C菌微胶囊2 份，D菌微胶囊2份，充分混勻后真空包装。实施例二 1.益生菌的选择及培养基的制备A 菌-乳酸乳球菌乳脂亚种 CICC 20408 (Lactobacillus lactis subsp.
cremoris)，培养基为酵母浸膏7. 5克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800. 5毫升，水900毫升，ρΗ7· 0。B 菌-植物乳杆菌 CICC 22211 (Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨 10. 0g，
牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠5. 0g，柠檬酸二胺2. 0g，Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgS04. 7H20 0. 2g, MnS04. H20 0. 05g, CaC0320. Og,蒸馏水 1. 0L, pH6. 8。C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC 21723 (Lactobacillus acidophilus)蛋白胨 5. 0g，牛
5肉膏5. 0g，胰蛋白胨10. Og，酵母粉5. Og，葡萄糖10. Og,吐温801. 0g, K2HP042. Og,乙酸钠
5.0g，柠檬酸氢二铵 2. Og, ZnS04 ？ 7H20 0. 25g，MgS04 · 7H20 0. lg，蒸馏水定容至 1L，pH
6.2-6. 4。D 菌-嗜热链球菌 CICC 21729 (Streptococcus thermophilus)酪蛋白胨 20g，
酵母浸出粉5. Og,葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801. 0ml,NaCl 4. Og,乙酸钠1. 5g，抗坏血酸0. 5g，加蒸馏水至1. 0L,调酸度至pH6. 8,0. IMPa灭菌20min。2.益生菌的制备过程2. 1冻干菌粉末的活化 分别量取0. 9%的生理盐水IOml于4只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2益生菌扩大培养2. 2. 1母发酵剂的制备分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养M小时，作为母发酵剂。2. 2. 2益生菌扩培首先配置10%的脱脂奶乳浊液，121 °C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养30——36小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数彡IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。2. 3食用菌微胶囊的制备分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3%海藻酸钠与1 %果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1. 5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入 1.5% CaCl2溶液钙化汕，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0. 6%，pH = 5. 5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心IOmin收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。2. 4食用菌合生元微胶囊的复配按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊2份，B菌微胶囊5份，C菌微胶囊4 份，D菌微胶囊3份，充分混勻后真空包装。
权利要求
1.益生菌微胶囊及其制备方法，其特征是乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，分别取每种益生菌菌泥10克，添加细度为200目的香菇粉末4克，与含有3%海藻酸钠与1 %果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1. 5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1. 5% CaCl2溶液钙化池，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0. 6%，pH = 5. 5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心IOmin收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
全文摘要
本发明提供了益生菌微胶囊及其制备方法。首先制备乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，分别取每种益生菌菌泥10克，添加细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
文档编号A23L1/29GK102210450SQ201110084740
公开日2011年10月12日 申请日期2011年4月6日 优先权日2011年4月6日
发明者刘文玉, 刘文辉, 吕伟民, 李娜, 杨大毅, 赵珊珊, 陈成, 顾利文 申请人:黑龙江省轻工科学研究院