专利名称：一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法
技术领域：
本发明涉及一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法。
背景技术：
白藜芦醇是蒽醌萜类化合物，别名虎杖甙元，是重要的植物抗毒素，主要从葡萄皮、虎杖等植物中提取得到。其抑制癌细胞、降低血脂、防治心血管疾病、抗氧化、延缓衰老等作用比较明显，被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。目前，白藜芦醇主要由虎杖的干燥根茎提取。虎杖(Polygonum cuspida turn Sieb. et Zucc.)为野生多年灌木状草本，野生资源经长年挖掘，已日益减少，人工种植需三年方能采收，导致资源瓶颈严重。目前多采用乙酸乙酯溶剂提取虎杖中白藜芦醇，提取温度为70 摄氏度左右，采用提取罐三次套提，所需提取时间长，且容易堵塞。溶剂成本高，能耗大，污染多，效率低。制得的白藜芦醇为脂溶性产品，在饮料、口服液等液体产品方面的应用有局限。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法。该方法成本低，能耗小，产品纯度高。本发明的一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，以虎杖为原料，经愈伤处理后，粉碎发酵，然后采用甲缩醛提取，提取液经浓缩、膜分离、大孔树脂吸附和洗脱，得到的洗脱液进行浓缩、重结晶、真空干燥，制得白藜芦醇，再采用壳聚糖纳米粒的制备方法， 得到水溶性白藜芦醇。所述粉碎发酵中的粉碎是将愈伤处理后的虎杖粉碎至50-200目，采用的发酵剂为虎杖专用复合酶、红糖、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖苷酶、安琪酵母、葡萄酒酵母中的一种。所述发酵剂为葡萄酒酵母。所述愈伤处理是将新鲜虎杖植株，经弱光条件下愈伤处理。所述采用甲缩醛提取的条件为提取时间为1-3小时，提取温度为20_50 C。所述采用甲缩醛提取的设备为平转式提取设备，
所述膜分离采用RO膜、纳滤膜BW30-400-FR、GH4040F或HNF-4040中的一种。所述大孔树脂吸附和洗脱采用的大孔树脂为SP850、LSA10, LSA5B, LSA20, DlOl， XDAl和XDA6中的一种，采用5%Na0H、2%醋酸、纯化水、乙醇中的一种或几种为洗脱液。所述重结晶的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合液，重结晶温度控制在-5-20 C，重结晶时间5-20小时。所述壳聚糖纳米粒的制备方法如下(1)取羟丙基壳聚糖，用纯水搅拌溶解，过滤，配制成1.0-5. Og / L的羟丙基壳聚糖水溶液，用醋酸调节pH 3 6，成为羟丙基壳聚糖醋酸溶液；(2)取多聚磷酸钠溶于纯水中，制成浓度为0.5-1. 2g / L的溶液，过滤，得到多聚磷酸钠溶液；(3)取白藜芦醇溶于50w%乙醇溶液，在持续搅拌下缓慢加入羟丙基壳聚糖醋酸溶液，加完后继续搅拌10-30min，再于持续搅拌下缓慢滴加多聚磷酸钠溶液，停止滴加后继续搅拌5-lOmin，喷雾干燥，得到白藜芦醇壳聚糖纳米粒，即为水溶性白藜芦醇。本发明主要采用经愈伤处理的鲜虎杖原料，粉碎发酵，利用平转逆流提取设备，采用甲缩醛溶剂提取，提取液经浓缩，膜分离、大孔树脂吸附与洗脱、真空干燥，可得99%以上的高纯度白藜芦醇，再采用壳聚糖纳米粒技术，得到水溶性白藜芦醇，主要的技术原理有
1、根据生物工程原理，新鲜虎杖原料经愈伤处理，白藜芦醇含量可实现5%以上的增殖。 2、提取溶剂甲缩醛的溶解性较强，可替代甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，有效地提取白藜芦醇，提高得率。3、利用壳聚糖纳米粒技术对白藜芦醇进行包合，可增加白藜芦醇生物利用度，提高其水溶解度。与传统工艺比，本发明提高了虎杖原料利用率，生产工艺简捷，溶剂成本低，能耗小，污染少。不但提取效率高，产品纯度高，拓宽了产品的应用范围，水溶效果好，而且实现了节能降耗、清洁化生产。与传统工艺比，本发明具有以下显著优点
1、利用甲缩醛的溶解性强、价格低、环境友好等特点，替代甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等用于虎杖中白藜芦醇的提取，提取温度降低到20-50 ？ C。不仅溶剂消耗低，而且生产能耗低，降低了生产成本，且能提高白藜芦醇得率。2、以平转逆流提取设备取代提取罐用于虎杖中白藜芦醇的提取，提高了提取率和溶剂回收率，提取时间缩短为1-3小时，溶剂损耗可降低50%以上，可有效降低生产成本。3、采用膜分离、大孔吸附树脂等方法，用于白藜芦醇的分离纯化，可得到高纯度白藜芦醇产品。4、采用壳聚糖纳米粒技术制备水溶性白藜芦醇，使脂溶性的白藜芦醇产品在传统口服固体制剂及外用产品的应用基础上，增加了在饮料、口服液等液体产品方面的应用。
图1为水溶性白藜芦醇样品的HPLC谱图。
具体实施例方式以下为本发明的具体实施例子，进一步描述本发明，但是本发明不仅限于此。实施例1
本发明的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其制备步骤如下 采用新鲜虎杖植株，以MS为基本培养基，诱导愈伤组织，诱导出的愈伤组织在弱紫外光光照(1340 1560 Ix)条件下培养，粉碎至100目，然后以啤酒酵母为诱导子对愈伤组织进行酶解发酵，发酵后采用甲缩醛提取，提取时间为2小时，提取温度为40 C。提取液经浓缩、膜分离、大孔树脂吸附和洗脱，得到的洗脱液进行浓缩、重结晶、真空干燥，制得白藜芦醇，再采用壳聚糖纳米粒的制备方法，得到水溶性白藜芦醇。如图1所示，得到的水溶性白藜芦醇样品的纯度为99. 30%，提取率为88%。
所述壳聚糖纳米粒的制备方法如下(1)取羟丙基壳聚糖，用纯水搅拌溶解，过滤，配制成1.0-5. Og / L的羟丙基壳聚糖水溶液，用醋酸调节pH 3 6，成为羟丙基壳聚糖醋酸溶液；(2)取多聚磷酸钠溶于纯水中，制成浓度为0.5-1. 2g / L的溶液，过滤，得到多聚磷酸钠溶液；(3)取白藜芦醇溶于50w%乙醇溶液，在持续搅拌下缓慢加入羟丙基壳聚糖醋酸溶液，加完后继续搅拌10-30min，再于持续搅拌下缓慢滴加多聚磷酸钠溶液，停止滴加后继续搅拌5-lOmin，喷雾干燥，即得白藜芦醇壳聚糖纳米粒。表1本发明与传统工艺主要技术指标(每Ikg产品)
权利要求
1.一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于以虎杖为原料，经愈伤处理后，粉碎发酵，然后采用甲缩醛提取，提取液经浓缩、膜分离、大孔树脂吸附和洗脱， 得到的洗脱液进行浓缩、重结晶、真空干燥，制得白藜芦醇，再采用壳聚糖纳米粒的制备方法，得到水溶性白藜芦醇。
2.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述粉碎发酵中的粉碎是将愈伤处理后的虎杖粉碎至50-200目，采用的发酵剂为虎杖专用复合酶、红糖、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖苷酶、安琪酵母、葡萄酒酵母中的一种。
3.根据权利要求2所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述发酵剂为葡萄酒酵母。
4.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述愈伤处理是将新鲜虎杖植株，经弱光条件下愈伤处理。
5.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述采用甲缩醛提取的条件为提取时间为1-3小时，提取温度为20-50 C。
6.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述采用甲缩醛提取的设备为平转式提取设备。
7.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述膜分离采用RO膜、纳滤膜BW30-400-FR、GH4040F或HNF-4040中的一种。
8.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述大孔树脂吸附和洗脱采用的大孔树脂为SP850、LSA10，LSA5B, LSA20, D101, XDAl和XDA6 中的一种，采用5%Na0H、2%醋酸、纯化水、乙醇中的一种或几种为洗脱液。
9.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于所述重结晶的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮中的一种或几种混合液，重结晶温度控制在-5_20 C， 重结晶时间5-20小时。
10.根据权利要求1所述的从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，其特征在于 所述壳聚糖纳米粒的制备方法如下(1)取羟丙基壳聚糖，用纯水搅拌溶解，过滤，配制成 1.0-5. Og / L的羟丙基壳聚糖水溶液，用醋酸调节pH 3 6，成为羟丙基壳聚糖醋酸溶液； (2)取多聚磷酸钠溶于纯水中，制成浓度为0.5-1. 2g / L的溶液，过滤，得到多聚磷酸钠溶液；(3)取白藜芦醇溶于50w%乙醇溶液，在持续搅拌下缓慢加入羟丙基壳聚糖醋酸溶液，力口完后继续搅拌10-30min，再于持续搅拌下缓慢滴加多聚磷酸钠溶液，停止滴加后继续搅拌 5-lOmin，喷雾干燥，得到白藜芦醇壳聚糖纳米粒，即为水溶性白藜芦醇。
全文摘要
本发明提供了一种从虎杖中提取制备水溶性白藜芦醇的方法，该方法以虎杖为原料，经愈伤处理后，粉碎发酵，然后采用甲缩醛提取，提取液经浓缩、膜分离、大孔树脂吸附和洗脱，得到的洗脱液进行浓缩、重结晶、真空干燥，制得白藜芦醇，再采用壳聚糖纳米粒的制备方法，得到水溶性白藜芦醇。本发明产品纯度高，白藜芦醇纯度高达98%以上；生产成本低，比传统的方法要低20-30%；得率高，比传统的要高8-10%；有效的增加白藜芦醇的溶解度，提高白藜芦醇的口服吸收生物利用度；可清洁化生产，纯化过程无污染，溶剂可回收使用。
文档编号A23L2/52GK102219652SQ20111011559
公开日2011年10月19日 申请日期2011年5月5日 优先权日2011年5月5日
发明者余峰, 杨爽, 牟大庆, 陈燕梅 申请人:三明华健生物工程有限公司