专利名称：小分子化合物tws119作为神经干细胞分化诱导剂的新应用的制作方法
小分子化合物TWS119作为神经干细胞分化诱导剂的新应用技术领域
本发明所涉及的是再生医学和细胞生物学领域，具体涉及TWS119作为诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的诱导剂的新应用。
背景技术：
神经干细胞(neural stem cells, NSCs)存在于胚胎和成年哺乳动物的中枢神经系统，具有自我更新和多向分化潜能，能分化为各种神经细胞，如神经元、少突胶质细胞以及星形胶质细胞等，为中枢神经系统损伤、神经系统变性疾病或遗传性代谢疾病、神经退行性疾病等提供了新的治疗策略。中枢神经系统损伤后，大部分NSCs分化为胶质细胞，在损伤部位形成胶质瘢痕，阻碍了轴突生长，使损伤不能修复。因此，提高NSCs向神经元的分化比例成为神经科学研究的热点。
目前，国内外通用的体外诱导NSCs增殖分化的方法是给予丝裂原，如碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)及表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)等,干预维持培养的神经干细胞,使其处于增殖状态,除去丝裂原并添加含胎牛血清的培养基后，诱导NSCs进行分化，但这种方法所得到的分化细胞主要是胶质细胞，神经元比例较低。
TWSl 19 (3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3_D]嘧啶_4_基]氧基]苯酚)是一种小分子有机化合物，最早是美国Scripps Research Institute的Wu等在2002年合成的[Wu，X. et al J. Am. Chem. Soc. (2002) 124,14520-14521]。TffSl 19 的结·构式如下
权利要求
1.TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作为诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的诱导剂的新应用。
2.诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中含有诱导剂TWS119。
3.根据权利要求2所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中含有浓度为200 500nM的诱导剂TWSl 19。
4.根据权利要求3所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中含有浓度为350nM的诱导剂TWSl 19。
5.根据权利要求2、3、4之任一权利要求所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中还含有胎牛血清。
6.根据权利要求5所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中还含有体积百分浓度为5 20%的胎牛血清。
7.根据权利要求6所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基中还含有体积百分浓度为10%的胎牛血清。
8.权利要求2所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基的制备方法，包括以下步骤a.DMEM/F12基础培养液的制备取制备DMEM/F12基础培养液IL用量的DMEM/ F12(l I)干粉I袋、谷氨酰胺2. 5g，用浓度为O. lmol/L、pH值为7. 35的磷酸盐缓冲液即 PBS溶解并稀释至1L，调节pH值为7. 5，用O. 2um微孔滤膜过滤除菌，即得；b.细胞培养基的制备按照制备IOOml细胞培养基计，将诱导剂TWSl19 (200 500nM) 加入步骤a制得的DMEM/F12基础培养液70ml使溶解，用O. 2um微孔滤膜过滤除菌后，加入胎牛血清5 20ml、青霉素与链霉素的混合液(即由浓度为4万U/ml的青霉素溶液、浓度为4万U/ml的链霉素溶液按1:1混合而成)的溶液1ml，最后用DMEM/F12基础培养液定容至100ml，即得。
9.根据权利要求8所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基的制备方法，其特征在于步骤b中诱导剂TWSl 19的终浓度为350nM。
10.根据权利要求9所述的诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基的制备方法，其特征在于步骤b中诱导剂TWSl 19的终浓度为350nM，胎牛血清的加入量为10ml。
全文摘要
本发明公开了TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作为诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的诱导剂的新应用，公开了一种诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化的细胞培养基，含有诱导剂TWS119，并且提供了此种细胞培养基的制备方法；实验证实在哺乳动物神经干细胞分化培养基中加入诱导剂TWS119后，神经干细胞向神经元分化的比例明显提高，特别是当TWS119浓度为350nM时效果最佳。含有TWS119的细胞培养基可诱导哺乳动物神经干细胞向神经元分化，具有潜在的临床应用价值。
文档编号C12N5/0793GK103031274SQ20111029114
公开日2013年4月10日 申请日期2011年9月30日 优先权日2011年9月30日
发明者田杰 申请人:北京清美联创干细胞科技有限公司