专利名称：鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用。
背景技术：
禽流感和新城疫分别是由禽流感病毒和新城疫病毒引起的两种病毒性传染病。两种传染病发病急，传播快，发病率高，对养殖业可造成致命性的打击。流行于我国鸡群的禽流感病毒的亚型主要为H5和H9亚型。流感病毒极易发生基因变异，从而导致抗原性的改变。因此，虽然我国已全面采取免疫措施，但H5和H9亚型流感病毒仍然在鸡群中反复发生。 H5和H9亚型禽流感病毒基因和抗原特性的变异，导致常规血清学方法及分子生物学监测方法无法检出流行毒株，因此需要建立一种能够检出当前流行毒株的通用性良好的检测方法。此外，流行病学调查表明，我国大部分地区鸡群存在H3亚型流感病毒的血清阳性抗体， 且有从鸡群中分离到H3亚型禽流感病毒的报道，因此，H3亚型禽流感病毒也应作为流感病毒监测的对象之一。近年来，新城疫病毒和禽流感病毒引起鸡群发病的临床症状趋于相似， 无法用常规临床诊断方法进行确诊，迫切需要建立一种检测方法用于新城疫和禽流感的鉴别诊断。对于传统的检测方法，如病毒分离、血凝抑制试验、神经氨酸酶试验等，费时、费力，不能做出快速而及时的诊断；而且不能在同一检测反应中检测不同的对象，即无法同时进行鉴别诊断。RT-PCR方法具有敏感性高、特异性好、省时等特点，而且多重RT-PCR方法可以在一个反应中同时检测多种病原。目前，国内外还没有能够同时检测新城疫和H3、H5、H9 亚型禽流感病毒的多重RT-PCR方法。因此，临床上，迫切需要一种能快速鉴别诊断新城疫和不同亚型禽流感病毒的检测方法，不但能够确定病毒是否为新城疫病毒或禽流感病毒， 还能够确定禽流感病毒的亚型，而且对当前的流行毒株具有很好的检测覆盖性。
发明内容
本发明的目的是提供一种鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用。本发明所提供的鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对为PCR引物对组合物A，是下述1)-4)中的任意一种1)所述PCR引物对组合物A由如下4个引物对组成引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；所述引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V均由两条单链DNA组成；所述引物对NDV为序列表中序列1所示的单链DNA和序列表中序列2所示的单链 DNA组成的引物对；所述引物对H3V为序列表中序列3所示的单链DNA和序列表中序列4所示的单链 DNA组成的引物对；
所述引物对H5V为序列表中序列5所示的单链DNA和序列表中序列6所示的单链 DNA组成的引物对；所述引物对H9V为序列表中序列7所示的单链DNA和序列表中序列8所示的单链 DNA组成的引物对；2)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H3V 和引物对H5V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；3)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H3V 和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；4)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H5V 和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。本发明还提供一种鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的PCR引物对组合物B，是下述5)-8)中的任意一种5)所述PCR引物对组合物B由如下3个引物对组成所述引物对H3V、引物对H5V 和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；6)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H3V和引物对 H5V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；7)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H3V和引物对 H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；8)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H5V和引物对 H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。本发明还保护鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的所述引物对H5V。所述1)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、3、4、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1 1 1;所述2)的PCR引物对组合物A中序列表序列 1、2、3、4、5和6所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1 ；所述3)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、3、4、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1; 所述4)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为 1:1:1:1:1:1。所述5)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、4、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1;所述6)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、4、5和6 所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 ；所述7)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、 4、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 ；所述8)的PCR引物对组合物B中序列表序列5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1。本发明保护下述a)_f)中的任意一种用途a)所述PCR弓|物对组合物A在制备诊断或辅助诊断新城疫和禽流感试剂或试剂盒中的应用；
6
b)所述PCR引物对组合物B在制备诊断或辅助诊断禽流感试剂或试剂盒中的应用；c)所述PCR引物对H5V在制备诊断或辅助诊断H5亚型禽流感试剂或试剂盒中的应用。d)所述PCR引物对组合物A在制备鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用；e)所述PCR引物对组合物B在制备鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用；f)所述PCR引物对H5V在制备鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用。本发明还保护下述A)_C)中的任意一种试剂A)鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有所述 PCR引物对组合物A ；B)鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有所述PCR引物对组合物B ；C)鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有所述PCR引物对 H5V。本发明还保护下述D) -F)中的任意一种PCR试剂盒D)鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有所述A)试剂；E)鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有所述
B)试剂；F)鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有所述
C)试剂。本发明还保护下述G)_I)中的任意一种制备方法G)所述制备方法包括将所述PCR引物对组合物A的单链DNA分别单独包装的步骤；H)所述制备方法包括将所述PCR引物对组合物B的单链DNA分别单独包装的步骤；I)所述制备方法包括将所述引物对H5V的单链DNA分别单独包装的步骤。本发明还保护所述PCR试剂盒的制备方法，包括如下步骤将所述PCR引物对组合物A、所述PCR引物对组合物B或所述PCR引物对H5V的单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种物质包装在同一试剂盒内DNA聚合酶和下述4种dNTP :dATP, dTTP， dCTP 和 dGTPo本发明所提供的PCR引物对可检测的病毒种类及其分支或基因型分别如下PCR 引物对NDV可检测不同基因型的新城疫病毒，具体可为II型、III型、VII型或IX型新城疫病毒；PCR引物对H3V可检测不同类型的H3亚型禽流感病毒，具体可为H3N8亚型禽流感病毒；PCR引物对H5V可检测不同类型及不同分支的H5亚型禽流感病毒，具体可为2. 3. 2分支、2. 3. 4分支或7分支的H5W亚型禽流感病毒；PCR引物对H9V可检测不同类型及不同分支的H9亚型禽流感病毒，具体可为Gl-Iike分支或BJ/94-like分支的H9N2亚型禽流感病毒；但不限于上述病毒的上述类型及其分支或基因型。本发明所提供的PCR引物对可检测的病毒来源分别如下PCR引物对NDV可检测鸡源和鸭源的新城疫病毒，PCR引物对H3V可检测鸭源的H3亚型禽流感病毒，PCR引物对 H5V可检测鸡源、鸭源和麻雀源的H5亚型禽流感病毒；PCR引物对H9V可检测鸡源、鸭源或鹌鹑源的H9亚型禽流感病毒；但不限于上述病毒的上述来源。使用本发明所提供的4种引物对同时用于检测新城疫病毒、H3、H5和H9亚型禽流感病毒的特异性强，灵敏度分别为ieid50/ioo μ 1,ieid50/ioo μ 1UX 10"2eid50/100 μ 1 和1EID5(I/I00y 1，与病毒分离和血凝抑制实验等常规实验方法的鉴定结果相比，符合率达 100%。本发明与现有技术相比，具有单一 RT-PCR技术的灵敏度高、特异性强、准确率高， 一次RT-PCR可以实现对临床样品中4种病毒即新城疫病毒、H3、H5和H9亚型禽流感病毒的检测，且能够检出近年来我国禽群中的流行毒株，成本更低，适合开发相应的多重RT-PCR 试剂盒，以用于新城疫和禽流感的临床诊断和流行病控制。
图1为引物对NDV的特异性检测。其中，M为Maker，1-6分别为感染新城疫病毒 F48E9、Chicken/Henan/2009、Chicken/ShangDong/2010、Chicken/Hebei/2010、Duck/ ShangDong/2011或HG/Beijing/2009的样品，7-11分别为感染H4N6亚型禽流感病毒A/ Duck/ShangDong/1/2010、H6N1 亚型禽流感病毒 A/Duck/Bei jing/1/2003、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)或呼肠孤病毒(REO)的样品，12为阴性鸡胚尿囊液对照。图2为引物对H3V的特异性检测。其中，M为Maker，1-6分别为感染H3亚型禽流感病毒 A/Duck/BeiJing/33/2004、A/Duck/BeiJing/40/2004、A/Duck/BeiJing/44/2004、 A/Duck/BeiJing/56/2005、A/Duck/BeiJing/59/2005 或 A/Duck/BeiJing/61/2005 的样品， 7-11分别为感染H4N6亚型禽流感病毒A/Duck/ShangDong/1/2010、H6N1亚型禽流感病毒 A/Duck/Bei jing/1/2003、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)或呼肠孤病毒(REO)的样品，12为阴性鸡胚尿囊液对照。图3为引物对H5V的特异性检测。其中，M为Maker，1-6分别为感染H5亚型 # ^胃 _ # A/Chicken/Huabei/202/2010> A/Duck/Huabei/1/201U A/treesparrow/ Jiangsu/1/2008、A/Chicken/Huabei/204/2010、A/Duck/Huabei/7/2009 或 A/Chicken/ Huabei/7/2011 的样品，7_11 分别为感染 H4N6 亚型禽流感病毒 A/Duck/ShangDong/1/2010、 H6N1亚型禽流感病毒A/Duck/Bei jing/1/2003、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)或呼肠孤病毒(REO)的样品，12为阴性鸡胚尿囊液对照。图4为引物对H9V的特异性检测。其中，M为Maker，1-6分别为感染H9亚型禽流感病毒 A/Quail/HongKong/Gl/1997、A/Chicken/Beijing/3/1999、A/Chicken/FX/01/2010、 A/Duck/ShangDong/2CP/2010、A/Chicken/Sichuan/8/2011 或 A/Duck/ZhuCheng/1/2011 的样品，7-11分别为感染H4N6亚型禽流感病毒A/Duck/ShangDong/l/2010、H6m亚型禽流感病毒A/Duck/Beijing/1/2003、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)或呼肠孤病毒(REO)的样品，12为阴性鸡胚尿囊液对照。
图5为四重RT-PCR的特异性检测。其中，M为Maker，1为分别感染H9亚型禽流胃__ A/Chicken/Beijing/3/1999>H5^胃__ A/treesparrow/Jiangsu/l/2008> H3亚型禽流感病毒A/Duck/Beijing/40/2004和新城疫病毒HG/Beijing/2009的cDNA样品的混合物，2-5分别为感染H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Bei jing/3/1999、H5亚型禽流感病毒 A/tree sparrow/Jiangsu/1/2008、新城疫病毒 HG/Beijing/2009 和 H3 亚型禽流感病毒A/Duck/Beijing/40/2004的cDNA样品，6-10分别为感染H4N6亚型禽流感病毒A/Duck/ ShangDong/l/2010,H6Nl 亚型禽流感病毒 A/Duck/Bei jing/1/2003、IBV、IBDV 和呼肠孤病毒的样品，11为阴性鸡胚尿囊液对照。图6为四重RT-PCR分别检测新城疫、H3、H5或H9亚型禽流感病毒的不同毒株感染的鸡胚尿囊液样品结果。其中图(a)为H3亚型禽流感病毒，图(b)为H5亚型禽流感病毒，图(c)为H9亚型禽流感病毒，图(d)为新城疫病毒；图(a)-(d)中的M为分子量Maker， 1同图5中1的样品；图(a)-(d)中的2-7分别同图2、3、4、1中1_6的样品；8为阴性鸡胚尿囊液对照。图7为引物对H3V、H5V、H9V及NDV分别对H3、H5、H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒的灵敏度测定。其中，H3代表H3亚型禽流感病毒，H5代表H5亚型禽流感病毒，H9代表 H9亚型禽流感病毒，ND代表新城疫病毒；图中1-7分别为不同含量的H3、H5、H9亚型禽流感病毒或新城疫病毒，依次为 1 X 104EID50/100 μ 1U X 103EID50/100 μ 1U X 102EID50/100 μ 1, 1X10EID50/I00y 1UEID50/I00y 1,1 X 10_1EID50/100 μ 1、1 X 1(T2EID5。/100 μ 1,8 为阴性鸡胚尿囊液对照。图8为四重RT-PCR方法的灵敏度检测。其中，图(a)为四重RT-PCR分别对不同含量的H3、H5、H9亚型禽流感病毒或新城疫病毒的样品检测，其中的H3代表H3亚型禽流感病毒，H5代表H5亚型禽流感病毒，H9代表H9亚型禽流感病毒，ND代表新城疫病毒，1-7 分别为不同含量的H3、H5、H9亚型禽流感病毒或新城疫病毒的样品，样品的各病毒含量依次为 ι χ io4eid50/ioo μ ι、ι χ io3eid50/ioo μ ι、ι χ io2eid50/ioo μ ι、ι χ Io1Eid5cZioo μ ι、 1EID5Q/100 μ IuxiO-1EID5cZlOOy 1、1 X 10_2EID5(1/100 μ 1，8 为阴性鸡胚尿囊液对照；图 (b)为四重RT-PCR方法对含H3、H5、H9亚型禽流感病毒或新城疫病毒的样品的混合物的灵敏度检测，M为Maker ;1-5分别为不同稀释度的病毒样品混合物，每种样品混合物中各病毒的含量依次为 1X103EID50/I00y 1、1X102EID5。/I00y IuxiO1EID5cZlOOy 1、 ieid50/ioo μ 1 u X io^eid50/ioo μ 1,6 为阴性鸡胚尿囊液对照。图9为二重和三重RT-PCR方法对禽流感病毒和新城疫病毒的检测。其中，M为 Maker ；1为引物对H9V、H5V和NDV组合，2为引物对H9V、H3V和NDV组合，3为引物对H5V、 H3V和NDV组合，4为引物对H9V、H5V和H3V组合，5为引物对H5V和H3V组合，6为引物对 H9V和H3V组合，7为引物对H3V和NDV组合，8为引物对H9V和H5V组合，9为引物对H5V 和NDV组合，10为引物对H9V和NDV组合，11为阴性鸡胚尿囊液对照。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例所使用的病毒毒株信息如下
表1本发明所使用的毒株信息
权利要求
1.鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的PCR引物对组合物A，是下述 1)-4)中的任意一种1)所述PCR弓丨物对组合物A由如下4个引物对组成弓丨物对NDV、弓丨物对H3V、弓丨物对 H5V和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9 亚型禽流感病毒中的至少一种；所述引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V均由两条单链DNA组成；所述引物对NDV为序列表中序列1所示的单链DNA和序列表中序列2所示的单链DNA 组成的引物对；所述引物对H3V为序列表中序列3所示的单链DNA和序列表中序列4所示的单链DNA 组成的引物对；所述引物对H5V为序列表中序列5所示的单链DNA和序列表中序列6所示的单链DNA 组成的引物对；所述引物对H9V为序列表中序列7所示的单链DNA和序列表中序列8所示的单链DNA 组成的引物对；2)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H3V和引物对H5V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；3)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H3V和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；4)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成所述引物对NDV、引物对H5V和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。
2.鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的PCR引物对组合物B，是下述5)-8)中的任意一种5)所述PCR引物对组合物B由如下3个引物对组成所述引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V ；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；6)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H3V和引物对H5V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；7)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H3V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；8)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成所述引物对H5V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的PCR引物对组合物A，其特征在于所述1)的PCR 引物对组合物A中序列表序列1、2、3、4、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为 1:1:1:1:1:1:1: 1;所述2)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、3、 4、5和6所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1 ；所述3)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、3、4、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1;所述4)的PCR引物对组合物A中序列表序列1、2、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为 1:1:1:1:1:1。
4.根据权利要求2所述的PCR引物对组合物B，其特征在于所述5)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、4、5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 1 1; 所述6)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、4、5和6所示单链DNA的摩尔比为 1:1:1:1 ；所述7)的PCR引物对组合物B中序列表序列3、4、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1 ；所述8)的PCR引物对组合物B中序列表序列5、6、7和8所示单链DNA的摩尔比为1 1 1 1。
5.鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的所述引物对H5V。
6.下述a)_f)中的任意一种用途a)权利要求1或3所述的PCR引物对组合物A在制备诊断或辅助诊断新城疫和禽流感试剂或试剂盒中的应用；b)权利要求2或4所述的PCR引物对组合物B在制备诊断或辅助诊断禽流感试剂或试剂盒中的应用；c)权利要求5所述的引物对H5V在制备诊断或辅助诊断H5亚型禽流感试剂或试剂盒中的应用；d)权利要求1或3所述的PCR引物对组合物A在制备鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用；e)权利要求2或4所述的PCR引物对组合物B在制备鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用；f)权利要求5所述的引物对H5V在制备鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒试剂或试剂盒中的应用。
7.下述A)-C)中的任意一种试剂A)鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有权利要求 1或3所述的PCR引物对组合物A ；B)鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有权利要求2或4所述的 PCR引物对组合物B ；C)鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的试剂，所述试剂中含有权利要求5所述的引物对 H5V。
8.下述D)-F)中的任意一种PCR试剂盒D)鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有权利要求7中A)所述的试剂；E)鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有权利要求 7中B)所述的试剂；F)鉴定或辅助鉴定H5亚型禽流感病毒的PCR试剂盒，所述PCR试剂盒中含有权利要求 7中C)所述的试剂。
9.下述G)-I)中的任意一种制备方法G)所述制备方法包括将权利要求1或3所述的PCR引物对组合物A的单链DNA分别单独包装的步骤；H)所述制备方法包括将权利要求2或4所述的PCR引物对组合物B的单链DNA分别单独包装的步骤；I)所述制备方法包括将权利要求5所述的引物对H5V的单链DNA分别单独包装的步马聚ο
10.权利要求8所述的PCR试剂盒的制备方法，包括如下步骤将权利要求1或3所述的PCR引物对组合物A、权利要求2或4所述的PCR引物对组合物B或权利要求5所述的引物对H5V的单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种物质包装在同一试剂盒内 DNA 聚合酶和下述 4 种 dNTP :dATP，dTTP, dCTP 和 dGTP。
全文摘要
本发明公开了一种鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用。本发明提供的PCR引物对组合物由引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V组成；该PCR引物对组合物可用于制备诊断或辅助诊断新城疫和禽流感试剂，或制备鉴定或辅助鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒试剂。使用本发明所提供的PCR引物对组合物同时检测新城疫病毒、H3、H5和H9亚型禽流感病毒的特异性强，灵敏度分别为1EID50/100μl、1EID50/100μl、1×10-2EID50/100μl和1EID50/100μl，与病毒分离和血凝抑制实验等常规实验方法的鉴定结果相比，符合率达100％，适合开发相应的多重RT-PCR试剂盒，以用于新城疫和禽流感的临床诊断和流行病控制。
文档编号C12Q1/70GK102321769SQ20111030346
公开日2012年1月18日 申请日期2011年10月9日 优先权日2011年10月9日
发明者刘金华, 包静楠, 唐庆冬, 孙洪磊, 王金亮, 蒲娟 申请人:中国农业大学