抑制酪氨酸酶表达的双链rna寡核苷酸的制作方法

专利名称：抑制酪氨酸酶表达的双链rna寡核苷酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的用于降低酪氨酸酶表达的双链RNA寡核苷酸，其在化妆和/或药学目的上的用途，以及它与大小小于或等于I μ m、ζ电势为10_80mV的阳离子型颗粒的缔
八
口 ο
背景技术：
酪氨酸酶(单苯酚二羟基苯丙氨酸氧氧化还原酶EC I. 14. 18. I)是参与皮肤色素形成机制的必需酶。它具体催化以下反应依靠其羟化酶活性催化酪氨酸转变成多巴 (二羟基苯丙氨酸)并且依靠其氧化酶活性将多巴转化成多巴醌(dopaquinone)。酪氨酸酶只有在某些生物因子的作用下处于成熟状态时才起作用。该酶在治疗如黑色素瘤(Riley等，J. Immunother. 2001，21，212-220)或者 Vogt-Koyanagi-Harada 病(Read 等，Curr. Opin. Ophthalmol. , 2000,11,437-442)的疾病中也是有利的。皮肤色素形成的形成机制，也就是黑色素的形成，是特别复杂的，且示意性地包括下面的主要步骤酪氨酸一多巴一多巴醌一多巴色素一黑色素因此,人类皮肤的色素形成是由树突细胞、黑色素细胞合成黑色素而导致的。后者含有被称为黑素体的细胞器，其是黑色素生物合成的部位。黑素体在沿着树突迁移后，从黑素细胞转移到角质形成细胞。然后在表皮分化过程中，角质形成细胞被转运到皮肤表面 (Gilchrest BA,Park HY,Eller MS,Yaar M,Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem Photobiol 1996 ;63 :1-10 ;Hearing VJ, Tsukamodo K, Enzymatic control of pigmentation in mammals. FASEB J 1991 ；5 :2902-2909)。在黑素原生成酶中，酪氨酸酶是催化黑色素合成前两个步骤的关键酶。酪氨酸酶的纯合突变导致I型眼皮肤白化病，所述I型眼皮肤白化病特征是黑色素合成的完全丧失(Toyofuku K， Wada I,Spritz RA,Hearing VJ,The molecular basis of oculocutaneous albinism type I (OCAl) sorting failure and degradation of mutant tyrosinases results in a lack of pigmentation. Biochem J. 2001 ；355 :259-269)。由于着色过度紊乱是由黑色素生产的增加导致的，所以人们发现开发新的治疗方法很重要，其原理是基于抑制酪氨酸酶的活性。大多数已知的亮肤(skin-lightening)化合物是酹类/儿茶酹类。这些化合物抑制酪氨酸酶，但是这些化合物的绝大多数对黑色素细胞具有细胞毒性，这会导致皮肤的永久性褪色。因此，看起来既高效又表现出好的耐受性的新的酪氨酸酶抑制化合物应用于人类是有利的。最近，双链RNA dsRNA寡核苷酸，且更具体是siRNA寡核苷酸(12至40个核苷酸的)的应用，使得在如皮肤护理或头发护理的化妆领域，以及皮肤病学领域和药学领域获得特别的活性成为可能。然而，已知siRNA在体内应用存在各种困难。除了在局部应用这些siRNA时，为使其到达靶细胞的这些siRNA的穿透问题之外，特别是由于穿过角质层的困难，经验已显示施用siRNA，如很多出版物报道的会触发干扰素应答(Sledz CA 等，Activation of the interferon system by short-interfering RNAs. Nat Cell Biol. 2003 ；9 :834-9. Katalin Kariko 等，Small Interfering RNAs Mediate Sequence-Independent Gene Suppression and Induce Immune Activation by Signaling through Toll-Like Receptor 31. J. Immunol. 2004 ; 172 :6545-6549.Judge AD 等，Sequence-dependent stimulation of the mammalian innate immune response by synthetic siRNA. Nat Biotechnol. 2005 ；23 :457-62)，而且还会诱导或抑制非 siRNA 革巴向的基因的表达(Jackson等，Expression profiling reveals off-target gene regulation by RNAi. Nat Biotechnol. 2003 ；21 :635-7)，这两种现象都是非常不合需要的。专利申请US 2004/0215006描述了有抗酪氨酸酶活性的双链的和反义单链的RNA 寡核苷酸；所用的实施例只涉及反义单链RNA寡核苷酸。具体地，它没有证明与这些反义 RNA同源的siRNA是否有效。一些作者已强调，如siRNA的双链RNA寡核苷酸和反义单链RNA寡核苷酸具有不同的祀，且反义RNA的活性不能外推到相同序列的siRNA(Xu等,Effective small interfering RNAs and phosphorothioate antisense DNAs have different preferences for target sites in the luciferase mRNAs. BBRC 2003;306:712-717)。此外，在该文献US 2004/0215006中，提出的siRNA的浓度是50_200nM。如上所指出的，Jackson等已经描述了未被在浓度为IOOnM时使用的siRNA靶向的基因的强的正调节和负调节。类似地，在WO 2005/060536中，描述了特异性抑制酪氨酸酶的siRNA，其所提出的浓度范围非常宽，且可能导致组合物中包含了非常大量的siRNA，由此会观察到非siRNA靶向的基因的正调节和负调节。在化妆或治疗用途的范围内，这种非靶向基因的调节是不能接受的，特别是由于它不可预见的特性。本申请人已开发了特异性抑制酪氨酸酶表达的新的siRNA，从所述siRNA中选择展示一定活性的siRNA，从而所述siRNA可在小于或等于InM的剂量下使用。除了解决涉及诱导非特异基因的问题之外，本申请人已证实了这些siRNAs序列不会诱导干扰素应答。为此，按照Invitrogen 公司销售的 “BLOCK-iT RNAi Stress Response Control Kit(Human)for monitoring interferon-mediated stress response to double-stranded RNA in human cells”的手册中描述的方案,测量了已知受干扰素诱导的0AS-1和IFIT-I (干扰素诱导的三十四肽(tetratricop印tide)重复结构域)基因的表达(Stefan F. Wieland 等，Searching for Interferon-Induced Genes that inhibitHepatitis B Virus Replication in Transgenic Mouse Hepatocytes, J. of Virology 2003,77 :1227-1236)。此外，这些酪氨酸酶特异性siRNA与大小小于或等于I μ m、ζ电势为10_80mV的阳离子型颗粒缔合，使得可能非常显著地提高所述siRNA向如皮肤的三维模型的靶细胞的穿透。一旦穿透，酪氨酸酶特异性siRNA就变得有活性。穿透可通过与siRNA附着的荧光标记进行评价，且其活性可通过定量PCR对靶信使进行定量或通过测定对应于靶信使的蛋白而进行评价。本发明的阳离子型颗粒可以是表面活性剂胶束、嵌段或非嵌段聚合物胶束、 阳离子脂质体和非离子表面活性剂微囊(niosome)、阳离子油质体、阳离子毫微乳剂 (nanoemulsion)、以及阳离子有机或无机颗粒和毫微胶囊(nanocapsule)。

发明内容
这样，本发明的第一个主题涉及一种选自寡核苷酸序列SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 和 48，任选地经过修饰的双链 RNA 寡核苷酸(也称作dsRNA或siRNA)。利用dsRNA，且更具体是siRNA (短干扰RNA)，使得通过降解编码靶蛋白的mRNA而获得特异性抑制该蛋白合成的活性成为可能。靶mRNA的降解通过RISC复合体(RNA诱导的沉默复合体)的活化而实现，所述RISC复合体通过dsRNA的反义链与mRNA的结合而发挥其作用(参见 Tuschl T. Chem. Biochem. 2001 ；2 :239-245 ；Nykanen A & al, Cell 2001 ； 107 :309-321 ；Dorsett Y.和Tuschl T.Nat Rev Drug Discov. 2004；3 :318-329 ；Downward J. BMJ. 2004 ；328 :1245-1248 ；Shanker P.等，JAMA 2005 ；293 :1367-1373)。实现的分子结构包括由12-40个核苷酸，优选23-27个核苷酸组成的双链RNA片段。这些双链RNA寡核苷酸可优选地由同源的有义链以及与人酪氨酸酶 mRNA(GenBank登记号NM_000372)序列互补的反义链组成。该双链RNA寡核苷酸具有平头末端或者有2-6个核苷酸的不配对末端。双链RNA寡核苷酸可通过多种手动的或自动的、体内的或体外的方法合成。体外合成方法可以是化学方法或者酶法，例如利用RNA聚合酶(例如通过，T3、T7 或者SP6)，其会对选定的DNA(或者cDNA)序列模型进行转录。下列文献中描述了许多种体内合成双链RNA的方法；它们可在各种细菌细胞类型，或者高等生物细胞类型中进行(Sambrook等，Molecular Cloning, A Laboratory Manual,第二版(1989), DNA cloning,第 I 卷和第 II 卷，D. N. Glover (1985 版), Oligonucleotide Synthesis, M. J. Gaits (1984 版),Nucleic Acid Hybridation, B. D. Hames 和 S. J. Higgins(1984 版)，Transcription and Translation B. D. Hames 和 S. J. Higgins(1984 版)，Animal Cell Culture, R. I. Freshney(1986 版)，Immobilized Cells and Enzymes, IRL Press (1986), B. Pertal, A Practical Guide to Molecular Cloning(1984), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, J. H. MiIIer 和 M.P.Calos, Cold Spring Harbor Laboratory(1987 版),Methods in Enzymology,154卷，Wu 和 Grossman,以及 155 卷，ffu, Mayer 和 Walker (1987), Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology, Academic Press, London, Scopes (1987), Protein Purification !Principle and Practice,第二版，Springer-Verlag, N.-Y.以及 Handbook of Experimental Immunology,第 I-IV 卷，C. D. Weir 和 CC. Blackwell (1986))。还可参考专利申请WO 01/36646、W001/75164以及US 2003/0088087中描述的合成方法。优选地，本发明的双链RNA寡核苷酸通过在2’-位置添加_0_甲基基团进行修饰。双链RNA寡核苷酸可进行各种修饰，所述修饰具体是如文献US2004/014956中所述的修饰。有利地，修饰会导致双链RNA寡核苷酸更为稳定，而且更优选地，导致双链RNA寡核苷酸不会引起干扰素应答，这种性质对于体内应用是必需的。这些双链RNA寡核苷酸还可对有义链进行修饰，从而使得其不能被整合入RISC，并从而不会引起副作用。优选地，将使用SEQ ID N0S. 1、2、4、13、16、35、37、40和42的双链RNA寡核苷酸， 按照下文实施例2的方案所测量的，其在0. 016nM时具有的酪氨酸酶mRNA降解效率大于 50%。本发明的主题还涉及包含至少一种选自寡核苷酸序列SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 和 48 的双链 RNA 寡核苷酸的组合物。在该组合物中，双链RNA寡核苷酸的存在浓度是小于或等于100 μ M，优选小于或等于10 μ Μ，且更优选小于或等于I μ M0本发明的组合物优选适于局部施用于身体表面，也就是皮肤、体被、粘膜以及眼睛。在本发明的一个优选的实施方案中，双链RNA寡核苷酸与大小小于或等于I μ m、 ζ电势为10-80mV的阳离子型颗粒缔合。在该实施方案中，双链RNA寡核苷酸会粘附到颗粒的表面，后者用作为载体以使其穿透进入皮肤结构和进入皮肤、粘膜或眼睛的靶细胞而用于化妆、皮肤病学和/或眼的应用。本发明的阳离子型颗粒是这样的颗粒，其大小小于或等于I μ m，优选小于或等于 500nm,更为优选小于或等于300nm,可能采用，例如Brookhaven公司的激光颗粒分级器的 BI90 plus型测量所述大小，且ζ电势为10_80mV,所述电势可用Coultronics公司的ζ 仪DELSA 440型进行测量。阳离子型颗粒可选自表面活性剂胶束，具体是非离子两亲型表面活性剂和阳离子表面活性剂胶束，嵌段聚合物胶束，具体是阳离子两亲型嵌段聚合物胶束、非离子两亲型嵌段聚合物和阳离子两亲型嵌段聚合物胶束和非离子两亲型嵌段聚合物和阳离子表面活性剂胶束，非离子和阳离子表面活性剂脂质体，非离子表面活性剂微囊，油质体，毫微乳剂颗粒，毫微胶囊，有机颗粒或无机颗粒。
具体实施例方式下面且以未穷尽的方式列举根据本发明可用的阳离子型颗粒。表面活性剂胶束
我们回想一下，胶束是当两亲型分子溶于水中或油中，在超过某一特定的称为临界的CMC浓度时自发形成的聚集体。可用于本发明范围内的胶束由至少一种阳离子表面活性剂组成。该阳离子表面活性剂可与一种或多种非离子两亲型表面活性剂缔合。本领域技术人员可以从McCutcheons 的 “emulsifiers and detergents” 1998 版以及其后的版本中方便地选择非离子和阳离子的表面活性剂。作为非限制性的例子，下面列出了本发明范围内可用的阳离子表面活性剂。非限制地，可用的非离子表面活性剂是ΡΕ0、甘油和聚甘油、氧乙烯化或未氧乙烯化的山梨聚糖、蔗糖、氧乙烯化或未氧乙烯化的葡萄糖、麦芽糖、PPO-PEQ的烷基和聚烷基 (C6至C30，饱和的或未饱和的，分支的或未分支的)酯或醚。就非离子表面活性剂和阳离子表面活性剂的混合物来说，其各自的重量比将为 99/1 至 1/99。形成胶束的表面活性剂的量将取决于后者的CMC。然而，在本发明中，胶束表面活性剂的浓度以其重量计算相对于组合物总重量为O. 1-10%，且优选为O. 2-5%。嵌段聚合物胶束两亲型嵌段聚合物胶束可按照文献WO 04/035013中描述的方法进行制备。用于制备与根据本发明的dsRNAs缔合的胶束的嵌段共聚物具体是两亲型嵌段聚合物，其优选为非离子的，二嵌段或三嵌段，且其与水接触能形成胶束。它们具体是二嵌段 (A-B)或三嵌段(A-B-A)的类型，A对应于非离子亲水聚合物嵌段而B对应于疏水聚合物嵌段。该聚合物的分子量可为1000至100000，而Α/B的比率可为1/100至50/1。在本发明中，可用到三种类型的胶束-阳离子两亲型嵌段聚合物胶束；-非离子两亲型嵌段聚合物与阳离子两亲型嵌段聚合物缔合的混合胶束；和-非离子两亲型嵌段聚合物与阳离子表面活性剂缔合的胶束。非离子亲水聚合物嵌段可选自聚环氧乙烷(PEO)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。疏水聚合物嵌段可选自聚苯乙烯、聚(叔丁基苯乙烯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、 聚(丙烯酸乙酯)、聚(丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(乙酸乙烯酯)、聚己酸内酯、聚己内酰胺、聚二甲基硅氧烷、聚(C3-C6环氧烷)、聚(天冬氨酸)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚亮氨酸、聚丁二烯、聚乙烯、聚丙烯、聚丁烯。嵌段共聚物优选选自下列嵌段共聚物-聚环氧丙烷/聚环氧乙烷-聚苯乙烯/聚氧乙烯-聚(甲基丙烯酸甲酯)/聚氧乙烯-聚(甲基丙烯酸丁酯)/聚氧乙烯-聚氧化丁烯/聚氧乙烯-聚己酸内酯/聚氧乙烯-聚乙烯/聚氧乙烯-聚氧乙烯/聚氧化丁烯/聚氧乙烯。在本发明中，有必要向胶束组合物中添加
-阳离子两亲型嵌段聚合物，所述嵌段中的一种是阳离子的且举例来说可选自-聚(聚甲基丙烯酸三甲基乙铵)；-季铵化的聚(甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)；-聚甲基乙烯基咪唑鐵(polymethyvinylimidazolium)；-聚(乙烯基苯甲基三甲基氯化铵)(poly(viny Ibenzy I trimethyl ammonium chloride))。非离子两亲型嵌段聚合物与阳离子两亲型嵌段聚合物的缔合为使两者之间的比率为99/1至1/99 ；和/ 或-如下面所列的至少一种阳离子表面活性剂。在这种情况下，非离子两亲型嵌段聚合物与阳离子表面活性剂的各自比率将为 50/50 至 99/1。在本发明中，与阳离子表面活性剂缔合或未缔合的胶束嵌段聚合物的浓度，以其重量计算相对于组合物的总重量将为0. 1-10%,且优选0. 2-5%。在本明的一个变形中，也可能形成由如上所述的阳离子两亲型嵌段聚合物组成的胶束。脂质体和非离子表面活性剂微囊能够形成非离子脂质体的非离子两亲型脂质具体是专利申请EP O 582503中描述的那些。具体地，非离子两亲型脂质可由至少一种多元醇和至少一种脂肪酸的酯混合物组成，其中所述多元醇选自含有1-60个环氧乙烷单元的聚乙二醇、山梨聚糖、具有2-60个环氧乙烷单元的山梨聚糖、具有2-30个环氧乙烷单元的甘油、含有2-15个甘油单元的聚甘油、蔗糖、具有2-30个环氧乙烷单元的葡萄糖，所述脂肪酸含有线性或分支的、饱和或不饱和的C5-C17烷基链，每个多元醇基团的烷基链数目为1-10。术语“酯混合物”不但包括不同化学族的纯酯的混合物，也包括以各种比例含有相同族的多元醇的几种化学纯酯的任何产品。具体地，在其亲水部分具有统计学化学式的产品就是这样，例如化学式CO-(OCH2-CHOH-CH2)n-OH的聚甘油酯，其中η是统计学值，且其可含有n = l,n = 2，n = 3，n = 4等的各种比例的酯；在其亲脂部分含有几种烷基链的酯也是这样，例如椰油酸酯，其含有C5-C17烷基链，或异硬脂酸酯，其中C17烷基链是同分异构形式的复杂混合物；由相同多元醇的单_、二 _、三-或聚酯的混合物组成的产品也是这样。需注意的是，只含有能够形成小泡的单酯和另一种类型杂质的产品不能用于本发明。商品酯可单独地用于本发明，因为它们实际上是酯的混合物，它们为例如下述的- “ICI”公司出售的商品名为“SFAN 20，40，60和80”的山梨聚糖(或山梨糖醇酐)和脂肪酸的偏酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的商品名为“SI 10 R NIKK0L”的异硬脂酸山梨聚糖酯；- “ICI”公司出售的名为“TWEEN 61”的、具有4个环氧乙烷单元的硬脂酸山梨聚
糖酷；- “ICI”公司出售的名为“MYR J 45”的、含有8个环氧乙烷单元的硬脂酸聚乙二
9醇酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的名为“MYS 4”的化学式为EMI6. I的单硬脂酸聚乙二醇酯， 其中化学式η等于4;-“UNICHEMA”公司出售的化学等级或生物技术生产的等级的分子量为400的硬脂
酸聚乙二醇酯；- “H0ECHST”公司出售的名为“HOSTACERINE DGS”的、具有4个环氧乙烷单元的硬
脂酸二甘油酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的名为“TETRAGLYN 1S”的硬脂酸四甘油酯；- “S0LVAY”公司出售的异硬脂酸二甘油酯；- “ΝΙΗ0Ν”公司出售的名为“EMALEX DSG 2”的二硬脂酸二甘油酯；- “CR0DA”公司出售的名为“F50、F70、F110 和 F160CR0DESTA” 的单-、二-和三硬
脂酸棕榈酸蔗糖酯；- “GRILL0”公司出售的名为“GRILLOTEN PSE 141 G”的单硬脂酸棕榈酸蔗糖酯和二硬脂酸棕榈酸蔗糖酯的混合物；- “ICI”公司出售的名为“ARLAT0NE 2121”的硬脂酸蔗糖酯和椰油酸蔗糖酯的混合物；- “AMERCH0L”公司出售的名为“GLUCAM E 20 DI STEARATE的、具有20个环氧乙烷单元的二硬脂酸甲基葡萄糖酯。当然，可以使用以上已经是混合物的产品相互之间的混合物，或者这些产品与纯的产品的混合物。阳离子表面活性剂选自下文所列的，且从而它们赋予分散体的pH为5-8 ;在脂质相中，非离子两亲型脂质的量与阳离子表面活性剂的量的重量比为50/1到50/25，且分散体的脂质相与水相的重量比为1/1000到300/1000。油质体本发明涉及的油质体在专利申请EP O 705 593中有描述。它们包括一种水包油类型的乳剂，其由带有层状液晶包被的油质小球构成，分散在水相中，其特征是每个油质小球作为一个单位，包被着单层的或多层的层(经冷冻断裂(cryofracture)后利用透射电子显微镜术可以观测到ι- ο个薄片)，所述层由至少一种亲脂表面活性剂、至少一种亲水的表面活性剂以及至少一种阳离子表面活性剂得到，赋予乳剂的PH为5-8，所述被包被的油质小球的平均直径小于500纳米。亲脂表面活性剂和亲水表面活性剂各含有至少一种具有超过约12个碳原子的饱和脂肪链。更为优选的是，该脂肪链含有16至22个碳原子。根据本发明的另一个优选的实施方案，亲脂表面活性剂的HLB为约2至约5。为大家所熟知的是，术语HLB (亲水-亲脂平衡)用于指表面活性剂的亲水基团的大小和强度与亲脂基团的大小和强度之间的平衡。这样的亲脂表面活性剂的例子是二硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸二甘油酯、三硬脂酸四甘油酯、十硬脂酸十甘油酯、单硬脂酸二甘油酯、三硬脂酸六甘油酯、五硬脂酸十甘油酯、 单硬脂酸山梨聚糖酯、三硬脂酸山梨聚糖酯、单硬脂酸二甘醇酯、棕榈酸和硬脂酸的甘油酯、聚氧乙烯化的单硬脂酸酯20E (包含2个氧乙烯单元)、单山嵛酸甘油酯和二山嵛酸甘油酯以及四硬脂酸季戊四醇酯。亲水表面活性剂优选具有约8至约12的HLB。作为这样的亲水表面活性剂例子，可提及下列化合物聚氧乙烯化的山梨糖醇酐单硬脂酸酯40E、聚氧乙烯化的山梨糖醇酐三硬脂酸酯200E、聚氧乙烯化的单硬脂酸酯 80E、单硬脂酸六甘油酯、聚氧乙烯化的单硬脂酸酯100E、聚氧乙烯化的二硬脂酸酯120E以及聚氧乙烯化的二硬脂酸甲基葡萄糖酯200E。阳离子表面活性剂可选自下文中描述的化合物。毫微乳剂阳离子型颗粒还可以选自水包油的毫微乳剂，其包含在水相中分散的油相，其油质小球的数均大小小于lOOnm，特征是它们包含至少一种两亲型脂质，所述两亲型脂质含有至少一种非离子两亲型脂质和一种阳离子两亲型脂质，油相和两亲型脂质存在的含量使得油相/两亲型脂质的重量比为3到10。毫微乳剂一般具有透明至浅蓝色的外观。所述毫微乳剂的透明度通过在600nm下处于10-90%的透射系数，或者通过浊度进行测量。本发明的组合物的浊度是60到400NTU， 且优选70到300NTU，所述浊度是利用型号为2100P的HACH便携式浊度仪在约25°C下测量的。本发明的毫微乳剂的油质小球的数均大小小于lOOnm，且优选20-80nm，且更优选 40-60nm。小球大小的降低使得可能促进活性剂穿透进入皮肤表面层(载体效应)。根据本发明的毫微乳剂优选在4_45°C的温度制备，且因此与热敏活性剂相容。这些分散体在下列申请中有具体的描述EP 0728 460、EP O 879 589、EP I 010 413、EP I 010 414、EP I 010 416、EP I 013 338、EP I 016 453、EP 1018 363、EP I 025 898以及EP I 120 102。在所有这些申请中都指明，为了提高颗粒的稳定性，可向非离子表面活性剂(或混合物)中加入离子表面活性剂。在本发明的情况中，一种或多种阳离子表面活性剂将专门用作离子表面活性剂。上述参考文献中指出的比例予以保留，且以阳离子表面活性剂为例，选择列表中对所有颗粒通用的。非离子表面活性剂，优选水溶性的或在水分散性的，含有至少一种疏水的嵌段和至少一种亲水的嵌段。本发明的非离子两亲型脂质优选选自I/硅氧烷表面活性剂，2/在温度低于或等于45°C时为液体的两亲型脂质，其选自至少一个多元醇或至少一个脂肪酸的酯，其中脂肪酸含有至少一个线性或分支的、饱和或不饱和的，且具体是不饱和的或分支的、C8-C22烷基链，所述多元醇选自含有I至60个环氧乙烷单元的聚乙二醇、 山梨聚糖、含有2-30个环氧乙烷单元的甘油和含有2-15个甘油单元的聚甘油，3/脂肪酸和糖的酯以及脂肪醇和糖的醚，4/在温度等于45°C时为固体的表面活性剂，其选自脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨聚糖酯以及氧乙烯化的脂肪酸山梨聚糖酯、乙氧基化的脂肪醚以及乙氧基化的脂肪酸酯，5/环氧乙烷(A)和环氧丙烷(B)的嵌段共聚物，以及这些表面活性剂的混合物。I/可根据本发明使用的硅氧烷表面活性剂是含有至少一个氧乙烯化
其中R”R2 和 R3 彼此独立地代表 C1-C6 烷基自由基或者-(CH2) x_ (OCH2CH2) y- (OCH2CH2CH2) z-0R4自由基，至少一个自由基RpR2或R3不是烷基自由基；R4是氢、烷基自由基或者酰基自
由基；A是O至200的整数；B是O至50的整数；限定条件是A和B不同时等于零；X是I至6的整数；y是I至30的整数；ζ是O至5的整数。根据本发明一个优选的实施方案，在式(X)的化合物中，烷基自由基是甲基自由基，X是2-6的整数，且y是4-30的整数。
作为式(II)的硅氧烷表面活性剂的例子，可以提及式(III)的化合物 (CH3)3SiO-[(CH3)2SiO]A-(CH3SiO)B-Si(CH3)3
I(HI)
(CH2)2-(OCH2CH2)y-OH
其中A是20至105的整数，B是2至10的整数，并且y是10至20的整数。 作为式(II)的硅氧烷表面活性剂的例子，还可以提及式(IV)的化合物H-(OCH2CH2)y-(CH2)3-[(CH3)2SiO] A' -(CH2)3-(OCH2CH2)y-OH (IV)其中A’和y是10至20的整数。作为硅氧烷表面活性剂，可具体使用由Dow Corning公司出售的名为DC 5329,DC 7439-146、DC 2-5695 和 Q4-3667 的产品。化合物 DC 5329、DC 7439-146 和 DC 2-5695 是式(XI)的化合物，其中分别地，A是22，B是2并且y是12汸是103，B是10并且y是12 ; A是27, B是3并且y是12。化合物Q4-3667是式(IV)的化合物，其中A是15并且y是13。2/在温度低于或等于45°C时为液体的两亲型脂质具体地可选自-UNICHEMA公司出售的名为Prisorine 3644的、分子量为400的异硬脂酸聚乙二酉享酉旨(CTFA 名:PEG_8 Isostearate)；-SOLVAY公司出售的异硬脂酸二甘油酯；-SOLVAY公司出售的名为单月桂酸二甘油酯(Diglycerin-monolaurate)的、含有两个甘油单元的月桂酸聚甘油酯(月桂酸聚甘油-2酯)；
的链-OCH2CH2-和/或氧丙烯化的链-OCH2CH2CH2-的硅氧烷化合物；可提及文献 US-A-5, 364，633 和 US-A-5, 411，744 中描述的那些。优选地，根据本发明使用的硅氧烷表面表面活性剂是式(II)的化合物
H3 I Hs
CISIC
H3 Q H3
clsilc
12
-ICI公司出售的名为SPAN 80的油酸山梨聚糖酯；-NIKKO公司出售的名为NIKKOL SI IOR的异硬脂酸山梨聚糖酯；-ULICE公司出售的α-丁基葡糖苷椰油酸酯或者α-丁基葡糖苷癸酸酯。3/根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的脂肪酸和糖的酯，优选在温度低于或等于45°C时为固体，并且具体地选自C8-C22脂肪酸与蔗糖、麦芽糖、葡萄糖或者果糖形成的酯或酯的混合物，以及C14-C22脂肪酸与甲基葡萄糖形成的酯或酯的混合物。形成用于本发明的毫微乳剂的酯的脂肪单元的C8-C22*C14_C22脂肪酸含有饱和或不饱和的线性烷基链，其分别具有8-22或14-22个碳原子。酯的脂肪单元具体地可选自硬脂酸、山嵛酸、花生四烯酸、棕榈酸、肉豆蘧酸、月桂酸、癸酸及其混合物。优选使用硬脂酸。作为脂肪酸与蔗糖、麦芽糖、葡萄糖或者果糖的酯或酯的混合物的例子，可以提及单硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸蔗糖酯、三硬脂酸蔗糖酯及其混合物，例如Croda公司出售的名为Crodesta F50、F70、FllO和F160的产品，其HLB (亲水-亲脂平衡)分别是5、7、11和 16 ;且作为脂肪酸和甲基葡萄糖的酯或酯的混合物的例子，可以提及Goldschmidt公司出售的名为Tego-care 450的二硬脂酸聚甘油_3甲基葡萄糖酯。还可以提及葡萄糖或麦芽糖的单酯，例如ο-十六烷酰-6-D-葡糖苷甲酯和ο-十六烷酰-6-D-麦芽糖苷甲酯。根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的脂肪醇和糖的醚，在温度低于或等于45°C时为固体，且具体地选自C8-C22脂肪酸与蔗糖、麦芽糖、葡萄糖或者果糖形成的醚或醚的混合物，以及C14-C22脂肪酸与甲基葡萄糖形成的醚或醚的混合物。具体地是烷基聚葡糖苷。形成用于本发明的毫微乳剂的醚的脂肪单元的C8-C22或者(14_(22脂肪醇含有饱和或不饱和的线性烷基链，其分别具有8-22或14-22个碳原子。醚的脂肪单元具体地可选自癸基、鲸蜡基、二十二烷基、二十烷基、硬脂基、棕榈基、肉豆蘧基、月桂基、辛基和十六烷酰单元，以及它们的混合物，例如鲸腊硬脂基(cetearyl)。作为脂肪醇和糖形成的醚的例子，可以提及如癸基葡糖苷和月桂基葡糖苷的烷基聚葡糖苷，其例如由Henkel公司分别以商品名Plantaren 2000和Plantaren 1200出售的产品，任选作为与十六醇十八醇混合物的混合物的鲸蜡硬脂基葡糖苷，其例如由Seppic公司出售的Montanov 68、Goldschmidt公司出售的Tego-care CG90以及Henkel公司出售的 Emulgade KE3302,以及二十烧基葡糖苷,例如Seppic公司出售的名为Montanov 202的花生醇和山嵛醇与二十烷基葡糖苷的混合物的形式。作为这种类型的非离子两亲型脂质，更具体地使用单硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸蔗糖酯、三硬脂酸蔗糖酯及其混合物、二硬脂酸聚甘油-3甲基葡萄糖酯和烷基聚葡糖苷。4/根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的甘油脂肪酸酯，在温度低于或等于45°C时为固体，具体地可选自由至少一种含有16-22个碳原子的饱和线性烷基链的酸和ι- ο个甘油单元形成的酯。一种或多种这样的甘油脂肪酸酯可用于本发明的毫微乳剂。这些酯具体地选自硬脂酸酯、山嵛酸酯、花生酸酯、棕榈酸酯及其混合物。优选使用硬脂酸酯和棕榈酸酯。作为可用于本发明的毫微乳剂的表面活性剂的例子，可以提及单硬脂酸十甘油 (10个甘油单元)酯、二硬脂酸十甘油(10个甘油单元)酯、三硬脂酸十甘油(10个甘油单元)酯和五硬脂酸十甘油(10个甘油单元)酯(CTFAg Polyglyceryl-10 stearate、 Polyglycery1-10 distearate、 Polyglyceryl-IOtristearatPolyglyceryl-10 pentastearate)，例如 Nikko 公司分别以名称 Nikkol Decaglyn 1-S、2_S、3_S 和 5-S 出售的产品，以及单硬脂酸二甘油酯(CTFAg :Polyglyceryl_2 stearate),例如Nikkol公司以名Nikkol DGMS出售的产品。根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的山梨聚糖脂肪酸酯，在温度低于或等于45°C时为固体，具体地可选自由C16-C22脂肪酸和山梨聚糖形成的酯以及由 C16-C22脂肪酸和山梨聚糖形成的氧乙烯化的酯。它们是由至少一种含有至少一条分别具有 16-22个碳原子的饱和线性烷基链的脂肪酸和山梨糖醇或乙氧基化的山梨糖醇形成的。氧乙烯化的酯一般含有1-100个环氧乙烷单元，且优选2-40个环氧乙烷(EO)单元。这些酯可具体地选自硬脂酸酯、山嵛酸酯、花生酸酯、棕榈酸酯及其混合物。优选使用硬脂酸酯和棕榈酸酯。作为可用于本发明的毫微乳剂的山梨聚糖脂肪酸酯以及氧乙烯化的山梨聚糖脂肪酸酯的例子，可以提及ICI公司以名Span 60出售的单硬脂酸山梨聚糖酯(CTFA 名Sorbitan stearate), ICI公司以名Span 40出售的单棕榈酸山梨聚糖酯(CTFAg Sorbitan palmitate),以及ICI公司以名Tween65出售的三硬脂酸山梨聚糖酯20E0(CTFA 名Polysorbate 65)。根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的乙氧基化的脂肪族醚，在温度低于或等于45°C时为固体，优选为由1-100个环氧乙烷单元和至少一个具有16-22个碳原子的脂肪醇链形成的醚。醚的脂肪族链具体选自二十二烷基、二十烷基、硬脂基和鲸蜡基单元及其混合物，如鲸蜡硬脂基。作为乙氧基化的脂肪族醚的例子，可以提及含有5、10、 20 和 30 个环氧乙烧单兀的山箭醇醚(CTFA 名Beheneth_5、Beheneth-10、Beheneth-20、 Beheneth-30)，例如Nikko公司以名Nikkol BB5、BB10、BB20和BB30出售的产品，以及含有两个环氧乙烷单元的硬脂醇醚(CTFA名Steareth-2)，例如ICI公司以名Brij 72出售的
女口
广叩ο根据本发明，可用作毫微乳剂中的非离子两亲型脂质的乙氧基化的脂肪酸酯，在温度低于或等于45°C时为固体，是由1-100个环氧乙烷单元和至少一个具有16-22个碳原子的脂肪酸链形成的酯。酯的脂肪族链具体选自硬脂基、二十二烷基、二十烷基和棕榈基单元及其混合物。作为乙氧基化的脂肪酸酯的例子，可以提及含有40个环氧乙烷单元的硬脂酸酯，例如ICI公司以名Myrj 52 (CTFA名PEG_40 stearate)出售的产品以及含有8个环氧乙烧单兀的山箭酸酯(CTFAg :PEG_8 behenate),例如Gattefosse公司以名Compritol HD5 ATO出售的产品。5/根据本发明，可用作毫微乳剂的非离子两亲型脂质的环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物，具体地可选自式(V)的嵌段共聚物HO (C2H4O) X (C3H6O) y (C2H4O) zH (V)其中x、y和ζ是整数，从而x+z的范围为2-100，y的范围为14-60，以及它们的混合物，且更具体选自HLB为2-16的式(V)的嵌段共聚物。这些嵌段共聚物可具体选自泊洛沙姆，且具体选自泊洛沙姆231，如ICI公司以名 Pluronic L81出售的式(V)(其中x = ζ = 6，y = 39) (HLB 2)的产品；泊洛沙姆282，如ICI公司以名Pluronic L92出售的式(V)(其中x = ζ = 10，y = 47) (HLB 6)的产品；以及泊洛沙姆124,如ICI公司以名Pluronic L44出售的式(V)(其中x = ζ = 11, y = 21) (HLB 16)的产品。作为非离子两亲型脂质，还可提及文献EP-A-705593中所述的非离子表面活性剂的混合物，此处将所述文献引入作为参考。在非离子两亲型脂质中，可具体使用-PEG 400异硬脂酸酯或PEG-8异硬脂酸酯(含8mol环氧乙烷)，-异硬脂酸二甘油酯，-含有2单元甘油的单月桂酸聚甘油酯和含10单元甘油的硬脂酸聚甘油酯，-油酸山梨聚糖酯，-异硬脂酸山梨聚糖酯及其混合物。根据本发明，非离子两亲型脂质在毫微乳剂中的含量相对于组合物的总重量为 O. 2重量％至12重量％ ,且优选为O. 2重量％至8重量％ ,且更优选为O. 2重量％至6重量％。阳离子两亲型脂质选自下文所列的那些。它们在本发明的毫微乳剂中存在的浓度，优选为相对于毫微乳剂的总重量的O. 01 至6重量％,且更优选为O. 2至4重量％。油根据本发明的毫微乳剂的油相中含有至少一种油。可用于本发明的毫微乳剂中的油优选自-动物或植物来源的油，其由脂肪酸和多元醇的酯构成，具体是液态的甘油三酯， 例如葵花油、玉米油、大豆油、鳄梨油、霍霍巴油、骨髓油、葡萄子油、芝麻油、榛子油、鱼油和 glyceryl tricaprocaprylate,或式为R9COORltl的植物或动物油，其中R9代表含有7至29 个碳原子的高级脂肪酸残基，并且Rltl代表含有3至30个碳原子的线性的或分支的基于烃的链，具体是烷基或链烯基，例如puree 11 in油或液体霍霍巴木蜡；-天然的或合成的精油，例如桉叶油、杂熏衣草油、熏衣草油、韦惕蔚油、山苍子油、 朽1檬油、檀香油(sandlewood oil)、迷迭香油、春黄菊油、香薄荷油、肉豆蘧油、肉桂油、海索草油(hyssop oil)、贯蒿子油、橙油、香叶醇油、杜松油和香柠檬油；-合成油,例如parleam油、聚烯烃和液体羧酸酯；-矿物油，例如十六烷、异十六烷和石蜡油；-卤代油，具体是碳氟化合物，例如氟代胺(fluOToamine)，如全氟三丁胺，氟代烃，例如全氟代十氢化萘(perfluorodecahydro-naphthalene)、氟代酯和氟代醚；-挥发性或非挥发性的硅油。可用作合成油的聚烯烃具体是聚α -烯烃，且更具体是那些氢化的或未氢化的聚丁烯类型，且优选氢化的或未氢化的聚异丁烯类型。可用作合成油的液体羧酸酯可以是单羧酸酯、二羧酸酯、三羧酸酯或四羧酸酯。酯的总碳数目一般大于或等于10，且优选小于100，且更优选小于80。它们具体是饱和或不饱和的、线性的或分支的C1-C26脂族酸与饱和或不饱和的、线性的或分支的C1-C26脂族醇形成的单酯，酯的总碳数目一般大于或等于10。也可以使用C4-C22 二羧酸或三羧酸与C1-C22醇形成的酯，以及一羧酸、二羧酸或三羧酸与C2-C26 二羟基、三羟基、四羟基或五羟基醇形成的酯。在上面所述的酯中，优选使用棕榈酸烷基酯，例如棕榈酸乙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、棕榈酸2-辛基癸酯；肉豆蘧酸烷基酯，例如肉豆蘧酸异丙酯、肉豆蘧酸丁酯、肉豆蘧酸鲸蜡酯、肉豆蘧酸2-辛基十二醇酯；硬脂酸烷基酯，例如硬脂酸己酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸异丁酯；苹果酸烷基酯，例如苹果酸二辛酯；月桂酸烷基酯，例如月桂酸己酯和月桂酸2-己基癸酯；异壬酸异壬酯；辛酸鲸蜡酯。有利地，根据本发明的毫微乳剂含有至少一种分子量大于或等于400的油，具体是400至10000，更好地是400至5000，或甚至为400至2500。分子量大于或等于400的油可选自动物或植物来源的油、矿物油、合成油和硅油，以及它们的混合物。作为这种类型的油，举例来说，可以提及棕榈酸异鲸蜡酯、硬脂酸异鲸蜡酯、鳄梨油和霍霍巴油。根据本发明的毫微乳剂包含一定量的油相(除两亲型脂质之外的油和其它脂肪物质)，所述量优选相对于毫微乳剂的总重量为2-40重量％，且更具体是4-30重量％，且更优选是4-20重量％。油相和两亲型脂质(非离子和离子的两亲型脂质)优选在根据本发明的毫微乳剂中按照油相的量和两亲型脂质的量的重量比为3至10存在，且更为优选的范围是3至6。 术语“油相的量”在本文中指的是这种油相的成分的总量，不包括两亲型脂质的量。根据本发明的毫微乳剂除了上述式(I)的尿素衍生物之外，如果必要的话，还可含有溶剂，具体用于提高组合物的透明度。这些溶剂优先选自-C1-C8低级醇，例如乙醇；- 二元醇，例如甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、一缩二丙二醇或者含有4至16个，且优选8至12个环氧乙烷单元的聚乙二醇；-糖类，例如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖或者蔗糖。这些溶剂可作为混合物使用。当它们存在于本发明的毫微乳剂中时，可使用的浓度优选相对于毫微乳剂的总重量为O. 01-30重量％，且更好地为相对于毫微乳剂的总重量的5-20重量％。醇和/或糖的量相对于毫微乳剂的总重量优选为5-20重量％，并且二元醇的量相对于毫微乳剂的总重量优选为5-15重量％。制备方法制备上面所限定的毫微乳剂的方法是，将含有尿素衍生物的水相和油相在温度范围10°C -80°c下通过强烈搅拌进行混合，在大于5X107Pa的压力下进行高压匀浆步骤，且任选地加入所用的聚合物。根据本发明优选的实施方案，随后在大于5X IO7Pa的压力下再进行另外一个高压匀浆步骤。高压匀浆优选在压力为6X IO7Pa至ISXlO7Pa下进行。剪切优选为2X IOV1至5X ΙΟΥ1，且更好地是I X IO8s-1至3X IOiV1 (s-1表示秒-1)。该方法使得可能生产出与热敏的活性化合物相容的毫微乳剂，它可以含有油和具体的香料，其中含有脂肪物质，而不会使其变性。毫微胶囊本发明的毫微胶囊是专利申请EP O 447 318、EP O 557 489、EP O 780115、EP I 025 901、EP I 029 587、EP I 034 839、EP I 414 390、FR 2 830776、EP I 342 471、FR 2
16=848 879和FR 04/50057所描述的那些。毫微胶囊是具有油质芯和聚合物壳的芯-壳颗粒。上述的各个申请涉及各族聚合物以及各种获得它们的方法。胶囊的大小总是小于I μ m，且其可能具有小于SOnm的大小。这些颗粒可用层状液晶相包被，所述液晶相最常见由卵磷脂或聚二甲基硅氧烷共聚醇组成。包被必须由在与水接触时能够自发形成层状液晶相的两亲型脂质组成。向这种能够形成层状相的两亲型脂质加入能够赋予颗粒(毫微胶囊)正(电势的阳离子表面活性剂。 形成层状相的两亲型脂质与阳离子表面活性剂的重量比为99/1-75/25。可用的阳离子表面活性剂如下文中所列。有机颗粒本发明的有机颗粒是固体毫微球体(nanosphere),其不具有内腔,可通过各种方法形成(在水中分散、毫微沉淀(nanoprecipitation)、微乳剂等)，并且由至少一种聚合物或者至少一种共聚物，或者它们的混合物组成。由于聚合物或共聚物是阳离子的，或者由于它(们)是非离子的且使用了如下文所述的阳离子表面活性剂，所以颗粒是阳离子的，具有上文限定的 电势。阳离子表面活性剂的量相对于聚合物为0-25%。无机颗粒本发明的阳离子无机颗粒举例来说，可以基于硅石、Ti02、Zn0、氧化铝等。例如，可以提及如Nalco公司的Nanomer 2颗粒的水中胶体分散体中的氧化招颗粒。Clariant和 Grace也提供这种类型的颗粒。可用于制备本发明的阳离子型颗粒的阳离子表面活性剂可根据本发明使用的阳离子表面活性剂在下文列举，该列举是非限制性的。阳离子两亲型脂质优选选自季铵盐和脂肪族胺及其盐。季铵盐举例来说为-具有如下式(IV)的那些
权利要求
1.组合物，其包含至少一种选自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的双链RNA寡核苷酸，所述寡核苷酸与大小小于或等于I μ m、ζ电势为10-80mV的阳离子型颗粒缔合。
2.根据权利要求I的组合物，其特征在于该寡核苷酸通过在2’-位置添加-O-甲基基团而被修饰。
3.根据权利要求I或2的组合物，其特征在于该双链RNA寡核苷酸存在的浓度小于或等于100 μ M。
4.根据权利要求1-3任一项的组合物，其特征在于该阳离子型颗粒选自表面活性剂胶束、嵌段聚合物胶束、非离子和阳离子表面活性剂脂质体、非离子表面活性剂微囊、油质体、 毫微乳剂颗粒、毫微胶囊、有机颗粒或无机颗粒。
5.根据权利要求1-4任一项的组合物，其特征在于该阳离子型颗粒的大小小于或等于 500nm。
6.根据权利要求1-5任一项的组合物，其特征在于该阳离子型颗粒的大小小于或等于 300nmo
7.根据权利要求1-6任一项的组合物，其特征在于该阳离子型颗粒是非离子两亲型表面活性剂和阳离子表面活性剂形成的胶束。
8.根据权利要求1-6任一项的组合物，其特征在于该嵌段聚合物胶束选自阳离子两亲型嵌段聚合物胶束、非离子两亲型嵌段聚合物和阳离子两亲型嵌段聚合物形成的胶束以及非离子两亲型嵌段聚合物和阳离子表面活性剂形成的胶束。
9.至少一种选自SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、 45、46、47或48的序列的双链RNA寡核苷酸在抑制酪氨酸酶表达中的用途。
10.至少一种选自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的双链RNA寡核苷酸在抑制酪氨酸酶表达中的用途，其特征在于所述的寡核苷酸与大小小于或等于I μ m、ζ电势为IO-SOmV的阳离子型颗粒缔合。
11.根据权利要求9或10的用途，作为用于皮肤的漂白剂和/或作为抗褐变剂。
12.根据权利要求9-11任一项的用途，用于预防形成和/或消除色素形成斑，和/或老年斑，和/或用于增亮和/或漂白褐色皮肤和/或使褐色皮肤颜色均匀。
13.至少一种选自SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的双链RNA寡核苷酸在制备用于皮肤脱色的组合物中的用途。
14.至少一种选自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、 44、45、46、47或48的序列的双链RNA寡核苷酸在制备用于皮肤脱色的组合物中的用途，其特征在于所述的寡核苷酸与大小小于或等于I μ m、ζ电势为IO-SOmV的阳离子型颗粒缔
15.根据权利要求14的用途，其特征在于该组合物用于治疗特发性黑斑病、妊娠或者oestro-progestin避孕相关的着色过度、偶发性着色过度、由白斑病和/或白癜风引起的着色过度。
16.用于漂白和/或增亮肤色和/或使褐色皮肤颜色均匀的化妆方法，其包括局部施用至少一种选自 SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 或48的序列的双链RNA寡核苷酸。
17.用于漂白和/或增亮肤色和/或使褐色皮肤颜色均匀的化妆方法，其包括局部施用至少一种选自 SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 或48的序列的双链RNA寡核苷酸，其特征在于所述的寡核苷酸与大小小于或等于I μ m、ζ 电势为10-80mV的阳离子型颗粒缔合。
18.根据权利要求16或17的方法，其特征在于所述的寡核苷酸以小于或等于100μ M 的浓度配制在局部组合物中。
19.根据权利要求16-18任一项的方法，其特征在于局部施用前进行选自剥离、化学去皮、机械皮肤磨擦术、施用一种或多种具有脱脂效果的溶剂以及用去污剂发泡产品清洁皮肤的皮肤预处理。
20.根据权利要求16-19任一项的方法，其特征在于局部施用后进行封闭的后处理。
全文摘要
本发明涉及抑制酪氨酸酶表达的双链RNA寡核苷酸。本发明涉及新的用于降低酪氨酸酶表达的双链RNA寡核苷酸，其在化妆和/或药学目的上的用途，以及它与大小小于或等于1μm、ζ电势为10-80mV的阳离子型颗粒的缔合。
文档编号C12N15/113GK102579274SQ201210065389
公开日2012年7月18日 申请日期2006年9月20日 优先权日2005年9月21日
发明者C·科林-迪詹戈恩, J·-T·斯蒙纳特 申请人:莱雅公司