专利名称：一种具抗前列腺癌作用的鱼骨胶原多肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及到ー种天然产物提取领域，尤其是一种采用生物酶学法制备鱼骨中的胶原多肽的方法。
背景技术：
目前，提取胶原多肽的原料以牛、猪等陆产动物的皮、骨为主，数量有限，特别是当受到各种疫情及疾病影响时，胶多蛋白及多肽的安全性受到严重的质疑。而水产动物的皮、骨等含有丰富的胶原蛋白，是安全的胶原蛋白及多肽的来源。鱼骨中蛋白质90%为胶原、骨胶原及软骨素(酸性粘多糖)，有增强皮下细胞代谢，延缓衰老的作用。骨蛋白中氨基酸含量丰富，含有构成蛋白质的所有氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸。提取胶原蛋白及多肽所采用的方法有酸法、碱法及酶法，但大量的酶法提取前都 采用一部分的酸或是碱对原料进行预处理，从而导致生产过程中大量的盐离子溶液的后续处理及残留，影响生产效率及产品性能。采用生物酶法提取制备骨中的胶原多肽主要把握酶解的pH，时间，温度，料液比对酶解过程的影响。本实验采用复合风味蛋白酶，多个水解位点，在2-3h内，对骨中的胶原蛋白的多个位点进行定向切断，将大分子的胶原蛋白分解为小分子片段的胶原多肽分子。此方法对鱼骨的处理，充分提高了鱼骨废弃物的附加值，既可变废为宝，又可保护环境，充分实现环保型生产。
发明内容
本发明的目的在于开发具有抑制前列腺癌的鱼骨胶原多肽。以马面鱼骨鱼骨为原料，采用生物酶工程法，将鱼骨中的骨胶原蛋白通过复合的风味蛋白酶的作用，在最适宜的酶解条件下，制取骨胶原多肽。本发明的有益效果和功能活性作用在于1、通过本发明的鱼骨胶原蛋白粉末对前列腺PC-3癌细胞的体外凋亡实验，结果表明，该鱼骨胶原粉末对前列腺PC-3癌细胞有显著的抑制作用。且具有明显的量效关系，剂量为20μ g/ml、50l·! g/ml、100l·! g/ml，抑制率分别为0.3.8^.67.3 ^ 2、本发明的黄酮粉末通过荧光分析，表明对转录因子NF-κ B活力有显著的抑制作用，当黄铜粉末的剂量为lOOyg/ml时，荧光素酶的荧光強度仅为对照组的40%。3、本发明还具有材料资源丰富价格低廉，设备简便，产品提取率高，，在药用以及功能食品开发前景良好。
具体实施例方式为获得具有抗前列腺癌的鱼骨胶原多肽，本发明的具体实施方案如下鱼骨的前处理鱼骨洗浄，120°C高压20min ；酶解粉碎高压后的鱼骨及流出液，不调节pH，加入风味蛋白酶6%，以料液比为2 I补水，温度55-60°C，搅拌、酶解。2-3h后，90°C灭酶10min，8000转离心15min，分离过滤。鱼骨胶原多肽溶液经过冷冻真空干燥12h，得率为5 %，收集粗鱼骨胶原多肽粉末。鱼骨胶原多肽的抗前列腺癌实验结果与现有技术相比，本发明的优点与有益效果是本发明采用具有以下特点酶源稳定，低成本，エ艺简单，操作方便，设备投资少，提取时间短，提取温度低，一次性提取率高，不使用任何盐溶液对原料进行预处理，操作环境友好等，适合エ业化生产。
权利要求
1.一种具有抗前列腺癌作用的鱼骨胶原多肽，其特征在于鱼骨经酶解得到酶解液，过滤后经冷冻干燥制得鱼骨胶原多肽粉末。
2.按权利要求I所述的鱼骨，其特征在于其为马面鱼骨。
3.一种具有抗前列腺癌作用的鱼骨胶原多肽制备方法，其特征在于以马面鱼骨为原料，经前处理后，粉碎后加入蛋白酶酶解，灭酶经离心过滤得酶解液，酶解液经冷冻干燥即得马面鱼骨胶原多肽粉末。
4.按权利要求3所述的制备方法，其特征在于所用酶为风味蛋白酶，酶解的工艺自然pH，加入风味蛋白酶6%，以料液比为2 I补水，温度55-60°C，搅拌、酶解2-3h。
5.按权利要求3所述的制备方法，其特征在于灭酶温度为90°C，时间10分钟，离心为8000转/分钟，时间为15分钟。
全文摘要
一种具有抗前列腺癌作用的鱼骨胶原多肽，此多肽采用生物酶工程法制得，属于天然产物的领域。此鱼骨胶原多肽具有强的抗氧化及抗癌效果。其制备过程是鱼骨洗净，120℃高压20到30min，保持自然状态下的pH为6.5左右，加入复合蛋白酶1％，料液比2∶1，提取温度55℃～60℃，提取时间2～3h，离心分离，即可得到鱼骨胶原多肽提取液。本发明涉及的骨胶原多肽，不添加任何的盐离子溶液，提取时间短，温度低，酶解液无苦味。本方法得到的鱼骨胶原多肽适合于科研实验及工业化生产，值得在食品保健品及化妆品行业推广。
文档编号C12P21/06GK102851346SQ20121035344
公开日2013年1月2日 申请日期2012年9月13日 优先权日2012年9月13日
发明者丁利君, 黄聪华, 杨露, 庞文聪 申请人:广东工业大学